Msx2.topoⅡ-a.HPV16在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中的表达及临床意义

唐强 张峻峥 段炼 熊玉玲 粱绍伟 范勇 王智勇

（1重庆市合川区人民医院耳鼻咽喉头颈外科 重庆 401520）（2海口市人民医院耳鼻咽喉科 海南 海口 570100）

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(sinonasal inverted papilloma,SNIP)是鼻腔鼻窦常见的黏膜上皮源性良性肿瘤，具有侵袭性生长，易复发及易恶变的特点。本研究着重从INP、SNIP、NSCC3种病理形态出发,采用RT-PCR法检测Msx2,topoⅡ-a及HPV16在3种组织中的表达情况来探讨3个因子在SNIP恶变发生发展过程中的相关性和作用,为临床治疗提供理论依据。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选取2011—2013年在我科收治患者的原发病灶新鲜组织标本33例：INP10例,男5例,女5例；平均年龄48岁。SNIP13例：男9例，女4例，平均年龄51岁。其中SNIP组又分不典型增生轻度5例，不典型增生中度4例及不典型增生重度4例。NSCC10例：男8例，女2例，平均年龄56岁。所有组织均保存于RNA保存液中并放入-80℃冰箱中。

1.2 方法

采用荧光定量PCR仪7000型(美国ABI公司)进行RT-qPCR实验,实时荧光定量扩增曲线得到Ct值。步骤如下：（1）RNA提取：采用Trizol试剂提取细胞RNA：将新鲜组织、TRIzol 1ml放入匀浆器，冷冻匀浆，置Eppendorf管中移至室温状态5min。与0.2ml氯仿混合并充分震荡，4℃放置10min，12000 r/min离心7min；吸取上清400υl，加入异丙醇400υl，4℃放置10min，12000r/min离心7min；弃上清，加入1ml75%的乙醇，4℃静止10min，12000r/min离心10min，弃上清，瞬时离心20s，静置10min（于超净工作台），用无酶水溶解RNA。（2）RT-PCR检测目的基因的表达：反应体系为20ul在PCR管中加入待测基因上游及下游引物，cDNA模板SYBRGreen试剂，将配制好的PCR反应溶液置于Realtime PCR仪上进行PCR扩增反应，过程如下：95℃2mim预变性，95℃变性15s，60℃退火40s，扩增45个循环。所有样品均设3个平行管，重复3次。

1.3 统计学分析

2.结果

2.1 3组病变组织中Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表达

Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表达程度，均为NSCC组＞SNIP组＞INP组,且3组之间差异显著(P＜O.05)。详见表1。

2.2 Msx2.topoⅡ-a.HPV16在SNIP三组不同病理间的表达

在SNIP三组不同的病理形态分组中Msx2.topoⅡ-a.HPV16均有表达，表达程度重度不典型增生组＞中度不典型增生组＞轻度不典型增生组，两两比较差异显著(P＜O.05)。详见表2。

表1 3组鼻腔鼻窦病变组织中Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表达

表2 SNIP不典型增生程度间Msx2.topoⅡ-a.HPV16的表达

3.讨论

本研究结果显示在INP，SNIP，NSCC三组中，Msx2.topoⅡ-a.HPV16三种因子表达程度为NSCC组＞SNIP组＞INP组，且在SNIP中，表达情况也为重度＞中度＞轻度，说明在三种基因的表达水平与组织的恶性程度密切相关。

HPV16是目前公认的肿瘤恶变因子，Msx2是可调控细胞增殖、凋亡的基因，topoⅡ-a是调节细胞核酸功能的重要基因。故Msx2和topoⅡ-a反映了SNIP的增殖速度及恶性程度的生物学行为，可作为新的评判SNIP发展及预后的参考指标，通过对这2种指标进行检测，有助于判断SNIP的复发，恶变潜能及预后，在临床干预及药物的靶向治疗等方面具有重要意义。

【参考文献】

[1]张峻峥,杨一兵,汤勇,吴锡芳,丛林海,阮标.Msx2、topoⅡ-α、HPV16及VEGF在鼻内翻性乳头状瘤中的定量及意义[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2014,28(23)：1819-1823.