40%氟啶胺·烯酰吗啉悬浮剂高效液相色谱方法研究

2018-03-12翟淑华狄凤娟

山东化工 2018年2期

翟淑华，林波，狄凤娟，李磊，吴培

(山东省农药科学研究院山东省化学农药重点实验室，山东济南 250033)

氟啶胺化学名称为N-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基)-3-氯-4-三氟甲基-2,6-二硝基苯胺[1]，氟啶胺属于二硝基苯胺类杀菌剂，可以阻止线粒体的氧化磷酸化作用，主要用于防治辣椒和马铃薯的晚疫病[2]；对交链孢属、葡萄孢属、疫霉属、单轴霉属、核盘菌属和黑垦菌属菌非常有效，并且耐雨水冲刷，持效期长，兼有优良的控制食植性螨类的作用，对十字花科植物根肿病也有卓越的防效，对由根霉菌引起的水稻猝倒病也有很好的防效[3]。烯酰吗啉化学名称为(Z,E)-4-〔3-(4-氯苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙烯酰〕吗啉[1]，烯酰吗啉主要用于防治霜霉属、疫霉属等引起的卵菌病害，具有保护治疗和抗孢子产生的活性，烯酰吗啉的应用存在着一定的抗性风险[4]，与可以阻止线粒体的氧化磷酸化作用的二硝基苯胺类杀菌剂氟啶胺复配，不易产生交互抗性。

目前氟啶胺·烯酰吗啉悬浮剂的分析方法未见报道。本文采用反相高效液相色谱法，在同一色谱条件下对40%氟啶胺·烯酰吗啉悬浮剂进行分析，该方法操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

乙腈：色谱纯；超纯水：电阻率18.2MΩ·cm(25℃)；磷酸：分析纯；磷酸水溶液：ψ(H2O∶H3PO4)=1000∶1；氟啶胺标样：已知质量分数98.0%；烯酰吗啉标样：已知质量分数98.1%；均由国家农药质量监督检验中心提供；氟啶胺·烯酰吗啉40%悬浮剂(由某公司提供)。

1.2 仪器

高效液相色谱仪：岛津LC-20AT高效液相色谱仪并配有二极管阵列检测器、DGU-20A3R色谱工作站；Millipore超纯水制备系统；色谱柱：150mm×4.6mm(i.d)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18、5μm填充物；过滤器：滤膜孔径约0.45μm。

1.3 液相色谱操作条件

流动相：ψ(乙腈∶磷酸溶液)=70∶30；流量：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：245nm；进样体积：5μL；保留时间：氟啶胺约10.2min，烯酰吗啉约3.1min。典型的氟啶胺·烯酰吗啉悬浮剂的高效液相色谱图见图1。

图1 40%氟啶胺·烯酰吗啉悬浮剂高效液相色谱图

2.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

称取氟啶胺标样0.03g，烯酰吗啉标样0.05g(精确至0.00002g)，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.4.2 试样溶液的配制

称取含氟啶胺0.03g的试样(精确至0.00002g)，置于100mL容量瓶中，先加入5mL水使试样分散，再用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤。

1.4.3 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.4 计算

将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中氟啶胺(烯酰吗啉)峰面积分别进行平均。试样中氟啶胺(烯酰吗啉)的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：A1── 标样溶液中氟啶胺(烯酰吗啉)峰面积的平均值；

A2── 试样溶液中氟啶胺(烯酰吗啉)峰面积的平均值；

m1── 标样的质量，g；

m2── 试样的质量，g；

P ── 标样中氟啶胺(烯酰吗啉)的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

通过岛津LC-20AT高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得氟啶胺、烯酰吗啉的紫外波长扫描图(图2、图3)。从图中可以看到氟啶胺最大吸收波长在190nm附近，烯酰吗啉最大吸收波长在200nm附近，为了能兼顾这两种化合物的检测，同时减少溶剂的干扰，因此将检测波长定为245nm。

色谱柱选择常用的ZORBAX SB-C18反相柱。依据氟啶胺、烯酰吗啉物化性质，用乙腈作为溶剂溶解样品，并选择乙腈和水作为流动相，为了得到更好的分离效果和峰形，在1000mL水里加入1mL磷酸。将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定流动相为ψ(乙腈∶磷酸溶液)=70∶30，在流速1.0mL/min时，有效成分与杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，并且分析时间较短，提高了工作效率。

图2 氟啶胺紫外吸收谱图

图3 烯酰吗啉紫外吸收谱图

2.2 分析方法的线性相关性试验

按2.4.1分别配制5个不同质量浓度的氟啶胺(烯酰吗啉)标样溶液，使氟啶胺的质量浓度分别为0.5998、0.4798、0.2999、0.2399、0.1200mg/mL，烯酰吗啉的质量浓度分别为0.9535、0.7628、0.4768、0.3814、0.1907mg/mL。在上述色谱操作条件下进行分析，，以氟啶胺(烯酰吗啉)质量浓度(mg/mL)为横坐标，峰面积(mAU)为纵坐标，绘制校正曲线。得到氟啶胺线性方程为y=1.29414E+07x-36378.65，其线性相关系数为0.9999；烯酰吗啉的线性方程为：

y=1.78646E+07x-231674.49，线性相关系数为0.9997。