培养基模拟灌装试验的结果观察与样品管理

吴美杰 王连群 张春峰 张正义

（国药集团贵州血液制品有限公司，贵州黔东南556011）

0 引言

在GMP中，培养基模拟灌装试验是无菌药品生产管理的重要组成内容。从国内外模拟灌装试验的一般法规到具体的指导原则，都体现出了对培养基模拟灌装试验的高度关注。尤其需要关注的是，这些法规和指导原则都提出，应对灌装生产过程中的各种考察因素和最差条件进行试验考察，以确保模拟灌装试验的微生物培养结果能真正代表无菌药品灌装生产的微生物污染水平。

笔者结合多年的实际操作经验，得出以下基本结论：培养基模拟灌装试验绝对不是单纯对模拟试验这个生产过程进行管理，而是将模拟灌装试验所得到的培养基样品的微生物培养结果与无菌产品生产的无菌检查结果相结合进行互动管理才是有意义的。关于模拟灌装过程的考察因素及试验方案设计的研究有很多，本文拟对培养基模拟灌装试验的结果与样品管理进行初步探讨。

《GMP指南：无菌药品》给出了较详细的“无菌工艺模拟试验结果解读”，对模拟灌装试验的结果处理及污染调查提出了指导意见：当培养基灌装结果出现污染时，不管是否符合标准，都必须进行调查，科学评估无菌工艺的可靠性以及上市产品可能存在的风险。对于超出标准的结果，应当在调查清楚培养结果超标的原因后，再次进行培养基模拟灌装生产。也就是说，培养基模拟灌装试验的结果更多地要用于评估生产线的无菌操作工艺的可靠性以及上市产品可能存在的风险。因此，有必要强调建立将模拟灌装试验的微生物培养结果与产品生产的无菌检查结果评价相结合的管理规程及操作规程。比如，在模拟灌装试验方案和报告中明确要求，将培养基模拟灌装试验的结果与该生产周期中的所有生产批次产品的灌装检查结果进行对比分析，确认两者之间的差异情况，进而评估模拟灌装试验结果与产品生产结果评估的相关程度和可靠性。

1 培养基模拟灌装试验的培养与结果观察

培养基模拟灌装试验所要考察的因素应当包括可能影响产品无菌性能的每一个要素（应注意这里是一个数学上的全集概念，缺少其中任何一个因素的子集都很可能会被认为是无效的），一般灌装好的培养基样品在进行恒温培养前需要进行反复（3～5次，每次停留2～3s）倒置与振摇，这样做的目的是确保所有的产品部件都接触到了培养基，使可能携带的微生物可以很好地进入到灌装好的培养基中，并且得到有效培养并最终表现出来。

此外，需注意的是，在培养基模拟灌装过程中已经发生异常的培养基样品的结果可以不纳入培养基试验结果中，不用于试验结果的评估，但是仍需要按照正常程序进行处理，并且按照既定分组观察其污染情况。对于与密封性无关的缺陷（如外观缺陷）样品也应进行培养，不得简单地直接将这部分样品（或其微生物培养结果）剔除。有密封性缺陷的样品可作废品剔除，但应当记录剔除数量和原因。培养过程中发现的任何损坏样品，也应列入培养基灌装试验的批记录数据中。如果要将这类已培养的样品从最后的结果判定计算中剔除，则必须充分说明理由，并在培养基灌装试验报告中做出合理解释。

通常培养基样品的培养温度应适宜于一般微生物和环境分离菌的恢复生长，药品生产企业采用的常规做法是PIC/S推荐的先在20～25℃下培养7天，然后将培养基样品倒置，在30～35℃下培养7天，在样品倒置处理过程中注意观察样品培养结果。当培养结果出现阳性时，需要对样品进行拍照（照片上应保存当前时间和地点），并将样品移出培养间直至远离生产区域再作处理。需要注意的是，阳性培养基样品的进一步处理及微生物种属的鉴定都需要额外处理，必要时，还要评估确保这些处理方法不会对生产车间、产品生产、无菌试验等产生不良影响。

培养基样品就是模拟灌装试验的产品，经过两个阶段的培养，参照常规产品的结果检查事项，对培养基的培养结果进行检查，除了需要关注污染、长菌的结果之外，还要关注产品灌装的常规异常，比如加塞异常、轧盖异常、玻璃瓶裂纹、黑点、纤毛、玻璃碎屑等。对于各种异常，应建立账本进行登记，并保存相应的样品或者照片。将培养基模拟灌装试验的结果与该生产周期中的所有生产批次产品的灌装检查结果进行对比分析，以便确认两者之间的差异情况。

在样品培养检查过程中发现的所有被怀疑可能受到污染的样品，应立即交给质量检测试验室的微生物专业人员进行鉴定处理。假如难以判断微生物污染是由损坏引起，还是本身就存在，则应进行调查，以确定原因。

为评估产品正式灌装前的污染风险，可将用于先期调试的样品全部单独培养以获得有价值的信息。这些样品的培养结果可以不计入最后的培养基模拟灌装试验结果。培养基灌装记录应包括对一整批灌装过程中报废数量的详细说明。

2 培养基模拟灌装试验异常结果的调查与样品管理

培养基培养完成后，目检培养基是否浑浊，是否有微生物生长。培养基样品的检查要由经过培训、有资质的能够发觉微生物生长迹象的人员负责。需要注意的是，并不是所有的污染都会明显表现出来，当出现疑似污染时，应进一步培养观察，并做增菌试验。

结合GMP要求，钱静杰[1]等总结出了培养基模拟灌装试验失败调查的内容，包括：生产环境的监控数据评估、对培养基污染的评估、替代粉末无菌测试的评估、对气体取样结果的评估、对水的微生物的评估、对培养基的评估、悬浮粒子监控评估、清洁和消毒评估、模拟灌装用无菌消毒剂的配制检查、人员评估、干预操作的评估、灌装生产设备的评估等。

培养基模拟灌装试验检查结果合格后，一般都会将培养基样品进行报废处理，具体程序参照产品报废程序进行。笔者认为，即便是培养结果正常的无污染培养基样品的报废，也应保存到下一个生产周期之后再进行处理比较合适。

对于无微生物污染的其他检查结果异常的产品，比如加塞异常、轧盖异常、玻璃瓶裂纹、黑点、纤毛、玻璃碎屑等，应保存样品且拍照。样品可以用于对检查过程的可靠性进行重复考察。对于这些异常样品，可以按照GMP认证周期进行管理，保存5年。

对于微生物污染的样品，拍照后及时清理生产区，并对培养环境做必要的清洁消毒。然后送到质量检测试验室进行微生物鉴别考察，以便确定污染来源。鉴别结果也应拍照，所有拍照结果有必要向模拟灌装试验的相关人员进行讲解，增强对无菌灌装生产与培养基模拟灌装试验的微生物污染风险的认识，以便更好地控制微生物污染。

3 结语

培养基模拟灌装试验用于生产周期内产品生产的无菌保障能力的评估，毫无疑问，在模拟灌装试验的管理过程中，需要结合生产线的具体情况，建立培养基样品的微生物培养检查结果与产品生产的无菌检查灌装结果之间的关联性，这样才能确保这种评估的可靠性和实际的生产管理意义。相反，如果没有完成这项工作，再多的、生产规模再大的模拟灌装试验只能是徒增企业管理生产成本，毫无价值可言。

对于培养基样品的异常结果，应给予与产品异常结果同等的关注，不断探索微生物培养结果检查过程和微生物培养结果判定的可靠性，确认培养基试验的微生物培养结果与产品灌装生产的无菌检查结果之间的高度关联性，是模拟灌装试验的终极目的。同时，在设计培养基模拟灌装试验方案时，考察无菌灌装生产过程的最差条件、因素同样重要，可以确保产品生产的无菌保障能力的有效性和可靠性。