板蓝根饮片、板蓝根颗粒中（R，S）－告依春的含量测定

2018-03-05王宁莉周振旗贾万仓

中国药业 2018年3期

王宁莉，周振旗，贾万仓

（1．陕西省铜川市食品药品检验检测中心，陕西铜川 727031； 2．陕西省铜川市宜君县人民医院，陕西铜川 727200）

板蓝根，又名靛青根、蓝靛根、大青根，十字花科植物菘蓝 Isatis indigotica Fort．的干燥根[1]，性寒，味先微甜后苦涩，具有清热解毒、预防感冒、利咽之功效，主要用于温毒发斑、舌绛紫暗、烂喉丹痧等。药理研究表明，板蓝根饮片的功效主要为抗病毒、抗炎、抗菌、抗氧化和免疫调节等[2－10]。板蓝根颗粒的唯一组方是板蓝根，其功效主要为清热解毒、凉血利咽、消肿，用于由肺胃热盛所引起的咽喉肿痛、腮部肿胀及口咽干燥[1]，收载于2015年版《中国药典(一部)》。相较于饮片，其标准中仅对其进行了薄层色谱鉴别，而无指标成分的含量测定，质控标准较单一，制剂质量难以保证。其指标成分（R，S）－告依春含量测定见2015年版《中国药典(一部)》。参考文献[11－20]，本研究中优化了测定板蓝根饮片和板蓝根颗粒中指征成分（R，S）－告依春含量的高效液相色谱（HPLC）法，简单易行，准确度高。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

LC－2030型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；LC－2030UV型检测器(日本岛津公司)；MS－105型电子天平（感量0．000 01 g，梅特勒－托利多公司）。

1．2 试药

（R，S）－告依春标准品（中国食品药品检定研究院，批号为 111753－201506，含量以 99．9%计）；甲醇为色谱纯，水为纯化水。板蓝根饮片(以下简称饮片)为自购样品，经铜川市食品药品检验检测中心检定为板蓝根正品；板蓝根颗粒（以下简称颗粒，葵花药业有限公司，批号为170426；云南维和药业股份有限公司，批号为1610053；吉林吉春制药有限公司，批号为161201；甘肃众友药业制药有限公司，批号为161026；修正药业集团有限公司，批号为150426；山西万辉制药有限公司，批号为 170313)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent C18柱(250 mm× 4．6 mm，5 μm)，以十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂；柱温：35℃；检测波长：245 nm；流动相：甲醇－水(15∶85)[3]；流速：1．0 mL／min。理论板数按（R，S）－告依春峰计算应不低于6 000。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2．2 溶液制备

取（R，S）－告依春对照品 0．012 40 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，制得质量浓度为0．124 0 g／L 的（R，S）－告依春标准品溶液，作为对照品贮备液。取饮片检品，粉碎，粉末过4号筛，精密称取1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，超声（功率250 W，频率30 kHz）提取1 h，放至室温，称定质量，用水补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，得供试品溶液1。取颗粒粉末，研细，称取样品 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，超声（功率250 W，频率 30 kHz）提取1 h，放至室温，称定质量，用水补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，得供试品溶液2。

表1 （R，S）－告依春加样回收试验结果（n＝6）

2．3 方法学考察

线性关系考察：精密吸取标准品贮备液 0．5，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0，6．0，7．0 mL，分别置 20 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度定容，分别制成质量浓度为0．003 1，0．006 2，0．012 4，0．018 6，0．024 8，0．031 0，0．037 2，0．043 4 g／L 的溶液，摇匀，过滤，取续滤液，精密吸取10 μL，测定。以进样量为纵坐标（ Y）、峰面积为横坐标（X）进行线性回归，得回归方程 Y＝3．3×10－4X＋1．68，r＝0．999 94(n＝8)。结果表明,（R，S）－告依春质量浓度在 0．003 1～0．043 4 g／L范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取一定浓度的对照品溶液，精密吸取10 μL，连续进样6次。结果峰面积分别为 1 820 191，1 843 843，1 836 956，1 865 214，1 844 302，1 855 412，RSD为0．8%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液 1，于 1，3，5，8，12，16，21，24 h 时进样。结果峰面积分别为 632 901，632 570，631 856，626 051，624 612，612 999，613 953，617 411，平均值为 624 044，RSD 为 0．5% （n＝8），表明供试品溶液1在24 h内稳定性良好。取同一供试品溶液2，分别于 1，3，5，8，12，16，21，24 h 时进样。结果峰面积分别为283 796，284 044，274 484，278 936，288 318，279 460，278 506，279 651，平均值为 280 899， RSD 为 1．5%（n＝8），表明供试品溶液2在24 h内稳定性良好。

重复性试验：按供试品溶液的制备方法，对同一厂家饮片检品和同一厂家同一批次颗粒检品处理6份平行检品，分别进行测定。结果（R，S）－告依春平均含量分别为 0．620 1 mg／g 和 0．098 4 mg／g， RSD 分别为0．9%和 1．0% （n ＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取含量为0．620 1 mg／g的饮片检品共6份，各0．5 g，精密称定，加入2 mL质量浓度为0．124 0 g／L 的（R，S）－告依春标准品溶液，依法制备供试品溶液，进样测定，计算含量。结果见表1。取含量为 0．098 4 mg／g的颗粒检品共 6份，各 2 g，精密称定，分别精密加入 1．5 mL质量浓度为 0．124 0 g／L的（R，S）－告依春标准品溶液，依法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果见表1。

2．4 样品含量测定

取饮片待测检品12批次，按照2．2项下方法制备检品溶液，进样测定，计算含量。结果见表2。取6个厂家6批次待测颗粒样品，依法制备供试品溶液，进样测定，计算含量。结果见表3。

表2 饮片检品中（R，S）－告依春含量测定结果(mg／g)

表3 颗粒检品中（R，S）－告依春含量测定结果(mg／g)

3 讨论

3．1 样品处理

2015年版《中国药典（一部）》中收载的板蓝根饮片的提取方法是以水为溶剂煎煮2 h，放冷，用水补足减失的质量。但煎煮火候不易掌控，水分挥发较大，容器壁附着较多，加之煎煮时间过长，壁上附着物变焦，无法溶入溶剂，且经比对煎煮提取后（R，S）－告依春的含量偏低，曾比较加热回流提取和超声（功率250 W，频率30 kHz）提取，超声处理简便可控，且（R，S）－告依春高于煎煮提取。溶剂曾分别选用50%甲醇、70%甲醇、甲醇、70%乙醇和水，结果不同的溶剂提取对（R，S）－告依春含量影响不大。提取时间选择，分别考察了30，60，90，120 min，发现在 60 min 后（R，S）－告依春的含量未明显增加。结合节省成本和环境保护方面考虑，最终选择用水作为溶剂，超声（功率250 W，频率30 kHz）1 h为提取方法。

3．2 指标成分选择

2015年版《中国药典（一部）》中板蓝根颗粒质量控制方法为薄层鉴别，无法有效控制板蓝根颗粒的质量，无法确保板蓝根颗粒药品安全有效。考虑（R，S）－告依春抗病毒作用明显，且含量较大，选择（R，S）－告依春作为板蓝根颗粒的质量控制成分，并建立HPLC法测定含量，易于掌握，可控性好，准确度高，可作为控制板蓝根饮片和板蓝根颗粒中指标成分（R，S）－告依春的质量标准。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京:中国医药科技出版社，2015:205－206．

[2]肖培根．新编中药志[M]．北京：化学工业出版社，2002：562－566．

[3]叶未央，李祥，陈建高．板蓝根清热解毒作用机制的研究进展[J]．中医药导报，2010，16(12):107 －110．

[4]黄芳，熊雅婷，徐丽华，等．板蓝根不同提取物中抗病毒成分表告依春在大鼠体内的药代动力学[J]．中国药科大学学报，2006，37(6):519 －522．

[5]陈智伟，吴灵威，刘树滔，等．毛细管电泳法研究板蓝根水提物抗流感病毒的作用机制[J]．中国中药杂志，2006，31(20):1715－1719．

[6]胡新昌，程佳蔚，刘士庄，等．板蓝根凝集素效价与抑制感冒病毒作用关系的实验研究[J]．上海中医药大学学报，2001，15(3):56－57．

[7]韩光，陈百泉，许启泰．板蓝根含片的抗菌作用研究[J]．河南大学学报，2004，23(4):36 －37．

[8]杨元娟，杨元梅，夏之宁．板蓝根注射液抗菌活性的研究[J]．中国医药指南，2008，6(5):19 － 21．

[9]郑汝，梁锦丽．板蓝根不同提取部位抗菌活性的实验性研究[J]．海峡药学，2010，22(4):32－34．

[10]徐丽华，曹芳，陈婷，等．板蓝根中的抗病毒活性成分[J]．中国天然药物，2005，3(6):359 －361．

[11]王瑞，杨海英，杨琪伟，等．板蓝根的质量标准研究[J]．中草药，2010，41（3）:478 － 480．

[12]张叶，张蕾，王玉．RP－HPLC法测定板蓝根药材中腺苷和表告依春的含量[J]．药物分析杂志，2008，28(11):1848－1850．