甲硝唑、克霉唑对精斑混合斑前列腺特异抗原检验的影响

刘振平，潘之侃，翟仙敦，傅燕芳，吴微微

1962年，Garaway首先提出某些治疗药物可以影响体液中多种成分浓度的检测，这个问题受到了越来越多生化学家、检验工作者及临床医师的广泛关注。对检验结果有影响的药物，目前已达40 000多种[1]。

前列腺特异抗原(prostate-specific antigen,PSA)检验是法医精斑确证试验的首选方法。性侵案件中，由于受害人的随机性，不可避免存在受害人有阴道用药情况。为验证这些药物是否对PSA检验结果产生影响，实验室在已知PSA浓度的精斑混合液中加入常用阴道药物甲硝唑、克霉唑，观察加药前后PSA测量值有无变化，现报道如下。

1　材料与方法

1.1药物分别将药物粉碎，使用天平称重，在0.01～0.08 g之间设置5个梯度，置于eppendorf管中备用，本次实验所用药物主要技术参数，摘自药物使用说明，见表1。

表1　两种实验用药物一般情况

1.2仪器全自动化学发光免疫分析仪(雅培i2000，美国)；天平(赛多利斯CP225D，德国)；抗体(雅培公司，试剂批号：64214FN00)；PSA金标试剂条(biowin，符合GA766-2008)

1.3已知浓度精斑制备日常受理案件中已知人精斑混合斑，超纯水稀释后使用化学发光免疫分析仪对PSA定量，终浓度分别为124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1两种。

1.4方法在装有不同量的克霉唑、甲硝唑粉剂的eppendorf管中，分别加入浓度为124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1的PSA稀释液500 μL，药物终浓度为0.022 6～0.153 2 g·mL-1，37 ℃孵育30 min，期间每隔5 min震荡混匀。离心取上清200 μL，化学发光免疫分析仪定量检测；同时进行金标试剂条PSA检验。

2　结果

已知浓度的PSA溶液加入药物后检测，克霉唑最低浓度为0.024 6 g·mL-1，最高浓度为0.152 4 g·mL-1；甲硝唑最低浓度为0.022 6 g·mL-1，最高浓度为0.153 2 g·mL-1。PSA定量值明显下降，且下降值和加入的药物量呈正相关，两种药物相比，克霉唑下降更明显。金标法PSA检验与定量检验结果下降趋势一致。 PSA定量值为7.399～8.141 ng·mL-1时，金标试剂条检验为弱阳性，PSA定量值为4.790 ng·mL-1时，金标试剂条表现为阴性，见表2。

表2　已知精斑与药物混合后PSA检验结果

3　讨论

PSA系成熟的男性前列腺及尿道周围腺体上皮细胞产生的丝氨酸蛋白酶，也称为E1蛋白、γ-精浆蛋白、P30、PA等[2]，具有高度的器官特异性和种属特异性，能正确区别动物精斑与人类精斑[3]，尤其适用于输精管结扎术后及精子缺乏个体的精斑检验[4-5]。因此，对混合斑进行PSA检验为大多数法医物证实验室精斑确证实验的首选方法，并可根据PSA检测结果制定下一步的检验方案[6]。

PSA试验阴性，表示待测样品中不存在精斑[3]。但在法医实践中，PSA试剂条阴性却检出男性DNA分型的现象时有报道[7-11]，杨思思等报道分析水中尸体PSA试剂条阴性但检出男性精子DNA分型的原因考虑为PSA水中溶解、腐败[8]，王智等考虑为被女性阴道内的蛋白酶破坏[11]，并未对形成原因做进一步实验性验证。作者所在实验室也存在上述现象，通过对本地案件回访发现，部分受害人案发前后有阴道用药的行为。

为进一步验证阴道用药与PSA测量值的相关性，本研究采用将药物加入到已知浓度的精斑中，观察加药前后PSA定量值是否有变化。药物选用甲硝唑、克霉唑(主要是因为阴道炎是妇科阴道类疾病中最为常见的疾病[12]，对上述疾病治疗通常采用甲硝唑、替硝唑类栓剂、克霉唑片剂等类型药物抗治疗)。PSA定量检测浓度在0.001～1 000 ng·mL-1均能正确进行定量。为便于观察药物作用前后定量结果的不同和验证金标PSA试剂条的灵敏度，将已知人精斑混合斑稀释成高低两个浓度，分别为124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1两种。药物使用量在0.01～0.08 g之间，明显低于说明书中的单次用药量。试验过程则模拟阴道用药溶解后直接与PSA接触的方式，将药物粉碎后直接加入到含有人PSA的精斑浸泡液中，37 ℃孵育30 min，期间适时对混合液进行摇匀。

本研究结果，甲硝唑、克霉唑可以影响精斑混合斑中PSA浓度的检测，加入药物后，定量检测值明显下降。分析原因可能为加入的药物使前列腺特异抗原结构或者带有荧光标记的抗体发生结构改变，使得带有荧光标记的抗体与抗原不能结合，定量值下降；PSA定量值为7.399～8.141 ng·mL-1时金标试剂为弱阳性，PSA定量值为4.790 ng·mL-1时金标试剂为阴性，分析认为金标试剂条灵敏度约5 ng·mL-1。

本实验中，定量值为8.737 ng·mL-1的低浓度的PSA溶液，加入实验药物后PSA金标试剂条均表现为阴性，但定量法均能够检出。在本实验室实际工作中，在对1例未知名女尸体阴道拭子进行检验时金标试剂条阴性，却检出微量精子DNA分型，后通过定量补测PSA浓度为0.491 ng·mL-1。因此，在法医实践中，使用金标法试剂条检验精斑时，如存在药物等影响PSA的因素，检验时应采取各种措施提高检材浸泡液中的PSA浓度，如增加检材量、减少浸泡液体积、延长浸泡时间等，避免PSA浓度低于试剂条灵敏度造成阴性而漏检。为了更客观、真实地描述检材中的PSA量，有能力的实验室应引进准确性更高的现代化定量检测设备，出具鉴定文书时，同时对检测方法的灵敏度进行描述。

此外，实验室还对市售妇科洗液妇炎洁与已知浓度的PSA溶液进行混合后定量检测，结果显示也可导致定量值下降，考虑到洗液大部分为中药配方且成分复杂，其对PSA的影响实验室将进一步研究并再做报道。

综上，阴道药物甲硝唑、克霉唑可使精斑混合斑中的PSA检测值下降，金标试剂条表现为阴性，在法医实践中应当引起重视。对强奸案件进行受理检验时，除详细了解案情、作案经过外，还应对受害人的身体状况进行了解，详细询问受害人案发前后有无妇科用药、具体用药种类、具体洗液类型等，以免漏检，并为案件的侦查起诉提供更多信息。

参考文献：

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