活血潜阳祛痰方对肥胖高血压大鼠血管紧张素Ⅱ及糖脂代谢的影响

芦 波，周训杰，符德玉，桂明泰，姚 磊，李建华，韩亚楠，龙 敏，舒 婷

(上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，上海 200437)

随着生活方式和饮食结构的改变，中国成人超重和肥胖率已达42.6%[1]，肥胖人数高居全球第一[2]；与此同时，高血压的流行程度也与日俱增[3]，患病率增至29.6%，患者已达3亿[4]。其中60%～70%高血压与肥胖相关[5]，肥胖高血压是一种亟待解决的关键问题。中医学认为肥胖高血压的发生与肝脾肾有关，肝肾不足，肝阳不潜，肝脏疏泄失司，影响脾之运化功能，痰湿停聚，久之影响脉络运行，形成血瘀，从而形成“阳亢-痰浊-血瘀”互结的病理状态，导致肥胖高血压的逐步发展。本研究观察活血潜阳祛痰方对肥胖高血压大鼠内分泌代谢的影响，为中医药防治肥胖高血压提供依据。

1 材料

1.1 动物 雄性自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rat，SHR)，5周龄，63只；正常雄性京都(Wistar-Kyoto，WKY)大鼠，5周龄，9只。所有大鼠均由北京维通利华实验动物有限公司[动物生产许可证号为SCXK(京)2012-0001]提供，饲养于岳阳中西医结合医院实验动物中心清洁级实验室。

作用简介：芦波(1987-)，女，博士研究生，住院医师

1.2 仪器 芬兰雷勃MK3型酶标仪；吉尔森Pipetman型移液器；Leica HI1210型水浴锅；美国Revco ULT2586-4-V型超低温冰箱；美国Baker SG403TX/603TX型生物安全柜；上海谱元仪器有限公司生产α-1860S型生化仪。

1.3 试剂 碘胰岛素放射免疫分析药盒：北京北方生物技术研究所；血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)ELISA检测试剂盒(批号 201502)：上海基尔顿生物；生化试剂盒[低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)、三酰甘油(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、葡萄糖试剂盒]的批号分别为201503、201503、201501、201412、201501]：南京建成生物制品研究所。

1.4 药物 活血潜阳祛痰方(临床又名丹蛭降压方)：由丹参、水蛭、钩藤(后下)、石决明(先煎)、山楂、玉米须等组成，具有活血化瘀、平肝潜阳兼祛痰湿的功效。按前期课题研究，全方有效量相当于临床用量同比例配制，各药按一定比例配方后煎汁、浓缩，制备成浸膏备用。

2 方法

2.1 模型复制方法 参照文献[6-7]进行改进。从SHR 5周龄开始，喂营养饲料(普通饲料60%，熟猪油12%，全脂奶粉3%，蔗糖5%，花生5%，鸡蛋10%，麻油1%，食盐2%，胆固醇2%)。选取5周龄SHR和WKY大鼠饲养10周用于复制模型。WKY组(9只)给予普通饮食；SHR对照组(9只)给予普通饮食；SHR高脂饮食组(54只)给予高脂饮食。15周龄时，SHR高脂饮食组按模型判断标准分为肥胖高血压组和非肥胖高血压组，各27只。肥胖高血压的判断标准[8]：凡体质量超过WKY对照组平均体质量的20%，且收缩压(systolic blood pressure, SBP)高于115 mmHg为模型复制成功。

2.2 给药 将27只肥胖高血压模型大鼠分成3组，每组9只，分别进行灌胃治疗8周。最终分组：WKY对照组，给予正常饮用水灌胃及普通饮食；SHR对照组，给予正常饮用水灌胃及普通饮食；SHR肥胖模型组(模型组)，给予正常饮用水灌胃及高脂饮食；SHR肥胖中药组(中药组)，给予中药配液灌胃(每日42 g/kg)及高脂饮食；SHR肥胖西药组(西药组)，给予西药配液灌胃(每日30 mg/kg)及高脂饮食。每日两次灌胃，药物灌胃剂量参照课题组既往研究用量[9]。

2.3 指标观察

2.3.1 一般状态观察 包括大鼠外观、体质量的变化。称大鼠体质量，测量身长(鼻尖至尾根长度)，计算Lee指数。Lee指数=[(体质量(g)×103)]1/3/身长(cm)。

2.3.2 血压测定 用BP-98A智能无创血压仪(日本softron)测定大鼠清醒状态时尾动脉SBP[10]，将大鼠置于37 ℃保温桶内，固定，安静并预热10～15 min，将加压感应器套入鼠尾根部，注意感应器尖端与鼠尾尖端的方向保持一致，设置血压仪的参数，开始测量，重复测量3次，取平均值。

2.3.3 血清Ang Ⅱ、空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、血脂、空腹胰岛素(fasting insulin, FIN)和稳态模型胰岛素抵抗指数(homeostatic model assessment for insulin resistance, HOMA-IR)测定 腹主动脉抽血，离心，检测血清Ang Ⅱ、血糖、血脂、胰岛素水平，按照试剂盒说明书进行操作。HOMA-IR=(FPG×FIN)/22.5。

2.3.4 心肌AngⅡ测定 将心肌组织块固定，检测心肌Ang Ⅱ，按照试剂盒说明书进行操作。

3 结果

3.1 肥胖高血压大鼠模型评价 模型复制后10周，SHR体质量均值为289.89 g，故体质量超过347.87 g判断为模型组，最终共筛选出27只肥胖高血压大鼠，体质量最小值为348 g，最大值为361 g，SBP最小值为151 mmHg，最大值为220 mmHg，模型复制成功率为50%。

5组Lee指数比较，差异有统计学意义(P<0.05)；模型组Lee指数较WKY对照组和SHR对照组升高(P<0.05)，中药组Lee指数明显低于模型组和西药组(P<0.05)，与WKY对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。5组SBP比较，差异有统计学意义(P<0.05)，模型组SBP显著高于WKY对照组(P<0.05)，中药组和西药组SBP显著低于模型组(P<0.05)。见表1。

表1 5组大鼠Lee指数和SBP比较

注：与WKY对照组比较，*P<0.05；与SHR对照组比较，◇P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与中药组比较，△P<0.05

3.2 5组大鼠糖代谢指标比较 5组FPG比较，差异有统计学意义(P<0.05)，SHR对照组FPG高于WKY对照组(P<0.05)，模型组FPG高于WKY对照组、中药组和西药组(P<0.05)。5组FIN比较，差异无统计学意义(P>0.05)。5组HOME-IR比较，差异有统计学意义(P<0.05)，SHR对照组HOME-IR高于WKY对照组(P<0.05)，模型组HOME-IR高于WKY对照组和中药组(P<0.05)。见表2。

表2 5组大鼠糖代谢指标比较

注：与WKY对照组比较，*P<0.05；与SHR对照组比较，◇P<0.05；与模型组比较，#P<0.05

3.3 5组大鼠脂代谢指标比较 与WKY对照组比较，SHR对照组LDL-C显著升高(P<0.05)，TG和HDL-C显著降低(P<0.05)；与SHR对照组比较，模型组LDL-C、TG显著升高(P<0.05)，HDL-C显著降低(P<0.05)；与模型组比较，中药组、西药组TC、LDL-C显著降低(P<0.05)；中药组与西药组TC、LDL-C、HDL-C、TG比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 5组大鼠血脂水平比较

注：与WKY对照组比较，*P<0.05；与SHR对照组比较，◇P<0.05；与模型组比较，#P<0.05

3.4 5组大鼠血清和心肌Ang Ⅱ比较 与WKY对照组比较，SHR对照组血清、心肌Ang Ⅱ水平显著升高(P<0.05)；与SHR对照组比较，模型组血清Ang Ⅱ水平无明显变化(P>0.05)；与模型组比较，中药组和西药组血清、心肌Ang Ⅱ水平显著降低(P<0.05)；中药组和西药组血清、心肌Ang Ⅱ水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 5组大鼠血清和心肌Ang Ⅱ水平比较

注：与WKY对照组比较，*P<0.05；与SHR对照组比较，◇P<0.05；与模型组比较，#P<0.05

4 讨论

“肥胖高血压”多归于中医学“眩晕”等病范畴，属本虚标实之证。肥胖高血压者多恣食肥甘厚味，肝气易动，致脾失健运，痰浊内蕴，阻塞脉道，血运失畅，瘀血渐生，最终形成阳亢、痰浊、血瘀的病理基础。课题组既往应用针对阳亢、血瘀、痰浊的组方活血潜阳祛痰方，进行了防治高血压及其靶器官损害的研究。临床研究显示，活血潜阳祛痰方可改善高血压患者(兼有痰瘀)的糖代谢紊乱、胰岛素抵抗和中医证候积分[6]。动物实验结果表明，活血潜阳祛痰方可控制SHR、阳亢血瘀痰浊SHR的血压持续升高，并能改善心肌胰岛素抵抗介导的糖代谢紊乱，可降低血液和心肌组织内Ang Ⅱ水平及心肌Ang Ⅱ受体及MMP-3表达水平，以改善高血压心肌间质重构[7，9，11]。针对肥胖高血压的阳亢、痰浊、血瘀病机，结合既往研究，推测活血潜阳祛痰方可能是干预肥胖高血压的有效中药复方。

多项前瞻性研究证实，肥胖与高血压并存时，互相影响，进一步加重心血管系统损害，增加难治性动脉高压的风险[12]，防治肥胖高血压的核心是预防靶器官损害的发生。本研究发现活血潜阳祛痰方既能降压，又可降低Lee指数(P<0.05)，且改善肥胖的作用优于西药，为减少肥胖高血压相关的靶器官损害奠定了重要基础。

本研究发现，SHR组大鼠FPG、HOME-IR、LDL-C和TG显著高于WKY对照组(P<0.05)，HDL-C低于WKY对照组(P<0.05)，可见SHR已存在一定程度的糖脂代谢紊乱；模型组FPG、HOME-IR、TC、LDL-C、TG显著高于SHR对照组(P<0.05)，且HDL-C显著低于SHR对照组(P<0.05)，肥胖高血压大鼠的糖脂代谢紊乱较SHR组更为严重。

研究表明，血TC水平和血压之间以及内皮细胞受损程度与高血压的严重程度呈正相关。高血压长期作用导致血管内皮细胞损伤，LDL-C等脂质侵入、沉积，而巨噬细胞吞噬这些脂质，形成泡沫细胞，最终和增生的血管平滑肌细胞共同形成粥样硬化斑块[13]。高脂血症是动脉粥样硬化的主要危险因素，能通过损伤血管的舒张功能而加剧高血压，增加心脏的后负荷，增加心血管风险。活血潜阳祛痰方能改善脂代谢紊乱，降低TC和LDL-C的水平，这可能对减轻肥胖高血压相关的心血管疾病风险有辅助作用。

肥胖是胰岛素抵抗的危险因素[14]。对SHR的研究发现，高血压发生之前血管对胰岛素的反应性已经受损，这表明胰岛素抵抗是高血压发生的早期事件[15]，高胰岛素血症可激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)，通过增加血管紧张素原、Ang Ⅱ的1型和2型受体，参与胰岛素抵抗患者高血压的发生、发展[16]。因而，胰岛素抵抗是肥胖高血压发生发展的重要因素。RAAS激活也与肥胖高血压的发生密切相关，在肥胖高血压的脂肪组织中能发现几乎所有被过度激活的RAAS成分[17-19]。本研究中，模型组血清和心肌Ang Ⅱ水平显著高于WKY对照组(P<0.05)，且心肌Ang Ⅱ水平较SHR对照组有进一步提高，提示肥胖高血压模型大鼠伴有显著的RAAS激活。活血潜阳祛痰方干预后，既可有效降低血清和心肌组织中升高的Ang Ⅱ水平，还能有效降低HOME-IR，且作用优于西药。课题组既往研究也发现，活血潜阳祛痰方可通过改善心肌Ang Ⅱ和胰岛素抵抗改善血瘀、阳亢、痰浊证SHR的心肌重构。综上，调节RAAS激活、改善胰岛素抵抗是活血潜阳祛痰方改善肥胖、降低血压以及进一步改善心肌重构的可能机制之一。

本方重用丹参、石决明活血潜阳为君药，辅以水蛭、钩藤加强君药的作用，佐以桑寄生滋水涵木、山楂健脾祛痰、玉米须利水消肿，共奏活血化瘀、平肝潜阳、祛痰湿之效。现代药理研究也发现，活血潜阳祛痰方的主要成分具有降压、改善代谢紊乱和防治靶器官损害的作用。据统计，丹参位居治疗高血压左室肥厚的单味中药的榜首，使用频率高达52.63%，能通过抑制RAAS[20]、影响氧自由基代谢[21]等，发挥抑制心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成，逆转高血压相关左心室肥厚的作用。石决明可通过降低血清中钙离子水平，影响钙离子通道和钙-ATP酶的传导，抑制血管紧张素原活性的作用[22]，而发挥降低血压的作用[23]。水蛭有效成分的降压作用可能与其改善脂代谢紊乱、降低血黏度、改善外周阻力有关[24]。钩藤的有效成分主要通过降低外周阻力，保护血管内皮功能发挥降压、改善心肌重构的作用[25]。玉米须水提物或水煎剂能够显著降低实验狗的血压，并对抗肾上腺素的升压作用，还能降低小鼠血中胆固醇含量[26-27]，这可能是玉米须降低血压的机制。山楂能改善高脂饮食引起的脂代谢紊乱[28]。

结合本课题结果和现代药理研究成果发现，活血潜阳祛痰方可能是治疗肥胖高血压的有效方剂，可改善其内分泌及代谢紊乱，为后期探索活血潜阳祛痰方干预肥胖高血压相关的靶器官损害奠定了基础。

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