老年非瓣膜性心房颤动与C反应蛋白和胆固醇酯转运蛋白基因多态性的关系

毕勇志 马 芬

(河南大学第一附属医院急诊科,河南 开封 475000)

老年人心房颤动(房颤)的发生率较高，冠心病、高血压、风湿性瓣膜病、心力衰竭等是老年房颤的危险因素。房颤包括瓣膜性房颤和非瓣膜性房颤。非瓣膜性房颤是由充血性心肌病、冠心病、高血压等并发的心房颤动，但并不是所有的上述疾病患者都并发房颤，房颤和上述疾病的严重程度也没有直接关系，因此推测非瓣膜性房颤可能存在遗传异质性〔1〕。房颤的发生和炎症有一定关系，C反应蛋白(CRP)基因C1444T基因多态性和炎症时的CRP水平有一定关系。有研究〔2～6〕发现CRP基因多态性和一些心脑血管疾病有相关性；心肌梗死、糖尿病、高血压等是非瓣膜性房颤的危险因素，胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因TaqIB多态性和上述疾病关系密切。本研究拟探讨老年非瓣膜性房颤与CRP基因C1444T和CETP基因TaqIB多态性的相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择河南大学第一附属医院2014年5月至2016年5月汉族老年非瓣膜性房颤患者112例作为观察组，同期汉族老年无房颤患者112例作为对照组。本研究经该院医学伦理委员会批准，患者在纳入研究前均签署知情同意书，同意研究的所有测试。观察组年龄(69.3±11.4)岁，男61例，女51例，吸烟31例，饮酒34例，体重指数(25.1±1.5)kg/m2；对照组年龄(70.1±9.8)岁，男59例，女53例，吸烟35例，饮酒42例，体重指数(24.9±1.3)kg/m2。两组年龄、性别、吸烟、饮酒、体重指数等比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

排除标准：非汉族者，年龄<60岁，研究对象之间有血缘关系者，有炎症反应者，患有恶性肿瘤、风湿性疾病、肝肾疾病者，合并瓣膜性心脏病者等。

1.2主要试剂 DNA提取试剂盒，Taq聚合酶，DNA合成缓冲液(上海生工生物有限公司)；Mix dNTP，TaqQI限制性内切酶(天根生物有限公司)等。

1.3方法 血液采集：受试者在住院第2天清晨时采集静脉血5 ml，抽取到EDTA抗凝管中。低温冰冻保存，并于7 d内完成DNA提取。

制备基因组DNA：按DNA提取试剂盒步骤进行操作，将收集的全血加入细胞裂解液进行裂解，加入蛋白沉淀溶液沉淀，收集含有DNA的上清液，加入异丙醇，离心得到白色DNA沉淀，加入DNA裂解液进行DNA裂解。电泳时选择的电泳温度不应超过30℃，电压80～100 V。本研究选择 500 Ladder DNA Marker 条带。

CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB多态性检测：将裂解的DNA采用PCR进行扩增，CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB均进行酶切，琼脂糖凝胶电泳确定基因型，CPR基因C1444T三种基因型为CC、TT、CT；CETP基因TaqIB三种基因型为B1B1、B1B2、B2B2。CETP基因TaqIB位点引物序列：5′-CACTAGCCCAGAGAGAGGAGTGCC-3′；3′-CTGAGCCCAGCCGCACACTAA-5′；CETP TaqIB多态性 RS 号码为RS708272，RS序列为ACCTGGCTCAGATCTGAACCCTAACT〔C/T〕GAACCCCAGTGATTCTGGGTCTCAG。

1.4统计学方法 采用SPSS20.0软件，组间均数比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，Logistic回归分析CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型与老年非瓣膜性房颤的关系，非条件Logistic回归用于校正其他危险因素可能对结果的影响。

2 结 果

2.1CPR基因C1444T基因型电泳结果 CPR基因C1444T多态性是C点-T点的突变，T为突变位点时为等位基因T，C为突变位点时为等位基因C，由此形成三种基因型，151、313 bp两条片段为CC型；462 bp单条片段为TT基因型；151、313、462 bp三条片段为CT基因型。见图1。

2.2CETP基因TaqIB基因型电泳结果 CETP基因TaqIB多态性是C点-T点的突变，T等位基因为突变位点时为等位基因B1，C等位基因为突变位点时为等位基因B2，由此形成三种基因型，173、353 bp两条片段为B1B1型；532 bp单条片段为B2B2基因型；173、353、532 bp三条片段为B1B2基因型。见图2。

1 为CC基因型，2为TT基因型，3为CT基因型图1 CPR基因C1444T基因型酶切电泳图

1为B2B2基因型，2为B1B1基因型，3为B1B2基因型图2 CETP基因TaqIB基因型酶切电泳图

2.3CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg检验结果 CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg检验，均P>0.05，表明本实验样本群体代表性好。见表1，表2。

2.4两组CPR基因C1444T基因型及等位基因频率比较 两组CPR基因C1444T基因型之间比较差异有统计学意义(P<0.05)，观察组TT基因型高于对照组。观察组患者CPR基因C1444T T等位基因频率高于对照组(P<0.05)。见表3。

2.5两组CETP基因TaqIB基因型及等位基因频率比较 两组CETP基因TaqIB基因型之间比较差异有统计学意义(P<0.05)，观察组B1B1基因型高于对照组。观察组CETP基因TaqIB B1等位基因频率高于对照组(P<0.05)。见表4。

2.6Logistic回归分析 将CPR基因C1444T基因型CC取值为0，CT基因型取值为1，TT基因型取值为2；将CETP基因TaqIB基因型B1B1取值为0，B1B2基因型取值为1，B2B2基因型取值为2；调整房颤的危险因素，如高血压、糖尿病、性别、年龄、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等，两组之间CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型比较差异有统计学意义(P<0.05)，表明汉族人群中CPR基因C1444T(T为危险因子)和CETP基因TaqIB(B1为危险因子)多态性可能和非瓣膜性房颤有相关性。见表5。

表1 CPR基因C1444T基因型Hardy-Weinberg检验〔n(%),n=112〕

表2 CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg检验〔n(%),n=112〕

表3 两组CPR基因C1444T基因型及等位基因频率比较〔n(%),n=112〕

表4 两组CETP基因TaqIB基因型及等位基因频率比较〔n(%),n=112〕

表5 各指标Logistic回归分析

3 讨 论

人CRP基因编码与细胞间信号传递及免疫系统关系比较密切。CRP水平是心血管事件的预测因子，房颤心肌组织中氧化应激和炎症反应增加，损伤内皮功能。CRP水平是房颤的危险因素，房颤时CRP水平升高。CRP基因C1444T多态性和CRP水平关系密切，有研究〔7～9〕，发现CRP基因多态性和缺血性脑卒中等心脑血管疾病有一定的相关性。刘威等〔8〕发现，急性脑梗死患者的血清CRP升高，但急性脑梗死和CRP基因rs1205基因多态性没有相关性；姜玉章等〔2〕结果发现，缺血性脑卒中和CRP基因变异呈负相关。但关于CRP基因C1444T多态性和老年非瓣膜性房颤相关性的研究不多。考虑到非瓣膜性房颤患者CRP水平增高，CRP基因C1444T多态性和CRP水平关系密切，那么CRP基因C1444T多态性是否和老年非瓣膜性房颤有相关性呢？本文研究发现，老年非瓣膜性房颤可能和CPR基因C1444T(T为危险因子)多态性具有相关性。

CETP基因含有15个内含子和16个外显子，CETP的主要功能是转运脂质，介导高密度脂蛋白胆固醇被脂肪组织摄取，参与机体对炎症的反应〔10，11〕。CETP基因TaqIB多态性在心血管疾病中具有保护作用，CETP基因TaqIB的B2等位基因能够引起血液中CETP水平降低，使CETP对高密度脂蛋白中胆固醇酯的转移作用降低，血液中低密度脂蛋白水平下降，高密度脂蛋白水平升高，减弱血管壁的炎症反应〔12〕。血脂和心血管疾病的发生有一定的相关性，时晓迟等〔13〕对冠心病和CETP基因TaqIB多态性的相关性进行研究，发现冠心病的发病和CETP基因TaqIB多态性没有相关性；徐晓玉等〔10〕对脑出血与CETP基因I405V、D442G多态性的关系进行研究，发现汉族人群脑出血和CETP基因I405V多态性可能没有关系，CETP基因D442G多态性和脑出血患者的血脂水平有一定相关性；刘欣等〔4〕对颈动脉粥样硬化斑块稳定性和CETP基因D442G多态性的关系进行研究，发现颈动脉粥样硬化斑块不稳定性和CETP基因D442G突变有一定关系。本研究结果发现：老年非瓣膜性房颤可能和CETP基因TaqIB(B1为危险因子)多态性具有相关性。CETP基因TaqIB B1等位基因为危险因子，B2等位基因为保护因子，B2等位基因可以降低血液中低密度脂蛋白水平，减轻血管壁的炎症反应，和非瓣膜性房颤的发生呈负相关；B1等位基因和B2等位基因的作用相反，B1等位基因和高血压、冠状动脉疾病的发病关系密切，而房颤的发生和高血压、冠状动脉疾病关系密切。因此，考虑CETP基因TaqIB B1等位基因通过升高低密度脂蛋白水平促进血管壁的炎症反应，进而和老年非瓣膜性房颤的发生相关。

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