2016年浙江省梅花鹿牛结核病调研

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(1.浙江农林大学动物科技学院，浙江农林大学动物健康检测中心，浙江杭州 311300；2.浙江省野生动植物保护管理总站；3.浙江大学动物科学学院)

牛结核病(TB)是重要的人兽共患慢性消耗性传染病，被国际动物卫生组织(OIE)定为B类动物疫病，我国农业部定为二类动物疫病。牛分枝杆菌为结核病主要病原之一，宿主谱广泛，包括牛、人、鹿等多种温血动物，且动物之间可相互交叉传染。养殖梅花鹿为我国重要的特种经济动物，其主要产品为鹿茸。梅花鹿感染牛结核病后可引起产茸量明显下降，患鹿还可导致健康鹿和人感染，严重威胁梅花鹿场生存，影响养殖经济效益，且威胁公共卫生安全。

为探清浙江省养殖梅花鹿是否患有牛结核病，评估梅花鹿鹿茸及相关产品传播牛结核病风险，本研究抽样调查浙江省梅花鹿场和梅花鹿，采集割茸梅花鹿血清和全血，检测并统计分析牛结核分枝杆菌抗体和核酸检测阳性率。

1 调研方法

1.1调查对象 综合考虑梅花鹿养殖场所在地区、养殖量、养殖环境等，采用多层抽样策略抽取宁波市、温州市、湖州市、金华市等4个地区10家梅花鹿养殖场作为抽样调查鹿场，采集成年雄鹿血清和全血163份。

1.2样本采集 根据浙江省2016年梅花鹿总数，兼顾考虑梅花鹿场规模，计算采样梅花鹿数量。当被检梅花鹿被麻醉并割取鹿茸时，接取鹿茸血1～2 mL制备血清，接取1～2 mL放入备有抗凝剂的试管中。同一梅花鹿同时采集全血和血清分别用于后续实验。样本采集后，立即低温保存送实验室备用检测。

1.3血清牛结核杆菌抗体鉴定 采用浙江农林大学动物健康检测中心研制的免疫胶体金牛结核杆菌抗体速测卡检测梅花鹿血清抗体，具体操作按说明书进行。

1.4全血牛结核分枝杆菌核酸鉴定 参照国家标准结核病病原菌实时荧光PCR检测方法(GBT 27639-2011)检测梅花鹿全血牛结核分枝杆菌核酸。

1.5数据分析 整理数据，利用二项式分布分别计算梅花鹿牛结核杆菌核酸检测阳性率。

2 结果与分析

2.1样本采集情况 从2016年浙江省200余家梅花鹿养殖场中，抽取宁波、温州、湖州、金华4个地区8县市区10家梅花鹿场(A-J)，采集170头成年雄鹿血清和全血(全血中缺失7份，故后续实验为163份)。参加该项调查的梅花鹿场分布和各场随机抽取梅花鹿数量见图1。

图1 调查鹿场分布和采集样本数量

2.2成年雄性梅花鹿牛结核杆菌抗体阳性率 免疫胶体金试纸条鉴定雄性成年鹿血液中牛结核杆菌抗体，统计分析结果见表1。

由表1可见，浙江省梅花鹿的170份血清中，有8份牛结核抗体阳性，检测阳性率为4.7%(95%CI=2.1%-9.1%)。50%(5/10)参加调查的梅花鹿场牛结核杆菌抗体检测呈阳性，5家阳性鹿场来自宁波的B场、金华的G、H、I和J场，牛结核抗体阳性率分别为7.1%(95%CI=0.2%-33.9%)、4.4%(0.1%-21.9%)、14.3%(95%CI=1.8%-42.8%)、12.5%(95%CI=1.6%-38.3%)和12.5%(95%CI=1.6%-38.3%)。其余5场抽检结果均为阴性。

表1 2016年浙江省不同地区和养殖场成年雄鹿牛结核抗体阳性率

2.3成年雄性梅花鹿牛结核杆菌核酸阳性率 根据荧光定量测定梅花鹿全血牛结核分枝杆菌核酸结果，统计分析获得梅花鹿牛结核杆菌核酸检测阳性率，结果见表2。

由表2可见，金华地区J场出现1例牛结核杆菌核酸阳性鹿，阳性率为6.3%(0.2%-30.2%)，金华地区检测阳性流行率为1.47%(1/68，95%CI 为0.4%-7.9%)；宁波、温州、湖州和金华其他鹿场牛结核杆菌核酸均为阴性。

2016年浙江省成年雄性梅花鹿牛结核杆菌核酸整体检测阳性流行率为0.6%(1/163)，95%CI为0.0%-3.4%。结果表明，浙江地区成年雄性梅花鹿未见携带牛结核杆菌(95%CI=0.0%-3.4%)，但不排除个别梅花鹿患有牛结核。

表2 2016年浙江省不同梅花鹿养殖场成年雄鹿牛结核核酸检测阳性率

3 小结与讨论

牛结核病一度是极具破坏力和危害性的人兽共患传染病，虽然国内外积极采取防控措施，但该病仍未得到完全净化。野生动物(包括养殖野生动物)与人类的密切接触，是导致该疾病相互传播的主要途径之一。目前，我国梅花鹿抗体和病原流行病学调查相关数据较少。本研究首次对浙江省梅花鹿牛结核病进行了血清学和病原核酸流行率调查，为探清浙江省养殖梅花鹿是否患有牛结核病提供了参考依据。

调查结果显示，2016年浙江省梅花鹿牛结核血清抗体检测阳性率为4.7%(8/170，95%CI=2.1%-9.1%)，低于Kang等(2016)[1]采用ELISA方法检测韩国驯养加拿大马鹿血清获得的结核杆菌抗体水平。Kang等报道马鹿群结核流行率达50%-80%，平均流行率为67.7%(21/31)。本研究显示浙江省梅花鹿牛结核病原核酸整体阳性率为0.6%(1/163，95%CI=0.0%-3.4%)，该流行率低于Madeira等(2017)[2]对2011-2014年葡萄牙狩猎期间31个高风险地区进行野生马鹿等动物的牛结核病原检测流行率5.95%(222/3733，95% CI=5.21%-6.75%)，且浙江省数据表明无证据证实浙江省梅花鹿场携带牛结核杆菌。

根据以上检测结果，表明浙江省梅花鹿牛结核杆菌抗体和病原核酸检测流行率均低于已有国外同类流行率报道，这可能是因地域差异，也可能是动物品种或检测方法不同所致[3-6]。

综上所述，2016年笔者对浙江省梅花鹿进行牛结核流行病学所作调查结果表明，割茸期间成年雄性梅花鹿不携带牛结核杆菌，该调查阶段鹿茸及其相关产品携带和传播牛结核杆菌的风险极低。但是，该地区曾经有梅花鹿感染过牛结核病，甚至不排除个别梅花鹿仍然患有牛结核病的可能。因此，今后仍需加强梅花鹿日常疫病监测工作，及时发现患病个体、迅速处置，建立健全梅花鹿检疫规程和综合防控措施[7-9]。

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