阿勒泰羊肌肉组织的免疫组化分析

彭新荣，刘晨曦，玛依拉，刘明军

(新疆畜牧科学院生物技术研究所，新疆乌鲁木齐 830000)

阿勒泰羊俗称福海大尾羊，是新疆著名的肉脂兼用型地方品种，具有肉质细嫩、耐粗饲、抗病力强、适应高寒山区气候等优点，目前已经遍布新疆各地。但是，随着市场对低脂高蛋白羊肉需求的增加，阿勒泰羊屠宰率低，胴体脂肪含量高。Texel羊的原产地为荷兰，为短毛型肉用绵羊品种，其瘦肉率和屠宰率均显著高于阿勒泰羊。用Texel羊为父本，以阿勒泰羊为母本进行杂交改良后，获得的杂交F1后代不仅保留了阿勒泰羊肉质细嫩的特点，而且显著提高了屠宰率和瘦肉率，深受广大牧民的喜爱，具有较高的经济价值和推广价值。笔者所在实验室应用同期发情和人工受精技术分别获得了相同出生月龄的阿勒泰羊、Texel羊和F1后代群体，并在其8月龄时集中进行了屠宰试验，获得了不同品种肉羊肌肉品质差异的表型数据和样品组织。但是，目前还缺乏肉羊肌纤维类型的免疫学分析。依据肌纤维特有的4种肌球蛋白重链(Myosin heavy chain，MyHC)的异构体可以将肌纤维对应分为4种不同类型：Ⅰ型、ⅡA型、ⅡB型和ⅡX型。MyHC Ⅰ型为慢肌纤维，慢肌纤维含有更多的线粒体和肌球蛋白，因而外观呈红色，又称红肌纤维。MyHCⅡB型为快肌纤维，主要以糖酵解代谢为主，又称白肌纤维。另外一类中间型ⅡX肌纤维，其特征介于快肌纤维和慢肌纤维中间。笔者对阿勒泰羊、Texel羊和F1后代不同肌肉组织的MyHC Ⅰ型氧化纤维含量进行了免疫组化分析。

1 材料与方法

1.1试验材料8 月龄 Texel 羊、阿勒泰羊和杂交F1代肉羊肌肉组织样品由新疆畜牧科学院生物技术研究所提供。每个品种随机选取3只肉羊的肌肉组织标本，样品采集部位分别为肉羊腿部的半腱肌和半膜肌。

1.2试验方法将新鲜采集的肌肉组织块放入4%中性多聚甲醛固定液内固定过夜，对固定好的组织块进行修块、清洗、酒精脱水和石蜡包埋。包埋好的肌肉组织块沿着肌纤维纹理横切，切片厚度5 μm。石蜡包埋和H.E.染色(苏木精-伊红染色)参照常规石蜡包埋步骤进行。免疫组化试验参照福州迈新试剂盒(DAB Detection Kit，kit-0017)说明书进行，免疫组化染色完成后再用苏木素复染肌纤维细胞核。免疫组化抗体选用肉羊慢肌纤维MyHC I抗体(Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody，ab11083)。应用显微镜对染色的肌肉样本进行观察，每张切片以肌束为单位，选定100根肌纤维为一个视野，测定每个视野中的MyHC I阳性肌纤维数，计算百分比。每张切片随机选取3个视野，取平均值，即为每个样品MyHCI阳性肌纤维百分比。

1.3数据处理应用Excel软件进行数据整理，应用卡方分析分别比较阿勒泰羊半腱肌和半膜肌中MyHC I阳性肌纤维与Texel羊和F1代的差异显著性。

2 结果与分析

2.1半腱肌H.E.染色结果对每个样品的肌肉组织首先进行H.E.染色，以更好地观察不同肉羊品种的肌肉组织学形态。其中，图1a、b、c分别为阿勒泰羊、F1代和Texel羊H.E.染色结果。每种肉羊的肌纤维之间界限比较清楚，肌细胞核和肌卫星细胞均环绕在细胞膜周围。与F1代和Texel羊相比，阿勒泰羊肌间组织更丰富，肌纤维界限明显。

2.2MyHCI免疫组化染色结果进一步对阿勒泰羊、F1代和Texel羊的不同肌肉组织(半腱肌和半膜肌)进行MyHC I免疫组化染色，结果见图2和图3。从图2和图3可以看出，不同来源的肌肉组织中均含有一定比例的MyHC I阳性肌纤维，不同品种肉羊半膜肌中的MyHC I型肌纤维比半腱肌更丰富。

2.3半腱肌和半膜肌MyHCI含量比较对阿勒泰羊、F1代和Texel羊半腱肌和羊膜肌中MyHC I含量进行了比较，结果见图4和图5。从图4可以看出，阿勒泰羊半腱肌中MyHC I含量为10.5%，与F1代和Texel羊均存在显著差异(P<0.05)。从图5可以看出，阿勒泰羊半膜肌MyHC I型肌纤维含量为26.0%，F1代半膜肌中MyHC I含量为17.3%，Texel羊MyHC I含量为11.2%，阿勒泰羊半膜肌MyHC I含量与F1代和Texel羊均存在显著差异。

注：a.阿勒泰羊；b.F1代；c.Texel羊Note：a.Altay mutton sheep；b.F1 hybrid；c.Texel sheep图1 不同品种肉羊半腱肌的H.E.染色结果(400×)Fig.1 H.E.staining results of semitendinosus in different varieties of mutton sheep(400×)

注：a.阿勒泰羊；b.F1代；c.Texel羊Note：a.Altay mutton sheep；b.F1 hybrid；c.Texel sheep图2 不同品种肉羊半腱肌中MyHC I的免疫组化染色结果(100×)Fig.2 Immunohistochemistry staining results of MyHC I in semitendinosus in different varieties of mutton sheep(100×)

注：a.阿勒泰羊；b.F1代；c.Texel羊Note：a.Altay mutton sheep；b.F1 hybrid；c.Texel sheep图3 不同品种肉羊半膜肌中MyHC I的免疫组化染色(100×)Fig.3 Immunohistochemistry staining results of MyHC I in the semi-membranous muscle in different varieties of mutton sheep(100×)

图4 不同品种肉羊半腱肌中MyHC I含量的比较Fig.4 MyHC I content in the semitendinosus in different varieties of mutton sheep

图5 不同品种肉羊半膜肌中MyHC I含量的比较 Fig.5 MyHC I content in the semi-membranous muscle in different varieties of mutton sheep

3 结论与讨论

影响肌纤维形成的因素主要包括营养因素和年龄因素[1-3]。应用人工受精技术和统一屠宰就是为了获得同一出生月龄的肉羊标本。另外，在饲养环境上采用统一标准的舍饲管理也避免了营养因素带来的偏差。该研究结果表明阿勒泰羊与F1代和Texel羊不同肌肉组织中MyHCⅠ型含量均存在显著差异。Texel肉羊瘦肉率和屠宰率均明显高于阿勒泰羊。研究表明，MyHCⅠ型和Ⅱ型肌纤维在肌间脂肪含量上存在显著差异，MyHCⅠ型肌间脂肪含量要高于Ⅱ型肌纤维，此外MyHCⅠ型肌纤维中三酰甘油高于Ⅱ型，磷脂比Ⅱ型纤维高30%[4]。改良后的F1代肉羊瘦肉率和屠宰率明显高于阿勒泰羊，但仍较好地保留了阿勒泰羊肉质细嫩的特点。免疫组化结果表明，改良后的F1代虽然MyHCⅠ型氧化肌纤维含量降低，与阿勒泰羊差异显著，但明显高于Texel羊。肌肉的产量主要由肌纤维数目和肌纤维横截面积决定，肌纤维体积适度的动物可生产出更多肉质好的肉产品[5]。大量研究表明，氧化型肌纤维有助于肌肉嫩度和多汁性的增加[6-8]，但是氧化型肌纤维横截面积小，肌间脂肪含量高，不利于瘦肉率和屠宰率的产出。因此，在肉羊品种选育上调整肌纤维中氧化肌纤维含量对增加肌肉产量和提高肌肉品质具有重要的参考价值。

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