血清抗apoA-1IgG、MMP-9与急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的相关分析

张 薇， 刘 丹， 张广炜， 张 伟， 李红芳， 杨志甫， 郭新玲

载脂蛋白A1(ApolipoproteinA-1，apoA-1)是高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)的主要结构和功能组分，约占其蛋白质含量的75%，其自身抗体抗apoA-1 IgG一方面通过影响apoA-1的功能继而导致HDL功能障碍，参与到动脉粥样硬化及其相关疾病中[1];另一方面，抗apoA-1 IgG能够增加促炎性相关分子，如白细胞介素8(IL-8)和MMP-9的释放。MMP-9作为炎症因子已被证明是动脉粥样硬化及脑梗死的血清标志物，它是锌依赖的蛋白水解酶，能够催化细胞外基质蛋白的降解，可以选择性的降解Ⅳ和Ⅴ型胶原蛋白，从而削弱动硬化斑块纤维帽，使得斑块更容易破裂[2,3]。国内外研究已表明[4]，动脉粥样硬化不仅是胆固醇的聚集、平滑肌细胞增殖的复杂过程，免疫介导的炎症反应在动脉粥样硬化中也起着重要作用。动脉粥样硬化的始因是动脉壁内皮细胞的炎症反应，表达的炎症趋化因子导致白细胞迁移，早期主要是循环中的单核细胞，穿过内皮细胞进入内膜，从而导致后期的动脉粥样硬化斑块形成，随着动脉粥样硬化斑块的增加，血管管腔不断的阻塞，动脉血流逐渐减少，或斑块破裂，最终导致急性脑梗死的发生。我们通过探讨抗apoA-1 IgG、MMP-9与急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的相关性，为动脉粥样硬化及脑梗死的病因提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 随机选择我科急性脑梗死患者120例,男性80例，女性40例，平均年龄(65.5±9.53)岁。均符合1996年全国第四届脑血管病学术会议修订的脑梗死的诊断标准，且经头部CT或MRI检查证实，并排除：自身免疫性疾病或服用免疫抑制剂、自身免疫机制参与发生、发展的疾病、严重肝、肾功能不全、恶性肿瘤及急慢性感染性炎症者、急性冠脉综合征的患者、心源性脑栓塞的患者。

1.2 方法与分组

1.2.1 抗apoA-1 IgG、MMP-9的测定 入组患者于入院次日清晨空腹采集肘静脉血共计5 ml，置于全塑干燥管内，在常温环境中以3000 r/min离心5 min，分离后吸取上层血清放于-80.0 ℃冰箱保存，最后统一用ELISA方法检测抗apoA-1 IgG、MMP-9水平。

1.2.2 颈动脉超声检查 采用飞利浦投资有限公司生产的EPIQ-7型彩色多普勒超声诊断仪，由我院同一位超声科医生检测。分别探查双侧颈总动脉远段(分叉下方)、颈总动脉球部(分叉部)、颈内动脉近段(分叉上方)内-中膜厚度(IMT)和血管管腔内径。内-中膜厚度为管腔与血管内膜交界处的垂直距离，取不同位点(颈总动脉远段、 颈动脉球部、颈内动脉近段)的平均值作为内-中膜增厚测值，观察有无内-中膜增厚或粥样硬化斑块形成，并进行斑块稳定性评价。其中IMT≧1.00 mm即为内-中膜增厚；局限性IMT≧1.50 mm定义为粥样硬化斑块形成，二者皆认为存在颈动脉粥样硬化。根据斑块稳定性进一步分为不稳定性斑块和稳定性斑块，前者包括软斑、混合斑；后者指硬斑。

1.2.3 分组 根据颈部血管超声分为4组：(1)IMT正常组20例(IMT<1.00 mm)；(2)IMT增厚组10例(IMT≧1.00 mm)；(3)稳定斑块组57例；(4)不稳定斑块组33例，其中(1)组为颈动脉正常组；后3组均为颈动脉粥样硬化组。

2 结 果

2.1 4组脑梗死患者一般临床资料及抗apoA-1 IgG、MMP-9的比较 颈动脉IMT正常组、IMT增厚组、稳定性斑块组、不稳定性斑块组中，体重指数(Baric index,BMI)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、抗apoA-1 IgG、MMP-9、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein，LDL)水平依次逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

2.2 颈动脉粥样硬化组与颈动脉正常组比较 入组的脑梗死患者根据颈部血管超声分为颈动脉正常组(20例)与颈动脉粥样硬化组(100例)；颈动脉粥样硬化组的抗apoA-1 IgG、MMP-9的表达水平明显高于颈动脉正常组(P<0.05)(见表2)。

2.3 抗apoA-1 IgG、MMP-9血清水平与颈动脉粥样硬化程度的相关性 斯皮尔曼(Spearman)等级相关分析：抗apoA-1 IgG、MMP-9血清水平与颈动脉粥样硬化程度呈正相关(抗apoA-1 IgG：r=0.407，P<0.01；MMP-9：r=0.316，P<0.01)。

2.4 Logistic回归分析 分别以IMT、斑块稳定性为因变量;以年龄、性别、BMI、TG、TC、HDL、LDL、空腹血糖、抗apoA-1 IgG、MMP-9等与动脉粥样硬化相关的危险因素作为自变量进行Logistic回归分析。结果显示：抗apoA-1 IgG、MMP-9是发生颈动脉粥样硬化和斑块不稳定的独立危险因素[抗apoA-1 IgG (μg/ml)OR=23.226，95%CI4.204～128.305，P<0.01，MMP-9 (ng/ml)OR=2.287,95%CI0.890～5.872，P<0.05;抗apoA-1 IgG (μg/ml)OR=3.301，95%CI1.212～8.991，P<0.01，MMP-9 (ng/ml)OR=2.345,95%CI1.129～4.871，P<0.05]。

表1 4组患者一般临床资料比较

与正常组比较*P<0.05；与增厚组比较#P<0.05；与稳定斑块组比较△P<0.05

表2 颈动脉正常组和颈动脉粥样硬化组抗apoA-1 IgG、MMP-9的比较

与正常组比较*P<0.05，**P<0.01

3 讨 论

在动脉粥样硬化的发展过程中，一些自身抗体与加速动脉粥样硬化有关，且在心血管疾病中得到了证实，Mizoguchi Etsuko[5]等发现有些自身抗体参与了冠状动脉性疾病(Coronary cardiopathy，CAD)的发生，且与其范围和严重程度相关。我们研究的抗apoA-1 IgG是apoA-1的自身抗体 。目前关于抗apoA-1 IgG的研究多集中于自身免疫性疾病及心血管疾病[6]，而关于血清抗apoA-1 IgG与脑梗死患者颈动脉粥样硬化的相关性研究未见报道。

本实验结果表明，在入组的急性脑梗死患者中，颈动脉粥样硬化的发生率为83.3%，颈动脉粥样硬化组的抗apoA-1 IgG、MMP-9的表达水平明显高于颈动脉正常组，Logistic回归显示，抗apoA-1 IgG、MMP-9是颈动脉粥样硬化发生的独立危险因素，且与颈动脉粥样硬化程度呈正相关。这提示血清抗apoA-1 IgG、MMP-9与颈动脉粥样硬化的发生密切相关，且与颈动脉粥样硬化程度密切相关。Dalia El-Lebedy[7]报道，抗apoA-1 IgG是心肌梗死与自身免疫性疾病相关血栓性事件血清标志物，高水平的抗apoA-1 IgG使得许多血栓事件相关的疾病发病率增高，如重度颈动脉狭窄。

另有研究显示[8]，在一些无自身免疫性、炎症性疾病的脑梗死患者中，因颈动脉重度狭窄行动脉内膜切除术(CEA)时，同时也检测到了抗apoA-1 IgG水平的升高。我们的研究结果与上述研究一致。

本研究中，Logistic回归分析显示，血清抗apoA-1 IgG、MMP-9是颈动脉粥样硬化斑块不稳定性的独立危险因素。Montecucco[9]等在小鼠模型中用抗apoA-1 IgG被动免疫增加动脉粥样硬化和动脉粥样硬化斑块的易损性。随后人们在严重颈动脉狭窄患者和输注多克隆抗apoA-1 IgG的去apoE小鼠体内发现，与对照组相比，斑块内胶原含量降低，巨噬细胞和MMP-9含量明显升高，其中MMP-9在动脉粥样硬化斑块内炎性细胞聚集发挥核心作用，且MMP-9选择性的降解明胶，破坏斑块纤维帽，同时抗apoA-1 IgG诱导中性粒细胞从血流向动脉粥样硬化斑块内浸润，均使得斑块更加不稳定，最终增加动脉粥样硬化斑块易损性，这些都表明血清抗apoA-1 IgG和MMP-9水平可能反应动脉粥样硬化程度及斑块的易损性[10]，我们的研究结果与以上实验研究相符。

我们知道，动脉粥样硬化及动脉粥样硬化性血栓形成是脑梗死的主要病因及发病机制之一，尤其是颈动脉粥样硬化，颈动脉位置比较表浅，便于超声检查，且颈动脉粥样硬化的程度可相对反应全身动脉粥样硬化的程度[11]。

结合以上研究，检测抗apoA-1 IgG、MMP-9的血清水平可能成为发现早期动脉粥样硬化的新方法，而且抗apoA-1 IgG是自身抗体，我们可能通过特定的免疫靶向治疗，为脑梗死颈动脉粥样硬化患者提供一种新的治疗方法。而且若将颈部血管超声与血清抗apoA-1 IgG、MMP-9检测有效结合，可能为动脉粥样硬化及其相关疾病的危险分层提供理论依据，为颈动脉粥样硬化患者预防脑梗死等血栓性事件提供新的思路。

[1]Packard RR,Lichtman AH,Libby P,et al.Innate and adaptive immunity in atherosclerosis[J].Semin Immunopathol,2009,31(1):5-22.

[2]Morishita T,Uzui H,Mitsuke Y,et al.Association between matrix metalloproteinase-9 and wor-sening heart failure events in patients with chronic heart failure[J].ESC Heart Fail,2017,4(3):321-330.

[3]Fatar M,Stroick M,Griebe M,et al.Matrix metalloproteinases in cerebrovascular diseases[J].Cerebrovasc Dis,2005,20:141-148.

[4]Libby P,Ridker PM,Hansson GK.Leducq transatlantic network on atherothrombosis.Inflammation in atherosclerosis:from pathophysiology to practice[J].Am Coll Cardiol,2009,54(23):2129-2138.

[5]Mizoguchi E,Orihara K,Hamasaki S,et al.Association between Toll-like receptors and the extent and severity of coronary artery disease inpatientswith stable angina[J].Coron Artery Dis,2007,18(18):31-38.

[6]Vuilleumier N,Rossier MF,Pagano S,et al.Anti-apolipoprotein A-1 IgG as an independent cardiovascular prognostic marker affecting basal heart rate in myocardial infarction[J].Eur Heart J,2010,31(7):815-823.

[7]Dalia El-Lebedy,Enas Rasheed,Mona Kafoury,et al.Anti-apolipoprotein A-1 autoantibodies as risk biomarker for cardiovascular diseases in type 2 diabetes mellitus[J].Journal of Diabetes and Its Complications,2016,30(4)：580-585.

[8]Vuilleumier N,Montecucco F,Hartley O,et al.Autoantibodies to apolipoprotein A-1 as a biomarker ofcardiovascular autoimmunity[J].World J Cardiol,2014,6(5):314-326 .

[9]Montecucco F,Vuilleumier N,Pagano S，et al.Anti-Apolipoprotein A-1 auto-antibodies are active mediators of atherosclerotic plaque vulnerability[J].European Heart Journal,2011,32(4)：412-421.

[10]Vuilleumier N,Montecucco F,Spinella G,et al.Serum levels of anti-apolipoprotein A-1 auto-antibodies and myeloperoxidase as predictors of major adverse cardiovascular events after carotid endarterectomy[J].Thromb Haemost，2013，109(4):706-715 .

[11]Till Blaser,Katrin Hofmann,Thomas Buerger,et al.Risk of stroke,transient ischemic attack,and vessel occlusion before endarterectomy in patients with symptomatic severe carotid stenosis[J].Stroke,2002,33(4):1057-1062.