HPLC法测定人血浆中胺碘酮的浓度

郭金林 姜兵 李芳 郭亮

盐酸胺碘酮属于Ⅲ类抗心律失常药，用于室性、室上性心动过速和早搏、阵发性心房扑动和颤动、预激综合征等。该药为高度亲脂性化合物，口服吸收良好但起效慢，生物半衰期长，长期服药有蓄积中毒的风险，对其进行血药浓度监测很有必要。本实验采用反向高效液相色谱法测定血浆中的胺碘酮浓度，以苯丙酸诺龙为内标，操作简便，无需繁杂的样品前处理，方法稳定可靠。

1.仪器和试剂

1.1仪器岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SIL-20A自动进样器，CBM-20A紫外检测器，KQ-50B超声清洗器，TGL-16M高速离心机，TL-4低速离心机，XX涡旋混匀器，岛津工作站，CTO-20A柱温箱。

1.2试药胺碘酮标准品和苯丙酸诺龙标准品均由中国药品生物制品检定所提供（纯度99.9%）。甲醇、乙腈为色谱纯，三乙胺、冰醋酸为分析纯度，试验用水为去离子水，健康成人血浆由我院血库提供。

2.方法与结果

2.1色谱条件C18柱（5*250mm，4.6um）；流动相：甲醇：水：三乙胺：冰醋酸=78：22：0.1：0.08（体积比）；流速1.2毫升/分；紫外线检测波長为242纳米；灵敏度auFs=0.01；柱温T=25℃。

2.2标准溶液的配置将胺碘酮和苯丙酸诺龙对照品分别于105℃下干燥2小时后，精密称取10毫克和20毫克，分别加甲醇至100毫升容量瓶中溶解，稀释至刻度，得浓度分别为100毫克/升和200毫克/升的标准储备液，4℃冰箱中保存。

2.3血浆样品处理方法取血浆样本600微升，加入20微升浓度为200毫克/升的内标储备液，混匀后加乙腈400微升，漩涡混合2分钟，经12000转/分离心10分钟，取上清液20微升进样。

2.4色谱行为在本试验条件下，胺碘酮与苯丙酸诺龙的保留时间分别为，血浆中的内原性杂质及可能与胺碘酮合用的药物，如头孢菌素类、茶碱类药物对胺碘酮的测定无干扰。

2.5标准曲线绘制将配置好的胺碘酮对照液加入洁净试管中，加入健康血浆600微升与40毫克/升的内标液20微升，充分混合，使血浆药物浓度分别为0.4毫克/升、0.6毫克/升、0.8毫克/升、1毫克/升、2毫克/升、4毫克/升、5毫克/升。按2.3项下操作，每一浓度平行2份，测定峰面积。以胺碘酮与内标的峰面积比对胺碘酮浓度作线性回归，可以得出回归方程，y=2555.8x+29.987，r=0.996。以信噪比（S/N）不小于3计算最低检测限。

2.6回收率与精密度由低到高依次配置0.4毫克/升、1毫克/升、4毫克/升3种浓度的血浆样品，按2.3项操作，每天测定6份，连续测定3天，测得日内RSD和日间RSD。

2.7回收率测定同2.3项下方法配置0.4毫克/升、1毫克/升、4毫克/升标准含药血清，依法测定。结果见表：

3.讨论

本研究所采取的样品处理方法简便、实用，不需进行繁琐且耗时的氮气吹干过程，且回收率完全满足要求。

柱温会极大影响样品的分离度及胺碘酮的出峰效果。柱温设定为35℃时，胺碘酮无法和杂质有效分离，且有明显拖尾；柱温设定为25℃时，胺碘酮可以和杂质有效分离，且无明显拖尾，出峰时间也略有缩短。

胺碘酮在体内有多种代谢物，且以去乙基胺碘酮为主，该代谢物不但有生理活性，还会抑制胺碘酮的代谢，故该药的药动学行为较为复杂，单纯通过测定胺碘酮浓度指导临床用药可能达不到理想效果。本研究因未能采购到去乙基胺碘酮标准品，且紫外检测器的灵敏度也不够高，故未能同时测定该代谢物，这是本实验的局限性。

【参考文献】

[1]陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学[M].17版.北京：人民卫生出版社.2014：384.

[2] Siddoway LA.Amiodarone：guidelines for use and monitoring[J].AM Fam Physician，2003，68（11）：2189-2196.