奶牛隐性乳房炎的几种诊断方法

2018-02-16薛银

畜牧兽医科技信息 2018年10期

薛银

（浙江省动物疫病预防控制中心，浙江杭州 310002）

奶牛乳房炎（Mastitis）是奶牛场危害最大，投入费用最多，防治工作最难的疾病之一。隐性乳房炎在奶牛乳房炎中所占比例最大，由于乳汁无肉眼可见明显的变化加上临床症状不明显，所以很容易被忽视。由于患病奶牛乳汁理化性质发生改变，体细胞含量升高，乳腺组织发生明显的病理学变化，给奶牛养殖业和乳品加工业造成了严重的经济损失。而且由于牛奶品质发生变化，给乳品食品安全问题带来一定的隐患。

奶牛乳汁中的酶类，体细胞数量、各种成分的含量、乳汁的pH等在正常的乳腺细胞中是大体上不变的，但在患有乳房炎的奶牛中各项指标有明显变化。目前诊断隐性乳房炎方法主要有分子生物学方法、乳中酶类检验法、乳汁细胞学检查、乳汁病原微生物检查、乳汁pH检查、乳汁导电性检查、乳清电泳诊断法等。本文介绍几种常用以及仍处在研究中的几种隐性乳房炎的诊断方法，供养殖场户和科研工作者参考。

1 分子生物学方法

分子生物学的检测方法主要是PCR的方法。可以根据感染隐性乳房炎的相关的各种主要的致病微生物，比如金黄色葡萄球菌等设计相关的引物，从而建立一种多重PCR的方法来检测这些致病原，进而检测隐性乳房炎。这种分子生物学的检测方法需要有专门的兽医科技人员来完成。养殖场（户）可以通过第三方检测机构来实现。

2 乳中酶检测方法

乳汁中的各种酶类在发生乳房炎时会有一个明显的变化，这些指标的变化可以作为诊断奶牛隐性乳房炎的指标。结合珠蛋白 (haptoglobin，HP)是奶牛的一种主要急性期蛋白（acute phase protein，APP），牛乳中HP含量的变化能准确地反映乳房炎的炎症程度并可以评价治疗的效果。曹随忠等利用乳汁中结合珠蛋白作为奶牛隐性乳房炎诊断指标，其阳性值达94.7%。

乳汁中的炎性细胞比如单核细胞、中性粒细胞等在奶牛患乳房炎之后会释放一种嗜天青颗粒，髓过氧化物酶（MPO）作为这种嗜天青颗粒的主要成分，在炎症过程中会大量释放，参与杀死病原微生物的过程中。所以髓过氧化物酶的大量升高可以作为监测奶牛隐性乳房炎的重要指标。

在奶牛患隐性乳房炎之后，损伤的乳房组织细胞和乳汁中的大量白细胞还会释放一种叫乳酸脱氢酶的酶，黄利权等通过选择奶牛正常乳区和患有隐性乳房炎的奶牛乳区，通过检测此酶发现在患有隐性乳房炎的奶牛的乳汁中乳酸脱氢酶的含量有显著升高。所以这个酶可以作为诊断奶牛隐性乳房炎的一个指标。

乳中的 N-乙酰基 -D-氨基葡萄糖苷酶（N-acety1-β-D-glucosaminidase）也是损伤的乳腺细胞和乳汁中的白细胞产生的。在患病的奶牛中，由于致病的微生物对乳腺组织的破坏，大量的N-乙酰基-D-氨基葡萄糖苷酶会释放到乳腺组织中。因此检验乳汁中的N-乙酰基-D-氨基葡萄糖苷酶便能检测出奶牛患有隐性乳房炎。

3 乳汁中体细胞检查方法

在正常的牛奶中，通常每毫升体细胞数在20万以下我们认为是合格的牛奶。体细胞数越低，说明奶牛越健康，牛奶品质越好。牛奶中的体细胞主要包括一些炎性细胞，比如淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等，还有一部分是被破坏的乳腺细胞。奶牛患隐性乳房炎后，这些细胞的含量会有明显的提高。所以通过检测牛奶中的体细胞数就可以来判断奶牛是否患有隐性乳房炎。通常的方法是将牛奶混合后取一定的量制作涂片，通过人工计数的方法来判断。但是这项工作耗时耗力，得不偿失。现在已经有专门的自动体细胞计数仪产生，比如瑞典的福斯体细胞计数仪，通过流式细胞技术，取2mL左右的牛奶样品，通过染色等自动工序，可以准确的检测出牛奶中的体细胞数，方便快捷，但是设备成本很高。根据乳汁中的体细胞在表面活性剂等的破坏下，会释放出DNA，再经过一些反应乳汁会出现凝集结块等，可以据此来判断乳房炎的严重程度，轻微凝集设为“+”，中度凝集“++”，重度凝集“+++”，据此可以直观的监测奶牛隐性乳房炎。比如浙江大学奶业科学研究所研制的奶牛乳房炎快速诊断方法，就是基于这个原理。但是这个方法也存在一定的问题，检测过程中有假阳性的存在。

4 乳中病原微生物学检查

引起奶牛患隐性乳房炎的主要因素是致病的微生物。细菌、真菌、支原体等都会引起疾病的发生。临床上检测出的致病菌主要包括金黄色葡萄球菌、嗜热链球菌、埃希大肠杆菌等，这些病菌占了发生乳房炎的绝大部分。但是，虽然有些致病菌存在于乳汁中，但是奶牛的抵抗力比较强，并不一定会发病。另外还有样品污染的问题，养殖场户可以通过细菌、真菌培养做出一个初步诊断。