山羊布鲁氏菌病的血清学调查

2018-02-16杨艳明李登峰

畜牧兽医科技信息 2018年10期

杨艳明，李登峰

（1.云南省曲靖市罗平县畜禽改良工作站，云南罗平 655800；2.云南省曲靖市罗平县动物疫病预防控制中心，云南罗平 655800）

布鲁氏菌病（Brucellosis，简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起的人畜共患的常见传染病，世界动物卫生组织（OIE）将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。布鲁氏菌是一种细胞内寄生的病原菌，主要侵害动物的淋巴系统和生殖系统，人主要是通过皮肤、粘膜、消化道和呼吸道感染，人感染布病主要表现为发热，全身无力及盗汗，四肢关节疼痛。转为慢性者伴有关节炎、脑膜炎，可能丧失劳动能力和生育能力，治疗很困难。感染牲畜平时无明显症状，只是在怀孕以后易流产，首次感染的群体常发生大量流产，流产前阴门排出黏液或带血的黏性分泌物。流产后常伴有结膜炎、乳腺炎和跛行。以后个别母羊可能不孕，公羊表现为睾丸炎、附睾炎或关节炎。罗平县地处滇、黔、桂三省结合部，是全国著名的旅游胜地，为此，开展对罗平布病的调查具有重要的公共卫生意义。

1 材料与方法

1.1 样本来源

10274份被检血清由全县各乡、镇（街道）畜牧兽医站采集于13个乡（镇、街道）122个行政村434个自然村2749（场）户。采集分离的血清，－20℃保存备用。

1.2 检测试剂及仪器

布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原（批号：2017/08/10），布病阳性标准血清、布病阴性标准血清；布鲁氏菌病试管凝集试验抗原（批号：2017/06/20），匀由中国兽医药品监察所生产，于2～8℃冷藏保存备用。洁净的一次性反应板，其上已有划好的4cm的圆圈，20～200μL单道移液器、500μL单道移液器、1000μL单道移液、200μL、500μL、1000μL吸头，试管、试管架、二级生物安全柜，恒温培养箱等。

2 检测方法

2.1 虎红平板凝集试验

实验前，将血清和抗原在室温放置30～60min。在一次性反应板上各格标记好被检血清号，然后加相应被检血清30mL。在被检血清旁滴加虎红平板凝集试验抗原30μL。用吸头搅动血清和抗原，换吸头，使之充分混合，在4min内观察结果，设阴性血清、阳性血清对照。

2.2 试管凝集试验

每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第1管加1.15mL稀释液，第2～4管各加入0.5mL稀释液。取被检血清0.1mL，加入第1管，充分混匀后吸弃0.25mL弃去。从第1管中吸取0.5mL加入到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5mL，至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去0.5mL，稀释完毕。然后将0.5mL的20倍稀释的抗原加入各管中。山羊的血清稀释度 1:25、1:50、1：100、1：200。所有试管充分震荡混匀后，置37℃温箱培养24h。

3 结果判定

3.1 虎红平板凝集试验

在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。受检血清在4min内，出现肉眼可见不同成度颗粒状或絮状凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。出现阳性的再用试管凝集试验进一步检测。

3.2 试管凝集试验

当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(-)，阳性血清的凝集价达到其标准效价±1个滴度，则试验成立，可以判定。否则试验应重做。山羊血清样品于1:50血清稀释度出现“++”以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。

4 结果

10274份山羊血清样品，检出阳性羊185只，全县平均阳性率为1.8%，羊布病血清学阳性分布范围涉及7个乡（镇、街道）12个行政村16个自然村，其中罗雄为6.45%，马街为2.39%，阿岗为1.54%，富乐为1.48%，旧屋基为0.23%，老厂为0.13%，大水井0.08%。本次试验调查结果表明，罗平山羊布病血清阳性率较高，