HPLC法快速筛查抗痛风类中成药非法添加的6种化学药品

龙玉琼 汤 珺

（1 吉安市食品药品检验检测中心化学室，江西 吉安 343000；2 吉安市食品药品检验检测中心生测室，江西 吉安 343000）

痛风 (gout)是嘌呤类物质代谢紊乱，其生化标志是高尿酸血症，已成为威胁人类健康的严重代谢性疾病。西医治疗痛风[1-2]需要长期服药，其药物不良反应大。中医治疗痛风具有标本兼治，且不良反应小的优势[3]，故很多患者使用中成药治疗痛风。但中成药见效缓慢，造假者为了达到“神奇疗效”擅自添加化学药后见效快，患者信以为真，具有很强的欺骗性[4-6]。查阅相关报道及文献[7-8]抗痛风类中成药中最常非法添加的化学药为非甾体抗炎药和糖皮质激素。这两类虽见效快，但不良反应严重。本方法简单、有效，可快速筛查出抗痛风类中成药中是否添加4种糖皮质激素氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松和2种非甾体抗炎药吲哚美辛、布洛芬。且各市地级药检所实验条件有限，选择检验中常用的高效液相色谱法，能使该检测方法在更多的药检所及检验单位中推广使用。为药品检验机构和药品监管部门提供技术支持。

1 仪器与试药

Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪（安捷伦公司）；BP211D电子分析天平（赛多利斯公司）；AR2140电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；STARTER2100PH计（奥豪斯仪器上海有限公司）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司） 色谱柱：AnglientZORBAXSB-C18，5 μm，4.6×150 mm；DAD检测器；吲哚美辛对照品（中国食品药品检定研究院，批号100258-200904，纯度99.9%），布洛芬对照品（中国食品药品检定研究院，批号100179-201406，纯度99.5%），氢化可的松，地塞米松对照品（中国食品药品检定研究院，批号100129-201506，纯度99.8%）；醋酸泼尼松对照品（中国食品药品检定研究院，批号100012-201407，纯度99.5%）；醋酸地塞米松对照品（中国食品药品检定研究院，批号100122-201206，纯度100.0%），乙腈为色谱纯；水为超纯水；醋酸铵为分析纯；抗痛风类中成药样品3批，依次为痛风舒片、痛风定胶囊、二十五味驴血丸，均由本地药店购买。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：AnglientZORBAXSB-C18，5 μm，4.6×150 mm；柱温:35℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；流动相：乙腈-0.02 mol/L醋酸铵溶液（磷酸调PH至3.6） （45∶55）；检测器：二极管阵列检测器，检测波长：263 nm，以及190~400 nm紫外扫描光谱。此色谱条件下，6种待测化学物质的对照品与相邻峰分离度大于1.5，拖尾因子符合要求，典型的色谱图见图A。

2.2 供试品溶液的制备 取样品，研细，称取0.5 g，置10 mL量瓶中，加入甲醇5 mL，超声处理15 min，放冷，加甲醇至刻度，振摇使混匀放置取上清液滤过，取续滤液，即得。

2.3 混合对照品溶液的制备 取各对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL中含氢化可的松、地塞米松、醋酸波尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛约0.17 mg，布洛芬约1.70 mg混合对照品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 取处方中不含氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6种化学成分的抗痛风类中成药，按2.2项下的方法制备，即得。

2.5 阳性对照溶液的制备 精密称取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6种对照品，加入处方中不含上述6种化学成分的抗痛风类中成药中，混匀，按2.2的方法制备成每1 mL中含氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛对照品约0.12 mg，含布洛芬2.38 mg的溶液，即得。

2.6 方法专属性试验 通过对混合对照品溶液、阴性对照溶液、阳性对照溶液按2.1项下色谱条件分别进行检测，结果表明混合对照品分离度好，阴性对照溶液无干扰，阳性对照溶液能达到分离 (见图1、2、3)。

图1 混合对照品溶液色谱图

图2 阳性对照品溶液色谱图

图3 阴性对照品溶液色谱图

2.7 线性关系的考察 分别精密称取氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6种对照品，加甲醇稀释成一系列标准溶液，以对照品浓度为横坐标X，各自对应的峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，6种化学成分的线性回归方程、r值及线性范围见表1。

表1 6种化学成分的线性回归方程、r值及线性范围

2.8 精密度试验 精密吸取2.3混合对照液，按2.1项下色谱条件和方法，注入液相色谱仪，连续进样6次，氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬的RSD分别为0.05%，0.04%，0.04%，0.03%，0.04%，0.07%。

2.9 回收率试验 采用加样回收试验，精密称取同一批号阴性样品9份，分别精密加入一定量的对照品，照2.2项下方法制备成供试品溶液，按上述方法进行测定，氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬平均回收率分别98.80%，99.48%，97.20%，97.92%，100.35%，102.37%，其RSD分别为1.85%，2.27%，1.80%，1.80%，1.85%，1.82%。

2.10 稳定性试验 精密吸取2.3项下混合对照液，按2.1项下色谱条件下，每2 h测定1次，连续12次，结果表明6种化学成分的峰面积在24h内无明显变化，氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬的RSD分别为0.34%，0.38%，0.40%，0.37%，0.33%，0.29%。

2.11 样品的测定 取市售3批抗痛风类中成药制剂，分别按2.2项下方法提取各样品供试品溶液，按2.1项下色谱条件下测定，结果血3批供试品色谱图中均未呈现与对照品保留时间一致的色谱峰，即该3批样品均未非法添加上述6种化学成分。

3 讨论

3.1 高效液相色谱法检测波长的选择 参照中国药典2015年版二部及有关文献报道[8-10]，本试验中采用DAD检测器，同时选取254和276 nm及263 nm 3个参比波长进行比较，通过光谱图对比，布洛芬峰高偏低，其浓度为其他成分10倍时，与其他成分峰高相当，而其他5种成分在3个参比波长处均有较高峰高。故选用布洛芬的最大波长263 nm为本方法的检定波长。

3.2 提取方法的选择 氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬六种成分均在甲醇中溶解，故本试验采用甲醇超声溶解的提取方法，超声时间超过15 min后，六种成分的含量无明显差异，故确定超声时间为15 min。

3.3 流动相的选择 参照中国药典2015年版二部及有关文献报道[8-10]，实验中比较了3种流动相：①水-乙腈（50:50）峰型不理想，拖尾严重；②乙腈-0.02 mol/L醋酸铵溶液（磷酸调PH至3.6） （50:50）峰型好，但分离度略差；③乙腈-0.02 mol/L醋酸铵溶液（磷酸调PH至3.6） （45:55）峰型好，且分离度符合要求，25 min内6种成分全部出峰，故选择乙腈-0.02 mol/L醋酸铵溶液（磷酸调PH至3.6） （45:55） 为流动相。

3.4 本方法的实用性 本方法可同时快速筛查抗痛风类中成药中氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、布洛芬6种较为常见的抗痛风类化学成分，目前高效液相色谱仪在各地市、县、区食品药品检验机构已经普及使用，该方法简便快捷，可以满足基层药检所及检验单位对此类药物的快检筛查。

3.5 本方法的适用范围 本研究主要针对抗痛风类中成药中非法添加非甾体抗炎药和糖皮质激素两类6种化学成分，但该方法不仅限于此类抗痛风类中成药，同时止痛类、抗炎类中成药和保健品中非法添加上述6种化学成分，亦可采用本方法进行检测分析。

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