非酒精性脂肪性肝病进程中VAP—1/SSAO的动态变化

高蕾 陈曦 欧喜燕

【摘 要】目的：探究非酒精性脂肪性肝病进程中VAP-1/SSAO的动态变化。方法：选择SD大鼠60只，按照体重分为对照组和模型组，每组各30只。于8、16、24周末分别取样进行相关指标的检测。结果：模型组血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1、sVAP-1含量明显增高（P<0.001）。结论：随着疾病的进展血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1、sVAP-1等指标会发生明显变化，持续的炎症反应是驱动NAFLD进展的关键因素。

【关键词】 非酒精性脂肪肝；进展；VAP-1/SSAO；动态变化

【中图分类号】R249 【文献标志码】B 【文章编号】1005-0019（2018）24-206-01

非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease， NAFLD）包括单纯性脂肪肝（Simple fatty liver， SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic fatty hepatitis， NASH）及其相关肝硬化，是遗传-环境-代谢应激相关性疾病。本研究将通过动物实验观察大鼠在非酒精性单纯脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纤维化不同阶段时VAP-1及其酶活性水平的动态变化，以期为治疗疾病、阻断疾病进展提供新的靶点。

1 实验动物与分组

SD大鼠，清洁级，雌雄各半，220-250g，60只。适应环境后按体重随机分为2组，分别为空白对照组30只；模型组30只。

NAFLD模型复制：模型组动物给予复合高脂饲料饮食（高脂饲料配制方法如下：在77%基础饲料基础上，加入3%胆固醇、10%猪油和10%蛋黄粉。投食量约为：25g/鼠/天。）。每周称重1次，持續造模24周。空白对照组动物给予正常饮食、水。

2 检测指标

于8、16、24周末分别取样进行相关指标的检测。第8、16、24周末，动物禁食不禁水12h，以20%乌来糖溶液麻醉（5ml/kg体重）后，腹主动脉取血，4℃，3000rpm/min，10min，取血清保存备用。采用酶联免疫法检测大鼠血清中IL-6、TNF-α含量；检测大鼠血清中TGF-β1（转化生长因子-β1）含量；检测大鼠血清中sVAP-1（可溶性血管粘附蛋白-1）含量及血清SSAO酶活性（氨基脲敏感单胺脱氧酶）。

3 统计学方法

所列数据以均数加减标准差（x±s）表示，统计学处理方法采用组间t-检验。采用Excel2000软件进行统计学处理。

4 结果与讨论

4.1 两组大鼠血清中相关炎症因子的表达

目前“二次打击”学说在NAFLD发病机制中的重要地位已得到一致认可。第一次打击是指胰岛素抵抗（insulin resistance， IR）导致脂质在肝细胞的蓄积。但IR发生机制尚未完全阐明，近年来炎症病因学理论备受关注，IR和慢性低度炎症状态有关。氧化应激是“二次打击”学说的第二次打击，通常认为氧化应激在肝脏炎症的发生中起重要作用，研究表明，随着高脂饮食时间的延长，该组大鼠肝组织脂肪变与炎症程度均逐渐加重。NAFLD包含一系列的表现，包括从脂肪变性到炎症、纤维化、肝硬化的不同疾病发展阶段，这一进展过程确切机制尚不清楚，但对肝损伤持续的炎症反应是驱动疾病进展为肝纤维化、肝硬化甚至肝细胞癌的关键因素。

本实验结果表明，造模8、16、24周，模型组大鼠与正常对照组比较，其血清中IL-6、TNF-α含量明显增高（P<0.001）。

4.2 大鼠血清中TGF-β1的表达

TGF-β是属于一组新近发现的调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。近年来发现TGF-β对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用。一般来说，TGF-β对间充质起源的细胞起刺激作用，而对上皮或神经外胚层来源的细胞起抑制作用。TGF-β可以促进成纤维细胞的生长，加速肝纤维化的发展，加重肝损害。

本实验结果表明，造模8、16、24周，模型组大鼠与正常对照组比较，其血清中TGF-β1含量明显增高（P<0.001）。

4.3 大鼠血清中sVAP-1的表达及血清SSAO酶活性

血管粘附蛋白1（Vascular adhesion protein-1，VAP-1）由AOC3基因所编码，是一个内皮粘附分子，与白细胞从血液迁移进入炎症组织有关，与其他众多粘附分子相比，VAP-1的不同之处在于它是一个表达于细胞表面的酶，氨基脲敏感单胺脱氧酶（Semicarbazide-sensitive mono-amine oxidase，SSAO），属于氨基脲胺氧化酶家族（也称为伯胺氧化酶），因此VAP-1具有双重功能。VAP-1属于SSAO家族，VAP-1的酶活性对其发挥粘附功能具有重要作用，并且通过其生物活性产物调节转录因子、趋化因子和其他粘附分子表达从而协同调节炎症微环境。正常状况下VAP-1储存在常驻内皮细胞内颗粒中，在炎症发生早期，VAP-1迅速转位到细胞表面，参与白细胞在炎症部位的募集，同时也在白细胞在内皮的滚动、粘附和迁移环节等入侵级联调节中发挥重要作用，协助白细胞从血液进入组织。本实验结果表明，造模8、16、24周，模型组大鼠与正常对照组比较，其血清中sVAP-1含量明显增高（P<0.001），血清SSAO酶活性明显增高（P<0.001）。

5 小结

本研究通过采用高脂饮食诱导的方法建立NAFLD大鼠模型，观察NAFLD模型大鼠在疾病进展的不同阶段其炎症因子水平（血清中IL-6、TNF-α）的变化；纤维化相关细胞因子水平（血清中TGF-β1）的变化；及血清中sVAP-1和血清SSAO酶活性的表达，结果发现，随着疾病的进展，以上各指标均发生明显改变。由此可见，持续的炎症反应是驱动NAFLD进展的关键因素，我们推测，在此过程中VAP-1/SSAO起着复杂的作用，它既能促进初始肝损伤时肝脏的白细胞招募，又通过其生物活性协同调节炎症微环境，从而在炎症慢性化、以至肝纤维化的进程中起重要作用[1，2]。本研究为NAFLD的治疗提供了新的靶点。

参考文献

[1] 黄婷婷，赵丽娟，姜双燕，等.快速复制大鼠非酒精性脂肪性肝病模型及主要脏器的病理变化[J].西北国防医学杂志2018（2）：71-74.

[2] 舒祥兵，张莉，黄杰，等.铁超载与非酒精性脂肪性肝病的关系及其作用机制的研究进展[J].世界华人消化杂志，2016（22）：81-86.