XAF1、CHD5表达与卵巢浆液性腺癌预后的相关性研究

王 芳 毛小刚

卵巢癌是世界各地主要致死的妇科恶性肿瘤。由于腹腔内卵巢肿瘤的隐匿性，所以往往发现肿瘤时已处于晚期阶段。目前标准的治疗方法主要是手术切除和全身性化疗方案包括铂类药物。顺铂为基础药物的化疗方案一直为晚期卵巢上皮癌的治疗标准[1]。凋亡抑制蛋白(XIAP)的抑制剂被认为是细胞凋亡蛋白的最有效的抑制剂之一。XIAP相关因子1(XAF1)被视为1种新型的XIAP的结合配偶体，可以扭转XIAP的抗凋亡作用[2]。XAF1水平在许多肿瘤细胞系中大大减少，包括卵巢癌细胞。CHD5 是 1P36 的肿瘤的关键抑制基因，CHD5 表达下调和肿瘤发生发展密切相关。二者可以对卵巢肿瘤的生物学行为和肿瘤危害性进行判定， 对肿瘤细胞增殖活性有效的反映。故我们研究了XAF1、CHD5和卵巢肿瘤浆液性腺癌的病理特征关系，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

回顾性分析2010至2013年的卵巢肿瘤浆液性腺癌患者60例临床资料，年龄29～78岁，平均53岁。纳入标准：确诊的卵巢肿瘤浆液性腺癌；术后全程化疗至少8个疗程；无感染性疾病、糖尿病；高血压；肝肾甲状腺功能异常以及自身免疫性疾病等。本研究遵循第7版TNM恶性肿瘤的分期指导原则。

1.2 组织样本

组织标本固定于10%的中性缓冲福尔马林中。组织进行石蜡包埋，苏木精-伊红染色进行组织学评价。染色强度评级为0(不着色)，1(弱染色=浅黄色)，2(中度染色=黄棕色)和3(强染色=棕色)。无患者接受术前治疗。本研究获得患者知情同意书和医学伦理委员会批准。

1.3 免疫组化法

脱蜡和抗原修复后，将切片浸于H2O2(10 min)，以抑制内源性过氧化物酶的活性。随后采用山羊血清(30 min)处理。将切片用PBS洗涤，并底物(DAB)温育2～5 min。阴性对照省略了初级抗体。细胞质，细胞质膜和细胞核出现棕黄色染色则认为是阳性。阳性细胞率≤5%为0，6%～25%为1，26%～50%为2，>50%为3。

1.4 统计学方法

所有数据应用SPSS 18.0软件包统计分析。XAF1，CHD5和腺癌的临床病理参数相关性采用卡方检验和t检验。Kaplan-Meier法、对数秩检验和多变量Cox比例风险回归分析生存率。数值以均数±标准差表示。采用logistic回归分析XAF1，CHD5低表达为卵巢浆液性腺癌的危险因素。P值<0.05认为存在统计学显著差异。

2 结果

2.1 免疫组化染色XAF1和CHD5

卵巢浆液性腺癌Ⅱ期26例，Ⅲ期14例，Ⅳ期20例；组织学分级G121例；G214例；G325例。XAF1的染色主要集中于上皮细胞的细胞质。肿瘤细胞的阳性染色比例为0～85%。XAF1高表达与肿瘤组织分级(P=0.030)相关，虽与临床分期(P=0.099)相关，但不显著。此外，相比于对照组，卵巢浆液性腺癌患者CHD5表达水平偏低。且CHD5低表达与淋巴结状态、患者年龄、肿瘤分期、分级、临床分期无关(P>0.05)。见表1。

表1 XAF1、CHD5表达与卵巢浆液性腺癌临床病理因素的关系(例，%)

2.2 生存状况分析

生存分析显示，XAF1低表达患者与肿瘤高分化有关且患者无病生存期和总生存时间低于对照组(P=0.013)。CHD5低表达患者的无病生存期和总生存时间也低于对照组患者(P<0.05)。Cox比例风险回归分析表明，XAF1和CHD5低表达是卵巢浆液性腺癌的独立预后不良因素，见表2，表3。

表2 多变量Cox比例风险回归模型分析患者无病生存时间

表3 多变量Cox比例风险回归模型分析患者总体生存时间

2.3 Logistic回归分析XAF1低表达与卵巢浆液性腺癌发病及转移的危险因素分析

研究结果显示，XAF1、CHD5低表达是卵巢浆液性腺癌危险因素，其中XAF1低表达，OR=0.30，95%CI：0.14～0.63，P=0.647。从转移风险上看，XAF1低表达的淋巴结转移风险，OR=4.35，95%CI：1.39～13.63，P=0.012，XAF1低表达卵巢浆液性腺癌转移风险增加4.35倍。

2.4 Logistic回归分析CHD5低表达与卵巢浆液性腺癌发病及转移的危险因素分析

研究结果显示，CHD5低表达，OR=2.936，95%CI：1.198～7.246，0.019；而CHD5低表达卵巢浆液性腺癌的发病风险增加28%；CHD5低表达的淋巴转移风险，OR=1.846，95%CI：1.148～2.965，0.015；CHD5低表达卵巢浆液性腺癌转移风险增加27%。

3 讨论

卵巢肿瘤浆液性腺癌是最常见的妇科肿瘤之一，尽管对卵巢癌的诊断和治疗技术不断的提高，但是该病的预后仍不理想，多数患者患病后初次就诊已经伴有广泛的淋巴结转移或者远处的转移，就已处于该病的晚期，失去根治手术的机会，耽误了治疗的最佳的时机，早期诊断对疾病的及时发现及治疗具有重要的临床意义。该疾病标准治疗方案是 OPCS(肿瘤细胞减灭术)联合术后化疗，但是由于晚期患者肿瘤组织转移广泛、邻近组织浸润严重，该治疗方案不适于晚期卵巢癌肿瘤患者，治疗有效率仅有 20%～30%[3]。

通过大量的临床研究发现，癌症特异性基因是一类在肿瘤发生及发展中发挥重要生物学效应的的分子。目前对肿瘤组织中癌症特异性基因表达的机制尚未研究清楚，发现了相当多表型和功能出现一定的差异性。随着生物信息学的发展，癌症特异性基因在肿瘤中的相关研究越来越深入，研究发现癌症特异性基因参与者各类肿瘤的生长、发育，与肿瘤细胞的增殖凋亡以及侵袭转移密切相关，涉及到各类肿瘤的发生发展，且癌症特异性基因的表达谱还决定着肿瘤的基因反应，在肿瘤亚型、转移等临床病理因素中发挥着重要作用，尤其对于术后的生存期及预后具有一定的相关性，癌症特异性基因通常与肿瘤的发生和消除相关，同时揭示癌基因和抑癌基因的位置。1p36的缺失是很常见的遗传病变且出现在多种人类癌症中包括神经元，上皮细胞和造血系统恶性肿瘤。这表明，1p36可能含有诱导、失活及促进癌症发生和/或发展的基因[4]。CHD5 是 1P36 上的关键肿瘤抑制基因，CHD5 表达下调和肿瘤发生发展密切相关。神经细胞表达CHD5特异性蛋白质， CHD5在卵巢肿瘤中表达下调引起Hela 细胞 ，利于G1/S检验点进入S期 ，引起细胞增殖过度[5]。Bagchi等[6]通过小鼠基因研究获得人类1p36基因的缺失情况。他们证明CHD5具有抑制体内肿瘤的功能。这种抑癌功能为探索和创新临床干预提供了新途径。

本研究中，我们探讨XAF1和CHD5表达对卵巢浆液性腺癌和总生存期的影响。卵巢浆液性腺癌患者的XAF1蛋白表达显著降低，CHD5在恶性组织比非恶性组织表达低。我们发现低XAF1水平与组织学分级有关而不与组织学类型，淋巴结状态和FIGO分期无关[7]。XAF1 可以拮抗 X 染色体连锁凋亡抑制因子抗凋亡作用的蛋白，是潜在肿瘤抑制因子。另外 XAF1 可能是新的细胞周期调节蛋白，对 G2/M 检查点，过表达的 XAF1 促使 G2/M 细胞周期发生停滞，进而抑制细胞生长[8]。血管生成被认为是肿瘤生长和转移的至关重要因素。我们发现XAF1P表达与血管生成相关。免疫组织化学显示XAF1表达和微血管密度呈负相关，这表明XAF1可参加肿瘤的血管生成，这可以解释患者预后差与XAF1低表达的相关性[9]。但是XAF1介导的卵巢癌细胞血管生成机制有待进一步澄清。顺铂为基础的化疗是卵巢癌目前首选的治疗方法。然而，顺铂耐药性是主要的障碍，限制治疗的成功率。XAF1在肿瘤细胞减少表达或失活，可以阻碍如5-氟尿嘧啶，依托泊苷，H2O2，γ射线，紫外线和肿瘤坏死因子α引起的凋亡[10]。卵巢浆液性腺癌患者CHD5基因是1种潜在的分子标记和(或)治疗这种癌症的靶点。CHD5表达下降为患者无疾病生存和总生存的不良独立预测因子。因此，CHD5在卵巢癌细胞中的表达可视为1种分子标记，能够确定需要深入监测或积极治疗的高危患者。此外， CHD5的改变也可以提供针对性的辅助治疗新途径。

综上所述，卵巢浆液性腺癌患者体内的XAF1、CHD5表达均下降，缩短无病生存期和总体生存期，但是二者与卵巢浆液性腺癌的关系，可指导临床合理治疗和准确预后判断具有重要的临床意义。

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