黄连解毒汤抗脑缺血研究进展及展望*

★ 王文杰 陈赛贞 徐红燕 徐煜彬* 陈桂荣（.台州市中心医院/台州学院附属医院浙江 台州 38000；.辽宁中医药大学药学院 辽宁 大连 6600）

脑梗死又叫缺血性卒中，为临床常见病和多发病，具有高发病率、高致残率和高死亡率的特点，严重影响患者的健康以及生存质量，其病理机制比较复杂，目前临床治疗效果欠佳［1］。脑部供血不足会引起脑组织区域性缺血、低氧从而导致脑组织损伤出现一系列生理病理的变化［2］。及时恢复脑组织血液供应是挽救脑缺血患者生命的最优方法，但是恢复血流灌注后又会带来相应的问题，包括急性炎症反应会造成继发性脑损伤［3］。如何防治脑缺血再灌注损伤一直是目前研究的热点，探讨脑缺血再灌注损伤的有效防治也成为医学领域的重要课题之一。

黄连解毒汤出自《外台秘要》，其方由黄连、黄芩、黄柏及栀子组成，为清热解毒代表方，主治一切湿热火毒、三焦热盛之证。现代药理学研宄表明，黄连解毒汤具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗血小板聚集、抗内毒素作用、降糖降压调脂作用、抑制肝损伤、抑制脂肪细胞分化及抗脑缺血作用［4］。近年来，在“毒损脑髓、脑络”的中医理论观点指导下，黄连解毒汤已被广泛应用于治疗脑血管疾病［5］。本文对近年来黄连解毒汤应用于临床脑缺血病人及脑缺血动物模型研究等进行了综述。

1 临床研究

彭星铭［6］采用加味黄连解毒汤治疗高血压中风先兆患者30例，临床治愈5例，显效12例，有效10例，无效3例，总有效率为90.0%，并且明显改善患者血压指标，认为其作用机制可能与降低血压，从而降低血粘度改善脑部循环有关。何文志［7］对通过对52例患者给予黄连解毒汤胶囊治疗后，临床总有效率为96.2%，有效率为57.7%，显效率为38.5%，而且患者的各项临床指标较治疗前得到明显改善。李鹏等［8］在给予50例缺血性中风患者尼可林、复方丹参注液和低能量氦氖激光血管内照射的基础上再给予黄连解毒汤加味内服进行治疗，发现总有效率为92.0%（46例），其中基本治愈率达72.0%（36例），认为在缺血性中风的临床治疗中加入黄连解毒汤能显著增加治愈率。陈桂霞［9］给予30例缺血性中风患者常规治疗基础上加用黄连解毒汤加味治疗，总有效率为93.3%，显著高于基础治疗（66.7%），神经功能恢复也更加的明显。王革生等［10］在常规治疗的基础上采用黄连解毒汤治疗急性脑出血患者64例和脑梗塞患者87例，治疗14d后，两组患者各项炎症指标Hs-CRP、Ox-LDL以及MMP水平均明显降低，认为黄连解毒汤对两种疾病均由临床改善作用，效应机制可能与炎症因子调节相关。何武等［11-12］在西医综合疗法基础上加用黄连解毒汤对24例脑梗死患者进行为期2周的治疗，发现治疗后患者血中同型半胱氨酸含量、高敏C反应蛋白和神经功能缺损评分值均显著下降，并且优于单纯的西医综合疗法，认为黄连解毒汤能减轻患者的炎症反应，降低神经功能缺损起到保护脑组织的作用。李锐鹏［13］在西医常规疗法的基础上加用黄连解毒汤对32例脑梗死急性期火热证患者进行治疗，治疗2周后，患者血浆中TNF-α、IL-6含量明显降低，神经功能缺损评分也明显减少，治疗前后火热证证型也显著减少，治疗效果明显优于单纯的西医常规疗法。陈隐漪对20例急性脑梗死患者给予黄连解毒汤，分别于第7d和第15d检测患者血中IL-6和TNF-α含量，发现两者含量显著降低，认为黄连解毒汤能有效地他通过清热解毒泻火，发挥疏导蕴结之热毒、痰浊的作用［14］。史一峰等［15］采用黄连解毒汤治疗中风后遗症患者34例，其中12例治愈，20例显效，总有效率为94.1%。张建平［16］采用清热泄火解毒50例治疗急性脑血管病患者（以黄连解毒汤为主方），结果治愈21例，显效15例，有效9例，总有效率为95.0%，同时发现该方法对消化道应急性溃疡有较好预防效果。青发基在常规治疗方法上加用加味黄连解毒汤治疗48例急性脑梗死患者，基本治愈率为35.4%，显效率为81.2%，效果明显优于单纯的常规治疗［17］，与姜崇智［18］及彭世桥等［19］临床研究较为一致。温跃才［20］用加味黄连解毒汤治疗脑梗死患者100例，总有效率为96%，其中治愈48例，显效38例，好转10例，总有效率与西药组并无明显差异。

日本很早就将黄连解毒汤应用于脑血管病，效果非常显著。黄连解毒汤对脑梗塞患者的适用率为71.1%，对一次性脑缺血发作患者的适用率为66.7%，对颅内出血患者的适用率为82.4%；黄连解毒汤具有明显增加脑缺血部位脑血流，提高脑血管性痴呆智能水平以及对出血性脑血管病有显著的止血作用［21］。日本东海地区医院联合观察黄连解毒汤对56例脑梗塞患者的作用，发现效果显著［22］。泉山隆男等［23］在常规西药治疗的同时加用黄连解毒汤治疗脑中风后遗症患者（主要为上、下肢麻木和感觉异常为主的患者），头痛、耳鸣、眩晕、恶心以及肢麻等症状明显改善，优于单纯西药治疗。黄肇荣［24］用黄连解毒汤治疗脑血管后遗患者20例，总有效率达到70%。

2 实验研究

研究发现脑缺血的病理机制与炎症、氧化应激等有关，黄连解毒汤抗脑缺血也主要与其具有抗炎、抗氧化以及改善血流和能量代谢作用相关［25］。

2.1 黄连解毒汤抑制炎症反应 研究表明脑缺血会激活炎性细胞释放大量的炎性介质，甚者造成神经细胞的继发性损伤［26］。陈隐漪［27］对40例急性脑梗死患者采用黄连解毒汤进行治疗，并对治疗前以及治疗后第7、15d的血清IL-6、TNF-α检测，发现治疗后患者血清中的IL-6、TNF-α水平明显降低，推测黄连解毒汤通过抗炎及抗自由基作用促进炎症因子快速回落，从而减轻炎症因子引发的免疫应答对脑组织的损伤。吴安康等［28］研究表明黄连解毒汤能显著降低缺血性损伤大鼠脑组织匀浆中的炎性因子IL-1β和TNF-α的含量，具有抗脑缺血作用。黄连解毒汤能大幅度提高糖氧剥夺再灌注损伤大鼠原代皮质神经元存活率，降低其凋亡率，显著抑制5-LOX的核膜转移，明显减少胞浆中的颗粒以及花生四烯酸代谢产物CysLTs的含量，减轻炎症反应，揭示黄连解毒汤可能通过调节5-LOX/CysLTs通路起到保护脑缺血损伤的作用［29］。钱智磊等［30］通过火热证电凝法建立局灶性脑缺血大鼠模型，再灌胃给予模型大鼠黄连解毒汤，能够显著IL-6和TNF-α的含量，证明黄连解毒汤保护脑缺血损伤可能与其抗炎作用相关。抗炎治疗能够延长临床治疗脑卒中的时间窗，黄连解毒汤具有较好的临床应用基础。

2.2 黄连解毒汤抑制氧化应激 自由基造成的过氧化反应是缺血性脑损伤的主要病理环节，能影响神经细胞的功能及结构［31］。黄连解毒汤能明显减少右大脑中动脉阻塞模型大鼠患侧脑梗死面积，能显著降低缺血脑组织中的中心粒细胞浸润指标髓过氧化物酶（MPO）的活性，起到保护脑缺血损伤的作用［32］。姜莉莉等［33］发现给予体外糖氧剥夺和谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型不同浓度的黄连解毒汤能显著增加PC12细胞的活性，减少乳酸脱氢酶的释放，同时研究还表明黄连解毒汤能显著提高全脑缺血小鼠海马CA1区神经元密度，提高全脑缺血小鼠对新奇事物的分辨比。研究表明黄连解毒汤有效部位能明显改善MCAO大鼠的神经功能，降低脑梗死面积，同时显著降低模型大鼠脑组织中NO、MDA的含量，提高SOD和GSH-Px含量的趋势，表明黄连解毒汤能增强机体清除自由基的能力，减少自由基带来的氧化性损伤保护脑细胞功能起到对脑缺血再灌注损伤的保护作用［34-36］。周静等通过电凝法阻断大鼠大脑中动脉，研究黄连解毒汤有效部位对其的作用，发现能显著降低模型大鼠血浆中MDA含量，升高SOD活性，认为黄连解毒汤抗脑缺血作用与其抗氧化作用相关［37］。上述研究表明黄连解毒汤不仅能够直接清除自由基，还能够提高抗氧化酶的活力，从而保护由自由基诱发的脑缺血损伤。

2.3 黄连解毒汤改善血流及能量代谢作用 黄连解毒胶囊可明显抑制家兔颈总动脉血栓（穿线法）的形成，明显减少MCAO大鼠的脑梗死面积同时改善其行动能力，有抑制神经功能障碍作用，另外，可以降低小白鼠脑卒中指数，显著延长小白鼠断头后的喘气时间以及小白鼠被结扎两侧颈总动脉后的生存时间，提示黄连解毒胶囊能明显降低耗氧量，对脑缺血起到很好的防治作用［38］。徐静华等［39］研究表明黄连解毒汤能延长双侧颈总动脉结扎小鼠的存活时间，同时能降低小鼠死亡时残存氧含量，提高小鼠对氧的利用率延长NaNO2和KCN导致缺氧小鼠的存活时间。通过MTT法检测黄连解毒汤对低糖培养基、氧化钴诱导的缺糖缺氧损伤细胞活力的影响，发现其对该模型细胞的保护率为51.62%，表明黄连解毒汤能改善和防治脑缺血及低氧性脑障碍疾病［40］。黄连解毒汤有效部位连续4d给药能明显延长小鼠常压密闭、亚硝酸钠中毒缺氧状态下的存活时间以及小鼠急性脑缺血缺氧张口喘气时间；同时黄连解毒汤汤有效部位能显著降低多发性脑梗塞大鼠脑组织中乳酸含量，提高乳酸脱氢酶和Na+-K+ATP酶的活性，推测该药能提高机体血氧利用率，促进动物脑器官的供氧需求，抑制大量乳酸造成的脑损伤，改善脑缺血后脑组织的能量代谢［41］。黄连解毒汤有效部位能改善三氯化铁所致单侧大脑中动脉阻塞（MCAO）模型大鼠的偏瘫症状，减少脑梗塞范围，同时能显著降低双侧颈总动脉结扎（CCAO）模型大鼠脑毛细血管的通透性，另外发现其能显著延长双侧颈总动脉反复缺血再灌注（CCAORR）模型小鼠的断头张口喘气时间，降低脑指数和脑含水量，认为黄连解毒汤对局灶性、全脑不完全性脑缺血和反复缺血再灌注损伤都有保护作用可能与降低组织耗氧，改善血管通透性以及减轻脑水肿相关［42］。郭昫等［43］研究表明黄连解毒汤水提物，总生物碱，总黄酮以及总环烯醚萜都能显著降低脑缺血模型大鼠丘脑中谷氨酸的含量，而总黄酮能显著增加γ-氨基丁酸的含量，推测黄连解毒汤能直接降低或者通过增加γ-氨基丁酸的含量抑制谷氨酸产生的兴奋性神经毒性，起到抗脑缺血甚至是促进脑功能恢复的作用。上述研究表明黄连解毒汤能够改善脑缺血后的血流状态，增强能量代谢，表现为降低耗氧量，提高机体血氧利用率，从而起到抗脑缺血作用。

2.4 黄连解毒汤的神经保护作用 黄连解毒汤能明显改善脑缺血引起的记忆障碍，可以减少模型小鼠跳台错误次数，缩短在水迷宫中寻找到逃生平台的时间，增加探测实验中穿过原平台象限的次数，此外，黄连解毒汤显著降低模型小鼠大脑皮层、海马和纹状体中乙酰胆碱的含量，推测黄连解毒汤对短暂性脑缺血引起的学习和记忆障碍的保护作用可能与该机制相关［44］。黄连解毒汤水提物（4g/kg）和黄连解毒汤醇提物（400、800mg/kg）能显著减弱局灶性脑缺血模型小鼠的神功功能障碍，以及缺血后引起的脑萎缩和脑梗塞体积。此外，显著增加了CD31，HIF-1α，VEGF和Flk-1阳性细胞的数量，推测黄连解毒汤对局灶性脑缺血造成的损伤具有神经保护作用，能通过HIF-1α调节VEGF信号促进血管生成［45］。水迷宫实验表明黄连解毒汤能明显改善脑缺血造成的学习与记忆损伤［46］。张琦等［47］用大脑中动脉阻塞15min诱导小鼠产生局灶性脑缺血，在术前7d开始灌服黄连解毒汤，对小鼠缺血后5周内进行神经行为学评分并检测脑损体积以及神经元数量，发现黄连解毒汤明显改善术后的神经症状，减轻脑损体积和萎缩，显著增加缺血测海马CA1区神经元密度，同时提高小鼠5周的最终生存率。黄连解毒汤的水提物及总黄酮能明显改善中动脉栓塞大鼠的丘脑神经核固缩，可见多数细胞的清晰核仁，明显提高模型大鼠丘脑中的谷氨酸脱羧形成抑制性神经递质GABA的限速酶GAD65的含量和Glu的含量，显著降低模型大鼠丘脑星形胶质细胞缝隙连接蛋白Cx43的阳性表达，另外，总黄酮还能明显增加模型组大鼠GABA的含量，显著降低模型大鼠丘脑星形胶质细胞骨架蛋白GFAP的阳性表达，表明黄连解毒汤能通过抑制星形胶质细胞异常活化，调节GFAP，GAD65等蛋白的表达起到保护缺血半暗带区神经细胞和减轻脑缺血后丘脑神经细胞损伤的作用［48-49］。黄连解毒汤能明显上调中动脉栓塞模型大鼠梗死灶周围神经元MAP-2和PGP9.5的表达，下调GFAP的表达，从而抑制星形胶质细胞的异常活化，促进神经元树突重塑并减轻轴突损伤［50］；另一实验表明黄连解毒汤能增加永久性大脑中动脉阻塞模型大鼠中缺血半暗带皮层神经核抗原（NeuN）阳性细胞的数量及神经元NeuN的表达，增强大鼠海马CA1区和尾壳核VEGF的表达，下调半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）与多聚ADP核糖多聚酶（PARP）的表达，减轻脑缺血后CA1区神经元继发性损害和氧化性DNA的损伤起到保护神经细胞的作用［51-52］。

3 其它

黄连解毒汤能使家兔血小板最大聚集率大幅下降，抑制率高达89.03%，能有效抗血小板聚集，抑制血栓形成达到防治缺血性脑血管疾病的目的［53］。通过电镜观察发现黄连解毒汤能明显改善脑梗塞急性期大鼠胃粘膜的损害，减轻胃粘膜上皮细胞的脱落，保持胃小凹的正常形态［54］。付晓春等［55］研究表明黄连解毒汤能通过下调线栓法建立的局灶性脑缺血再灌注模型大鼠的caspase-3的表达从而抑制脑细胞凋亡，减少模型大鼠脑梗死体积，起到脑保护作用。吴彦等通过低氧低糖处理胎鼠神经细胞模拟整体动物脑缺血时的病理症状，分别利用谷氨酸，高K+和A23187等诱导该神经细胞造成胞内Ca2+升高，再用黄连解毒汤有效部位进行干预发现其对3种因素引起的胞内钙超载均由拮抗作用，表明黄连解毒汤可以通过抑制脑缺血后造成的神经细胞钙超载，减轻钙超载造成的神经损伤，发挥脑保护作用［56］。

4 总结与展望

随着对脑卒中病机认识的加深和临床病例的反馈，“毒损脑络”和“解毒通络”的可能性和合理性也被认可。大量的临床研究和动物实验表明黄连解毒汤能改善血流和能量代谢，抑制炎症反应、氧化应激和神经保护作用等，能够发挥重要复方多靶点多效能的特点，起到抗脑缺血作用。目前制约黄连解毒汤用于抗脑缺血的关键问题主要有：（1）黄连解毒汤抗脑缺血的机制并没有进行深入地研究；（2）黄连解毒汤抗脑缺血的有效成分群尚不明确；（3）黄连解毒汤的制剂研究尚待开发。上述问题可能需要借助蛋白组学和代谢组学等系统生物学的方法对黄连解毒汤进行更进一步的研究，明确其抗脑缺血机制和有效成分群，便于制剂开发及临床应用。