柴胡疏肝散对抑郁症大鼠行为学及旷场实验的影响※

吴晓玲 张贵锋*

（1 肇庆医学高等专科学校基础医学部，广东 肇庆 526020；2 华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；3 肇庆医学高等专科学校中医系，广东 肇庆 526020）

抑郁症（depression）是基因与环境交互影响的异质性重大精神疾病，主要表现为心境低落、兴趣减少、思维缓慢、运动迟滞、记忆力减退及睡眠障碍等，严重者可出现自杀倾向，具有高患病率、高复发率、高致残率、低治愈率等特点，严重威胁人们的生命健康。统计研究显示，近年来我国的抑郁症发病率有增高趋势，给社会造成了极大危害[1-2]。有研究认为脑内单胺类神经递质的缺乏是抑郁症的生物学基础[3]。抑郁症属于中医“郁证”等疾病范畴，多由情志不舒、肝气郁结引起，临床治疗时多采用疏肝理气法。研究表明，疏肝解郁的经典方剂柴胡疏肝散（《景岳全书》）对抑郁症临床症状有显著改善作用，但其具体机理尚未明确[4]。为阐明柴胡疏肝散治疗抑郁症的疗效机制，本研究选取清洁级健康成年雄性Wistar大鼠建立抑郁症大鼠模型，观察柴胡疏肝散对抑郁症大鼠行为学及旷场实验的影响。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 清洁级健康成年雄性Wistar大鼠32只，2～3月龄，体质量180～210 g，平均体质量 (197.36±8.69)g，由南方医科大学实验动物中心提供。将全部大鼠先进行常规适应性饲养7 d，饲养条件为：室温18～28℃，湿度60%～80%。根据随机数字表法将实验大鼠随机分为正常对照组8只、造模组24只。正常对照组大鼠常规饲养，造模组大鼠采用慢性不可预知性应激对进行造模。

1.2 造模方法 慢性不可预知性应激。第8天开始，造模大鼠每笼饲养1只，共接受21 d随机应激，含电击大鼠足底 (电流强度10 mA，每隔1 min刺激1次，每次持续10 s，共30次)、摇晃 (1次/s，15 min)、夹尾1 min、冰水游泳（4℃，5 min)、热应激 (45℃，5min)、禁水24 h、禁食24 h、昼夜颠倒，每日随机给予1种刺激，使大鼠不能预料刺激的发生，避免产生适应性。

1.3 干预方法 第28天造模结束，以糖水偏好实验、旷场实验等行为学指标为评价标准，判断造模是否成功。根据随机数字表法将造模成功后的24只大鼠随机分为柴胡疏肝散组8只、帕罗西汀组8只、模型组8只。从第29天开始，对各组大鼠分别进行2周不同的干预。①柴胡疏肝散组：每日予柴胡疏肝散灌胃治疗，按生药6.3 g（kg·d） 给药。2次/d，共治疗2周。②帕罗西汀组：每日予帕罗西汀灌胃治疗，按1.8 mg/kg给药。③模型组：给予蒸馏水灌胃处理，蒸馏水灌胃量同帕罗西汀组。④正常对照组：常规饲养，不予任何处理。各组均自由饮水摄食。

本研究的柴胡疏肝散采用中药配方颗粒（广东一方制药有限公司生产），按照中药饮片柴胡6 g，醋炒陈皮6 g，白芍4.5 g，麸炒枳壳4.5 g，川芎4.5 g，香附4.5 g，炙甘草1.5 g的比例组方，将中药配方颗粒换算成中药饮片剂量；帕罗西汀采用盐酸帕罗西汀片（中美天津史克制药有限公司生产，批准文号:H10950043，规格：20 mg×10片×1板/盒）。

1.4 观察指标 分别于实验第1天、第14天、第28天、第35天、第42天进行体重测定、糖水偏好实验 (SPT)、旷场实验 (OFT)，记录相关数据。

1.4.1 体重测定 分别测定并记录4组大鼠的体重，然后计算比较各组大鼠体重的变化。

1.4.2 SPT①安静环境内训练大鼠适应含糖饮水，每笼放2个相同饮水瓶。第1个24 h内，2瓶为同等重量1%庶糖水；第二个24 h内，1瓶为1%庶糖水，1瓶为同等重量纯净水。随后禁食禁水23 h；②同时予2个相同饮水瓶，1瓶为1%庶糖水，1瓶为同等重量纯净水，1 h后测量消耗量。测量指标：糖水消耗量、糖水偏好度（糖水消耗量/总液体消耗量×100%）。

1.4.3 OFT①实验箱底部平均划为25格，中央9格为中央区域，其余16格为外周区域；②在安静且昏暗的房间，捏住大鼠尾巴（距根部1/3处）轻放入实验箱中央，观察其在5 min内总活动路程和中央区域停留时间，红外照明，摄像头记录过程；③1次OFT后清理箱内粪便等残留物，喷洒酒精并用纱布拭擦干净，以除去上一只大鼠的气味，避免影响下一只大鼠实验结果。

1.5 统计学方法 采用数据处理软件SPSS 21.0进行分析，组间计量数据以计，比较采用单因素方差分析，组间多重比较用LSD法；采用重复测量资料方差分析比较不同时间点体重，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠体重变化比较 造模前4组大鼠体重之间比较差异不具有统计学意义 (P＞0.05)，具有可比性。实验第14天、28天、35天、42天，4组大鼠体重均依次增加。实验第35天、42天，帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠体重比模型组大鼠体重增加更为明显，差异具有统计学意义 (P＜0.05)；柴胡疏肝散组大鼠体重增加与帕罗西汀组体重增加比较无显著性差异 (P＞0.05)。见表1。

表1 各组大鼠体重变化比较 （x±s，g）

2.2 第42天各组大鼠行为学检测结果 模型组、帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠糖水偏好百分比均明显低于正常对照组，帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠糖水偏好百分比均明显高于模型组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)；模型组、帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠悬尾不动时间、逃避潜伏期均明显长于正常对照组 (P＜0.05)，帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠悬尾不动时间、逃避潜伏期均明显短于模型组 (P＜0.05)；柴胡疏肝散组大鼠悬尾不动时间、逃避潜伏期短于帕罗西汀组，但差异均无统计学意义 (P＞0.05)。见表2。

表2 第42天各组大鼠行为学检测结果比较 （x±s）

2.3 第42天各组大鼠旷场实验结果比较 各组大鼠之间接触时间、跨格次数以及竖起次数相比较差异明显，差异均具有统计学意义 (P＜0.05)；模型组、帕罗西汀组、柴胡疏肝散组接触时间、跨格次数以及竖起次数均明显高于正常对照组 (P＜0.05)；帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠接触时间、跨格次数以及竖起次数均明显低于模型组 (P＜0.05)；柴胡疏肝散组大鼠接触时间明显低于帕罗西汀组，差异具有统计学意义 (P＜0.05)，但2组跨格次数、竖起次数比较无显著差异 (P＞0.05)。见表3。

表3 4组大鼠旷场实验结果比较 （x±s）

3 讨论

抑郁症是一种临床上十分常见的心境障碍，世界卫生组织（WHO）资料显示，每年全球有1.21亿患者倍受抑郁症折磨，2020年抑郁症将成为危害人类健康的第二大疾病，占全球疾病负担的15%[5]。1项关于因病伤残 (功能缺损)原因的统计结果发现，抑郁症致残仅次于慢性阻塞性肺部疾病，且在未来20年将成为人类尤其是女性死亡及残疾的首要原因，故有关抑郁症的防治研究已成为各国卫生医疗机构研究的热点问题[6-7]。

近年来，有关抑郁症发病机制方面的研究已取得了一定进展，但对于抑郁症的临床治疗效果仍不甚理想；目前的抗抑郁药物仅对70%左右的患者有效，治愈率仅为30%，起效时间2～4周，存在起效较慢、治愈率不高、不良反应多等问题，不能满足患者对治疗及时起效的需要以及对治疗结局的期待[8]。基于中医药不良反应少、整体调节等优势，中医药抗抑郁作用近年来引起了国内外学者的广泛关注。大量的临床研究和实践表明，中药复方治疗抑郁症尤其是症状较多及病程较长的抑郁症，有显著治疗效果[9]。因此，通过发挥中医药特色及优势来研发治疗抑郁症的中药新药有非常好的前景[10]。柴胡疏肝散出自《景岳全书》，方中柴胡、白芍、香附、郁金疏肝理气，川芎、当归活血化瘀，陈皮、茯苓健脾化痰，诸药合用共奏疏肝理气解郁之功，用于情志失调所致病证，是中医治疗肝气郁结证的常用基础方剂[11]。实验研究证实，柴胡疏肝散在治疗多种抑郁性精神障碍方面均具有显著疗效，分析可能是与中药具有多层次多靶点和整体调整的作用有关[12]。

已有研究表明，抑郁症大鼠的行为学会发生改变，行为学评价及旷场实验结果可用于判定抑郁症大鼠造模是否成功和药物干预效果的观察指标[13]。本研究结果显示，柴胡疏肝散对抑郁症大鼠的行为学及旷场实验均有显著影响：实验第35天、42天，对比模型组，帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠体重增加更为明显。实验第42天，对比正常对照组，模型组、帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠糖水偏好百分比均显著偏低，悬尾不动时间、逃避潜伏期显著延长，接触时间、跨格次数、竖起次数均明显增高；对比模型组，帕罗西汀组、柴胡疏肝散组大鼠糖水偏好百分比均明显增高，悬尾不动时间、逃避潜伏期显著缩短，大鼠接触时间、跨格次数、竖起次数均明显降低。但柴胡疏肝散组与帕罗西汀组大鼠体重增加量、悬尾不动时间、逃避潜伏期、跨格次数、竖起次数比较没有显著差异。以上研究结果提示，柴胡疏肝散可明显缓解抑郁症大鼠的情绪低落、兴趣感减退、精神意志运动迟滞及记忆力减退等症状，但不能在短时间内使抑郁症状完全恢复正常；柴胡疏肝散抗抑郁效果与帕罗西汀无显著差异。

综上所述，柴胡疏肝散对抑郁症大鼠具有明显的抗抑郁作用。但是，本研究选用大鼠数量偏少，观测指标不全面，需要进一步完善。

[1]刘继刚，袁杨，臧蔚，等.柴胡疏肝散对抑郁大鼠海马微管相关蛋白-2磷酸化的影响[J].贵阳医学院学报，2016，41(4):387-390.

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[3]刘英，徐爱军，田艳霞，等.柴胡疏肝散对抑郁症大鼠海马5-HT及5-HT1A表达的影响[J].河北北方学院学报(自然科学版)，2013，29(5):65-67，70.

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[6]孟盼，赵洪庆，杜青，等.左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡的影响[J].中国中医药信息杂志，2016，23(9):78-81.

[7]王永志，赵静洁，杜仪，等.柴胡疏肝散对抑郁症大鼠行为学的影响[J].北京中医药，2012，31(10):783-785.

[8]徐爱军，刘昊，田艳霞，等.柴胡疏肝散对抑郁症大鼠行为学和海马神经元凋亡及自噬的影响[J].吉林大学学报(医学版)，2014，40(4):801-804.

[9]朱玉英，纪荣静，熊佩黎，等.抑郁症大鼠海马神经元凋亡率和自噬相关蛋白的改变[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2013，22(6):471-474.

[10]凌佳，杨琴，刘检，等.左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症环境下模型大鼠海马神经元凋亡相关蛋白的影响[J].中国中医药信息杂志，2017，24(10):35-39.

[11]马书娟，姚建平，樊蔚虹，等.柴胡疏肝散对抑郁症模型大鼠HPA轴功能的影响[J].中国中医基础医学杂志，2014，20(9):1210，1280.

[12]曹美群，陈德珩，张春虎，等.抑郁模型大鼠海马内特异性microRNAs的筛选以及柴胡疏肝散的干预作用[J].中国中药杂志，2013，38(10):1585-1589.

[13]薛涛，邬丽莎，刘新民，等.抑郁症动物模型及评价方法研究进展[J].中国实验动物学报，2015，23（3）：321-324.