鼻咽癌患者血清细胞角蛋白19片段检测的临床价值

刘玉　王朱健　曹文俊　宋新貌　王胜资

全世界约80%的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)患者在中国，华南地区发病率可达(20～30)/10万[1-3]。NPC具有高度恶性及广泛转移的特点，Ⅰ期和Ⅱa期的患者5年生存率可达90%和84%，但是晚期患者生存率只有50%～70%[4]。早期诊断、早期治疗是提高NPC患者生存率的重要因素，然而早期症状隐匿，容易误诊、漏诊[5]。尽管近年来NPC的治疗取得了进步，但是每年仍有很多NPC患者复发和转移导致治疗失败。临床上迫切需要一种可靠而方便的肿瘤标志物来帮助早期诊断和提示缓解复发。本研究检测NPC患者及对照人群血清细胞角蛋白19片段(cytokeratin-19 fragment,CYFRA21-1)，探讨CYFRA21-1对NPC的诊断及随访价值。

1　资料与方法

1.1资料病例纳入标准：①有NPC临床症状和体征，如颈部淋巴结肿大等；②经病理检查确诊为NPC；③没有其他影响试验的肿瘤和疾病。病例排除标准：①孕产妇、哺乳期妇女；②肝、肾功能障碍；③心功能不全；④肿瘤及其他疾病患者。

2013年7月～2016年7月在本院就诊，经鼻咽活检病理确诊未经治疗的NPC患者336例(观察组)，其中男性244例、女性92例；年龄22～74岁，平均(53±12)岁，中位年龄55岁。同期健康体检人群208例(对照组)，其中男性154例、女性54例；年龄22～77岁，平均(53±10)岁，中位年龄42岁。2组间年龄(t=0.316,P=0.316)和性别(χ2=0.132,P=0.717)差异均无统计学意义。观察组和对照组均抽取静脉血，并随机随访100例患者，于治疗前及治疗后3个月各收集静脉血1次，其中随机挑选10例分别在放疗前及放疗5、10、15、20、25、30次时收集静脉血。

1.2方法采集患者静脉血4 mL于促凝管，30 min凝固后以3 000 转/min离心10 min后分离血清标本检测。CYFRA21-1采用电化学发光法，仪器为瑞士罗氏Cobas e601全自动电化学发光免疫分析仪，试剂盒为罗氏CYFRA21-1配套试剂。

1.3统计学处理数据复核后录入Excel 2007数据库，采用SPSS 13.0软件包进行数据处理，Excel绘制趋势图，GraphPad Prism绘制散点图。采用Kolmogorov-Smirnoff法对数据进行正态性检验。连续变量采用均数±标准差表示，2组间分类变量比较采用四格表χ2检验，2组间连续变量比较采用独立样本t检验及配对t检验。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve， ROC曲线)进行诊断分析。P<0.05认为差异具有统计学意义。

2　结果

观察组血清CYFRA21-1水平为(4.12±3.23)ng/mL，高于对照组的(2.15±0.94)ng/mL，差异有统计学意义(t=10.507,P<0.001)。2组CYFRA21-1水平分布见图1。CYFRA21-1的ROC曲线见图2，临界值、灵敏度、特异度、曲线下面积分别为2.61、63.10%、79.33%、0.765(P<0.001，95%CI：0.726～0.804)。

图1.　NPC患者及健康对照者血清CYFRA21-1水平

图2.　NPC患者血清CYFRA21-1 ROC曲线分析

100例观察组患者治疗前的CYFRA21-1水平为(4.10±3.83)ng/mL，治疗后为(2.93±3.61)ng/mL，显著下降(t=2.218,P=0.028)。以2.61 ng/mL为临界值，则治疗前阳性率为64.00%，治疗后阳性率为41.00%，阳性率显著降低(P=0.001 8)。10例NPC患者在放疗前及放疗5、10、15、20、25、30次的CYFRA21-1平均值分别为2.88、3.43、2.82、1.75、1.67、1.26、1.48 ng/mL。图3显示10例NPC患者在放疗前及放疗5、10、15、20、25、30次后的血清CYFRA21-1平均水平，CYFRA21-1随放疗次数增加而呈下降趋势。

图3.　NPC患者放疗前后血清CYFRA21-1水平变化趋势

3　讨论

细胞角蛋白属于中微丝(intermediate filament)蛋白家族，主要分布于上皮细胞，是角质细胞中的主要骨架蛋白，主要功能是维持上皮细胞的完整性和延续性。细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)主要分布于层状或鳞状上皮细胞质中，正常情况下体内细胞无表达或低表达。在恶性上皮细胞癌中，激活的蛋白酶加速了细胞的降解，细胞内的CK19释放入血，使其在组织血液中的浓度升高[6]。CYFRA21-1是CK19的可溶性片段，因此血清中CYFRA21-1水平的升高可提示鳞状细胞癌的分化趋势。在头颈部肿瘤、食管癌、宫颈癌等很多上皮源性肿瘤中，血清CYFRA21-1可作为预后的一个指标[7-9]。在肿瘤的临床诊断方面，血清CYFRA21-1检测已应用于非小细胞性肺癌[10]、卵巢癌[11]等的诊断和分期。在NPC的治疗、预后中尚缺少可靠的肿瘤标志物作为预测指标，CYFRA21-1是否可以反映NPC患者的病情进展程度及治疗方案的有效性，需要做进一步的深入研究。

本研究中发现，336例NPC患者治疗前的血清CYFRA21-1水平明显高于对照组，并根据ROC曲线分析得出最佳界限值为2.61，曲线下面积为0.765，以此为判断值则灵敏度为63.10%，特异度为79.33%。赵惠柳等[12]和周青等[13]发现血清CYFRA21-1可以作为NPC诊断的重要指标，赵萍萍等[14]和Zhu等[15]同样发现血清CYFRA21-1水平对于NPC的诊断十分有价值。因此，血清CYFRA21-1对NPC具有一定的诊断价值，可作为早期诊断NPC的一个补充指标，与其他头颈部肿瘤标志物联合检测可能具有更高的诊断作用，有待于进一步研究证实。

同时我们发现，NPC患者治疗后CYFRA21-1水平明显低于治疗前水平。此外，NPC患者在放疗前及放疗5、10、15、20、25、30次后的血清CYFRA21-1平均水平，随放疗次数增加而呈下降趋势。孙文洁等[16]报道NPC患者治疗后血清CYFRA21-1明显低于治疗前。林月好等[17]也曾报道血清CYFRA21-1水平随放疗后肿瘤的消亡而下降。我们的结果与之前的报道相符合。CYFRA21-1在正常对照组的水平高于治疗后的患者，原因与放疗可能影响患者正常表皮细胞骨架的形成有关。这些数据显示CYFRA21-1与NPC疾病的进展有关。10例连续放疗的随访患者临床均表现为持续缓解。在治疗过程中，由于肿瘤组织受到抑制、坏死，释放CYFRA21-1入血，导致治疗初期的一过性升高，之后随着肿瘤的缩小，病灶变小，血清CYFRA21-1水平也逐渐降低，因此血清CYFRA21-1可作为动态观察NPC的一个指标。本研究的随访例数较少，且未能跟踪到复发、转移病例，有待于进一步收集病例来证实CYFRA21-1对NPC治疗预后的临床价值。

综上所述，本研究表明血清CYFRA21-1水平可作为一种有效的肿瘤标志物，有助于NPC的诊断及治疗监测。

[ 1 ]Colaco RJ, Betts G, Donne A, et al. Nasopharyngeal carcinoma: a retrospective review of demographics, treatment and patient outcome in a single centre[J]. Clin Oncol (R Coll Radiol) ,2013, 25(3): 171-177.

[ 2 ]Parkin DM, Bray F, Ferlay J, et al. Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin, 2005,55(2): 74-108.

[ 3 ]Wu SY, Wu YH, Yang MW, et al. Comparison of concurrent chemoradiotherapy versus neoadjuvant chemotherapy followed by radiation in patients with advanced nasopharyngeal carcinoma in endemic area: experience of 128 consecutive cases with 5 year follow-up[J]. BMC Cancer,2014,14:787.

[ 4 ]Rottey S, Madani I, Deron P, et al. Modern treatment for nasopharyngeal carcinoma: current status and prospects[J]. Curr Opin Oncol, 2011, 23(3): 254-258.

[ 5 ]林益和.鼻咽癌未能及时诊断的原因分析[J].中国眼耳鼻喉科杂志,2005,5(3):188.

[ 6 ]Tas F, Aydiner A, Topuz E, et al. Utility of the serum tumor markers: CYFRA 21-1, carcinoembryonic antigen (CEA), and squamous cell carcinoma antigen (SCC) in squamous cell lung cancer[J]. Exp Clin Cancer Res,2000,19(4):477-481.

[ 7 ]Wang YX, Hu D, Yan X.Diagnostic accuracy of Cyfra 21-1 for head and neck squamous cell carcinoma: a meta-analysis[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2013,17(17): 2383-2389.

[ 8 ]Wakatsuki M, Suzuki Y, Nakamoto S, et al. Clinical usefulness of CYFRA 21-1 for esophageal squamous cell carcinoma in radiation therapy[J]. J Gastroenterol Hepatol ,2007, 22(5): 715-719.

[ 9 ]Davlaar EM, van de Lande J, von Mensdorff-Pouilly S, et al. A combination of serum tumor markers identifies high-risk patients with early-stage squamous cervical cancer[J]. Tumour Biol, 2008, 29(1): 9-17.

[10]高沁怡,李亚明,尾森春艳. 肿瘤标记物Cytokeratin 19 诊断肺癌的临床价值[J]. 中国医科大学学报,1999,28(4):293-294.

[11]王建英,程继新,苏杏满,等.血清CYFRA21-1诊断卵巢恶性肿瘤的研究[J]. 实用妇产科杂志,2003,19(3):175-177.

[12]赵惠柳,黄文成,黄昭东,等.肿瘤标记物CYFRA21-1诊断鼻咽癌的临床价值研究[J].现代肿瘤医学,2004,12(4):289-290.

[13]周青,黄玲莎,李美琴,等.SCCAg与CYFRA21-1联合检测在鼻咽癌中的诊断价值[J].现代肿瘤医学,2015,23(8):1065-1067.

[14]赵萍萍,邹容,屈元姣,等.Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2在鼻咽癌患者血循环的表达及临床意义[J].第三军医大学学报,2012,34(13):1289.

[15]Zhu WQ, Yu JM, Sun XD, et al. Serum CYFRA21- 1 as a prognostic marker for patients with undifferentiated nasopharyngeal carcinoma[J]. Biomarkers,2010,15(7): 602-607.

[16]孙文洁,金冶宁.鼻咽癌患者血浆EBV-DNA、血清CYFRA21-1、TSGF的检测及临床应用[J].现代肿瘤医学,2008,16(4):537-540.

[17]林月好,陈巧伦,吴兴平.血清学指标CK19-2G2、CyFra21-1及EBV VCA-IgA/EA-IgA与鼻咽鳞癌诊断和近期疗效的价值分析[J].临床医学工程,2014,21(10):1305-1308.