非洲猪瘟与典型猪瘟的诊断与防控

王凤武 ，李晓奇 ，耿万恒 ，云伏雨 ，赵振华 ，闫红霞 ，赵世华

（1.内蒙古自治区农牧业科学院，内蒙古 呼和浩特 010031；2.乌兰察布市农牧业科学研究院，内蒙古 集宁区 012000；3.武川县农牧业局，内蒙古 武川 011700）

根据国际联合委员会 （Joint Commission International，JCI）统计，截至 2018年 10月，我国非洲猪瘟疫情已经达到35起，近60%疫情出现在东北地区［1］。因此，防控非洲猪瘟已从过去书本上的概念变成我国广大兽医科技人员必须面临和有待进一步系统深入认识的现实问题。该文拟对非洲猪瘟和典型猪瘟的病原学、流行病学、诊断技术和防控4个方面进行综述，以期为这2种疾病的有效综合防控提供参考。

1 病原学

1.1 非洲猪瘟

非洲猪瘟（African swine fever,ASF），又称东非猪瘟（East African swine fever），是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV） 引起的高度传染性、出血性、急性致死性传染病。ASFV是非洲猪瘟病毒科，非洲猪瘟病毒属的唯一成员，该病毒具有类脂质囊膜，粒子直径为175～215 nm，类核体直径为72～89 nm，是一种20面体对称结构。ASFV基因组为双股线性DNA，基因组全序列长约170～190 nt，含有约150种基因，可编码包括 p72、p54、p12、pp 220、pp60、 血凝素、p32 等在内的 50 多种病毒蛋白，这些蛋白大都与病毒吸附、毒力、细胞凋亡、宿主范围或免疫应答相关［2］。ASFV存在于急性病猪的血液、各种组织、体液、分泌物和排泄物中，具有相当强的生存力，在4℃冷藏的病猪血液中，病毒可存活18个月；在土壤中可存活3个月；在室温条件下，腐败后15周的血液仍有活的病毒；在热带污染的猪圈，空圈后2周，病毒仍具有传染性；而在温带污染的猪圈，空圈3个月后病毒才被杀灭。此外，ASFV在pH值低至3.9或高至13.4的条件下仍有感染性，用普通灭活方法56℃3 min处理，血清中的病毒仍然存活，但在60℃20 min则病毒很快失去活力。

1.2 典型猪瘟

典型猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的一种传染病。该病毒属于接触性传染，可引起猪泛发性小点状出血、梗死和坏死，其传染性强，病死率高，发病后期常引起继发性细菌感染。CSFV属于黄病毒科，瘟病毒属成员，病毒粒子呈球形，有囊膜，直径为384 nm，有20面立体对称的核衣売。CSFV基因组为12.3 kb左右的单股线性RNA，其感染性没有血清型的区别，只有毒力强弱之分［2］。CSFV对理化因素的抵抗力较强，血液中的病毒在60℃10 min才能被灭活，-70℃可保存数年，其毒价仍保持不变，但在化学物质如火碱、漂白粉、来苏儿等溶液中能很快使其灭活，因此，使用2%克辽林、3%火碱可用于污染环境中该病毒的消杀。此外，使用乙醚、氯仿、脱氧胆酸盐也能迅速灭活猪瘟病毒。

2 流行病学

2.1 非洲猪瘟

迄今为止，只发现猪、野猪和钝缘蜱可自然感染ASFV，在有些动物如牛、羊、兔等体内也可增殖，但不致病。ASFV的储存宿主，可将病毒从感染猪实验性传播给易感健康猪。一个地区初次发生本病时，病程很急，发病率和病死率很高，随着病毒在猪群中不断传代后，毒力有所减弱，病性也逐渐温和，可出现一些亚急性、慢性、隐性的病猪，病程延长至数月，呈地方流行性，存活猪通常终身带毒，而其排泄物中则不继续带毒。

2.2 典型猪瘟

CSF在自然条件下，仅猪（包括野猪）具有较强的易感性，且不同品种、年龄和性别的猪均可感染，易感性差别不大，但一般认为优良纯种和改良种，以及仔猪易感性较强。人工可使异种动物感染，动物体内可在一定时期内保毒，但临床上不表现任何症状，例如以10～100 mL CSFV接种黄牛和以5～10 mL接种绵羊或山羊后，病毒在动物体内能存活2～3周，其血毒对猪仍具有传染性。CSFV可在兔体内可连续传代，经多代次连续传代后，可适应兔体并复制，能引起兔体温升高，产生定型热反应，对猪的毒力明显减弱，已不能使猪发病，但仍保持良好的免疫原性，如我国的猪瘟兔化弱毒株（C株），就是用其作为制造疫苗的种毒。

猪瘟病毒的持续感染属于慢性病毒感染型，此型感染是通过病毒在宿主体内长期存在的机制，进而导致对宿主的长期连续性感染或间断性感染。其中，患持续感染的仔猪，在出生后的头几周与非感染的同窝仔猪相比，在外表上无任何差异，但它们可以将病毒传给同窝非感染仔猪，这种猪在流行病学上更具危险性。

3 诊断技术

3.1 非洲猪瘟

非洲猪瘟与猪的其他出血性疾病的症状和病变都很相似，给该病的临床诊断造成很大困难，尤其是在非洲猪瘟和典型猪瘟并存的情况下。一般来说，实验室诊断非洲猪瘟方法主要有以下几种。

3.1.1 红细胞吸附试验（HAD）：HAD最适合于鉴定新暴发疾病和检测病毒，而且是从野外样品分离病毒的常用方法。该法检测ASFV最敏感，也最特异，通常在12 h内可得出结果。用猪骨髓细胞和猪白细胞培养的ASFV，能致细胞病变和产生红细胞吸附现象，而典型猪瘟瘟病毒则无此种吸附作用，可作为鉴别诊断方法。

3.1.2 直接免疫荧光试验（DIF）：DIF是最早用于检测病毒的方法，操作时采取脾、肺淋巴结或胃样品，做成印压涂片或组织切片，用标记的抗ASFV的免疫球蛋白测定病毒抗原。该法检测急性ASF的敏感性很高，快速而又经济。但对亚急性或慢性ASF的检测敏感性只有40%，灵敏度下降可能与荧光抗体和形成抗原抗体复合物有关。但将直接免疫荧光和间接免疫荧光试验联合使用，可将检出率提高到85%～90%。

3.1.3 间接免疫荧光试验 （IIF）：IIF对慢性ASF是一种快速、灵敏而又特异的诊断方法。该方法主要是用于检测血清或组织浸出物中的抗体。若检査数量不多，此法尤为实用。

3.1.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）：目前，ELISA试验是ASF血清学研究中最有用的方法。该试验主要是检测ASFV蛋白结合的病毒抗体，加上酶标记A蛋白，与适应的底物产生显色反应，通过分光光度仪定量或只用肉眼判定结果。ELISA试验除灵敏度高及特异性强外，而且操作简便，结果易解释，重复性好，更适合于自动化检测大批量血清样品。

3.1.5 其他检测方法：以VP72基因为靶标，进行PCR扩増，检测ASFV基因组。该法具有快速、灵敏、准确、特异的特点。此外，特异性、敏感性、稳定性较好的非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条，以及非洲猪瘟病毒多基因家族成员MGF360-12L RPA检测方法也都是诊断非洲猪瘟的理想方 法［3-6］。

3.2 典型猪瘟

目前，典型猪瘟的实验室诊断方法主要有：免疫荧光试验、免疫组化试验、动物接种试验、RTPCR、RT-套式PCR、RT-qPCR等，前2种方法最为常用，其中，免疫荧光试验因其简易快速，可在2～3 h内得到结果，并且检出率可达91%～100%，已为许多国家所采用，其具体操作步骤如下。

3.2.1 直接免疫荧光试验：取病原体组织制成触片或冰冻切片，丙酮固定，荧光抗体染色，PBS充分洗涤，无离子水冲洗，自然干燥后，用缓冲甘油封片，置荧光显微镜下检査。如果在扁桃体隐窝上皮细胞的胞浆内和淋巴结生发中心的网状内皮细胞发现有亮绿色荧光斑，即可判为猪瘟阳性。其中，强毒株荧光明显，弱毒株仅在扁桃体隐窝上皮细胞内见有微弱的荧光癍，青灰色或带橙色为阴性。

3.2.2 间接免疫荧光试验：在病料组织片上，滴加1∶4抗猪瘟血清，作用30 min后，再加羊抗猪IgG荧光抗体，作用30 min，漂洗，干燥后，荧光检査，判定方法同上。

3.2.3 免疫组化试验：取感染猪的组织（脾）触片，或感染猪的白细胞涂片，用丙酮固定后，进行抑制内源酶处理，之后加相应的稀释的结合物，无水酒精脱水，二甲苯清洁，风干后，盖玻片封盖，镜检。依据感染猪脏器触片与对照猪白细胞图片显色深浅判定结果。

4 防控措施

4.1 非洲猪瘟

目前对非洲猪瘟尚无有效治疗方法，主要通过屠宰病猪和疑似病猪，深埋、烧毁和生物安全处理，达到根除的目的。如观测到发病异常的病猪，畜主或兽医要立即报告相关部门，并送检血液和组织样品。污染的场地与工具可用火碱消毒。也有报道国内已经有研究人员利用ASFV毒力基因UK，获得重组蛋白 （DP96R），并进一步制备了DP96R重组蛋白的多克隆抗体，以及尝试采用基因编辑技术构建安全的非洲猪瘟病毒疫苗，并取得了一定的进展［7-10］。

4.2 典型猪瘟

我国在典型猪瘟的防制上采取广泛和系统的猪瘟兔化弱毒疫苗预防注射，并结合兽医卫生综合措施，控制了该型猪瘟的大面积流行［11］。此外，根据近年来猪瘟疫情出现亚临床化和慢性化的趋势，要根据临床标准，尤其是亚临床标准，制订出新的行之有效的预防措施，严格执行，方能收到较好效果。

4.2.1 强化计划免疫：为保证猪群的有效免疫水平，应定期为猪群进行疫苗免疫。我国研制的典型猪瘟兔化弱毒疫苗株，经国内外广泛应用和检验，证明对各种品种、不同性别和年龄的猪，均具有良好的安全性和免疫原性，被免疫猪不带毒、不排毒，连续复归猪不返强，无残余毒力，对怀孕母猪胚胎及胎儿无不良影响，被公认为是一株理想的制苗用弱毒株。

4.2.2 紧急预防接种：典型猪瘟兔化弱毒疫苗给猪注射后，3～4 d即可产生免疫力。因此，可根据疫苗的这一特性，在已发生该型猪瘟疫情的猪群或地区，对未感染猪群进行紧急接种。并对疫区周围的猪群，立即全部注射疫苗，形成安全带，防止疫区扩大和猪瘟蔓延，但应注意注射针头等的清毒，以防人为传播。该项措施，可使一部分猪或大部分猪获得保护。

4.2.3 加强兽医卫生检疫：加强兽医卫生检疫，严格活体检疫。由于猪瘟的持续感染，致使猪瘟病毒在猪群中长时期保存下来，并以亚临床型传播。这种亚临床型猪瘟在普遍注射疫苗的地区极易被掩盖，特别是怀孕母猪及其所产的部分存活仔猪，在临床上不表现任何症状，是最危险的传染源。

4.2.4 发生疫情时的紧急措施：当发现疑似猪瘟病猪时，应立即进行隔离，迅速诊断，确定疫点和疫区范围，根据具体情况和自然条件进行封锁。对已被和可疑污染的猪舍、饲养和运输工具、粪便、垫草等使用1%～2%火碱加5%生石灰乳，或5%～10%漂白粉进行严格消毒；对扑杀的病猪和死亡猪应一律深埋或烧毁；对屠宰病猪和处理死猪的场所、废弃物、污水以及工具和人员等，应进行彻底消毒，防止散毒；隔离期间应禁止生猪交易和猪只调动。