配种时间对母羊妊娠期生殖激素与生长激素的影响

赵晓娥, 宋爱爱，孙念琴，张 静, 魏 强, 徐明辉，李延华,马保华*

(1. 西北农林科技大学 动物医学院/农业部动物生物技术重点实验室, 陕西 杨凌 712100;2. 许昌百益奶山羊养殖场, 河南 许昌 461000； 3. 富平县畜牧技术推广中心, 陕西 富平711700)

动物体内生殖激素对其生殖活动调控有重要作用，直接调控母畜的发情和排卵、生殖道内的生殖细胞的运行、胚胎附植以及怀孕和泌乳[1]。妊娠期间激素水平的动态变化对维持妊娠、胎儿的生长发育、及乳腺发育起重要作用。然而，在自然繁殖情况下，生殖激素存在季节性变化，这种季节性变化使动物处于相对固定的繁殖周期。研究表明，绵羊血液中FSH和LH的水平存在着明显的季节性变化，在春分时低，在夏至和秋分时明显升高[2-3]；滩羊P4分泌量秋冬季节显著高于春夏季节[2]。奶山羊在不同季节妊娠后，季节性变化是否引起妊娠母羊激素水平变化还不清楚。因此，本研究随机选择8月、10月、12月、翌年2月妊娠的关中奶山羊各10只，分别于配种后20 d、75 d、130 d及出现分娩症状时采集其静脉血，离心分离血清，采用ELISA试剂盒检测血清中雌激素(E2)、孕酮(P4)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体素(LH)、催乳素(PRL)和生长激素(GH)水平变化规律，为调控奶山羊的在不同季节配种提供内分泌方面的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及管理

试验选择年龄1.5～4岁体况良好关中奶山羊，无繁殖及传染性疾病，发情周期正常，于8月、10月、12月、翌年2月同期发情、配种处理；随机选择8月、10月、12月、翌年2月妊娠的关中奶山羊各10只，共40只。舍饲饲喂，常规管理。

1.2 试验方法

分别于试验羊妊娠后20 d、75 d、130 d及分娩时采集其静脉血， 2 000 r/min离心10 min，将分离的血清移入2 mL离心管中，-20 ℃保存。分别用生殖激素与生长激素ELISA试剂盒(上海邦奕生)对血清中的雌激素(E2)、孕酮(P4)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体素(LH)、催乳素(PRL)和生长激素(GH)水平进行测定，由上海邦奕生物科技有限责任公司代测。

1.3 数据处理

采用Excel软件和SPASS 17.0 软件的ANOVA模块对试验结果进行差异显著性统计和分析。数据统计后均以平均值(X)±标准差(SD)表示，P<0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间E2检测结果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出现分娩症状时静脉血中E2水平的ELISA检测结果如图1所示。由图1可见，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期间，静脉血中E2水平呈上升趋势，130 d后基本稳定。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d，75 d，130 d和分娩前外周血中E2浓度变化范围分别为17.45～18.43 ng/L，26.60～29.198 ng/L， 48.79～52.90 ng/L，46.63～53.63 ng/L，在同一妊娠阶段，不同月份妊娠母外周血中E2水平无显著性差异(P>0.05)。表明母羊不同妊娠月份对其E2水平没有影响。

2.2 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间P4检测结果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出现分娩症状时静脉血中P4水平的ELISA检测结果如图2所示。由图2可以看出，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期间，静脉血中P4水平呈缓慢上升趋势，分娩时，急剧下降。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中FSH浓度的变化范围分别为4829.92～5358.40 pmol/L， 5128.26～6123.54 pmol/L， 5466.99～6305.63 pmol/L， 1899.39～1938.86 pmol/L，8月份妊娠母羊在妊娠的75 d，P4水平显著高于10月份妊娠母羊(P<0.05)，其余妊娠阶段，不同月份妊娠母羊外周血中P4水平无显著性差异(P>0.05)。说明母羊妊娠月份不同对其P4水平有影响，但影响较小。

图1 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间E2水平Fig.1 The E2 levels of pregnant dairy goats in different months

图2 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间P4水平Fig.2 The P4 levels of pregnant dairy goats in different months

2.3 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间FSH检测结果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出现分娩症状时静脉血中FSH水平的ELISA检测结果如图3所示。由图3可见，妊娠母羊在妊娠期间，静脉血中FSH水平一直呈缓慢下降趋势。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中FSH浓度的变化范围分别为6.60～6.99 IU/L，6.04～6.51 IU/L，5.91～6.77 IU/L，4.45～5.57 IU/L，2月份妊娠母羊在妊娠的130 d， FSH水平显著低于10月份妊娠母羊(P<0.05)，分娩前，2月份和12月份妊娠母羊外周血中FSH水平高于8月份和10月份妊娠母羊，差异显著(P<0.05)。说明母羊妊娠月份不同对其FSH水平有一定的影响，特别是妊娠后期影响较大。

2.4 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间LH检测结

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出现分娩症状时静脉血中LH水平的ELISA检测结果如图4所示。由图4可见，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期间，静脉血中LH水平一直呈下降趋势。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中LH浓度的变化范围分别为200.53～207.09 pg/L，154.89～185.62 pg/L，142.33～152.28 pg/L，155.85～175.47 pg/L，2月份妊娠母羊在妊娠的75 d，LH水平显著高于12月份妊娠母羊(P<0.05)，其余妊娠阶段，不同月份妊娠母羊外周血中LH水平无显著性差异(P>0.05)。说明母羊妊娠月份不同对其LH水平有影响，但影响不大。

2.5 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间PRL检测结果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出现分娩症状时静脉血中PRL水平的ELISA检测结果如图5所示。由图5可见，8月、10月、12月、2月妊娠母羊妊娠期间，静脉血中PRL水平一直呈缓慢上升趋势。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中PRL浓度的变化范围分别为367.37～411.29 ng/L，432.92～457.14 ng/L，469.74～517.33 ng/L，528.87～626.88 ng/L，在同一妊娠阶段，不同月份妊娠母羊外周血中PRL水平无显著性差异(P>0.05)。说明母羊妊娠月份不同对其PRL水平没有影响。

2.6 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间GH检测结果

奶山羊在不同月份妊娠后20 d、75 d、130 d 、出现分娩症状时静脉血中GH水平的ELISA检测结果如图6所示。由图6可见，8月、10月、12月、翌年2月妊娠母羊在妊娠期间，静脉血中GH水平一直呈缓慢上升趋势。不同月份妊娠母羊于妊娠的20 d、75 d、130 d和分娩前外周血中FSH浓度的变化范围分别为15.55～17.99 μg/L， 18.15～19.78 μg/L ，22.38～25.22 μg/L，24.29～28.71 μg/L， 2月份妊娠母羊在分娩前， GH水平显著低于其他月份妊娠母(P<0.05)羊，其余妊娠阶段，不同月份妊娠母羊外周血中GH水平无显著性差异(P>0.05)。说明母羊妊娠月份不同对其GH水平影响不大，仅在分娩时有影响。

图3 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间FSH水平Fig.3 The FSH levels of pregnant dairy goats in different months

图4 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间LH水平Fig.4 The LH levels of pregnant dairy goats in different months

图5 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间PRL水平Fig.5 The PRL levels of pregnant dairy goats in different months

图6 不同月份妊娠奶山羊妊娠期间GH水平Fig.6 The GH levels of pregnant dairy goats in different months

3 讨 论

对哺乳动物来说，P4、 E2、FSH、LH、PRL是维持及评估母体妊娠的主要生殖激素[4-5]。母羊妊娠期间血清中E2含量持续升高，同时伴随着孕酮水平的持续升高，P4在妊娠早期含量水平较高[6-7]，测定体液中孕酮的含量，可用于早期妊娠诊断[8-9]。有研究表明E2正反馈调控P4的合成，相反，伴随着FSH和LH含量相对下降，则E2、P4负反馈调节FSH和LH分泌。分娩时，E2和P4的浓度下降促使子宫肌对催产素的敏感性增强，同时刺激前列腺素的合成及释放，有利于分娩启动[1，10]。在本研究中，不同批次奶山羊妊娠后20～130 d，E2和P4的浓度一直处于上升趋势，分娩前下降；FSH和LH一直处于缓慢下降趋势，分娩时，LH上升。据报道，滩羊母羊怀孕后，血清中P4浓度呈现逐渐增加的趋势，到怀孕后期达到最高浓度[11]，海门山羊和布尔山羊的E2水平分别在妊娠16，20天开始上升，到分娩前达最大值，分娩后下降[12]，奶山羊进入妊娠期后，外周血中FSH和LH总体呈现下降趋势[13]，到怀孕后期LH表达量升高，FSH的变化则相对较小[14]，以上结果与本试验结果一致。说明本试验的结果是准确的，符合妊娠母羊生殖激素的变化规律，即奶山羊在不同月份受孕后，妊娠期间生殖激素的变化规律是一致的。但是，奶山羊妊娠月份的不同对其激素水平还是有影响的的。在本试验中，奶山羊妊娠月份的不同对其P4、 E2水平影响很小，妊娠后期及分娩时对FSH有一定的影响，但并未影响妊娠的进行，一方面可能是因为妊娠已处于后期阶段，另一方面可能与FSH并不是维持妊娠的主要激素有关。

PRL在妊娠早期的作用也是不可忽视的，PRL能够保护胚胎在着床时避免母畜的排斥作用[15]，除此之外， PRL能发挥孕酮类似的生理功能，有利于母体内胎儿的发育。PRL的分泌和E2、FSH、LH分泌之间存在一定关系，E2可能通过雌二醇受体α(ERα)和雌二醇受体β(ERβ)作用于PRL、FSH和LH的分泌，但是以ERα对PRL和FSH的分泌调控为主，推测其主要目的是为产后泌乳做准备[16]。当PRL升高时，促卵泡素和促黄体素降低[17]。GH是由脑垂体分泌的一种蛋白质，具有多种生理功能。GH通过调节奶山羊的乳腺及其外组织间的营养竞争，影响奶山羊乳腺的发育。本试验中，不同月份妊娠的奶山羊，PRL和GH浓度的变化趋势是一致的，妊娠期间直到分娩一直呈缓慢上升趋势，这与妊娠母羊乳腺的发育阶段相关，即GH与PRL和E2共同协同调节乳腺上皮细胞的合成，促使乳腺导管增生和乳腺腺泡的发育。但是，奶山羊妊娠月份的不同对其GH水平有影响，仅在分娩时有影响，对其PRL水平几乎无影响。说明奶山羊在不同月份受孕能维持其正常妊娠及乳腺发育。不同月份奶山羊受孕后，在整个妊娠期间，静脉血中E2，P4，FSH，LH，PRL及GH浓度的变化趋势一致。奶山羊在不同月份配种妊娠后对其生殖内分泌影响不大。

4 小 结

本研究结果表明，不同月份奶山羊受孕后，在整个妊娠期间，静脉血中E2，P4，FSH，LH，PRL及GH浓度的变化趋势一致。奶山羊妊娠月份的不同对其激素水平有影响，但影响不大，其激素水平能维持其正常妊娠及乳腺发育。奶山羊在不同月份配种妊娠后对其生殖内分泌影响不大。

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