GeneXpert MTB/RIF检测肺结核患者 痰标本的应用价值

林百丰 王鑫 唐鹭 张学志 陈丽

肺结核是一种严重危害人类健康的重大呼吸道传染病。针对肺结核患者的检测，我国大部分基层实验室仍以痰涂片和痰培养为主。痰涂片检查虽然速度快、成本低，但检出率低；痰培养检查检出率高、成本也不高，但是培养时间大约需要1个月。目前，有很多实验室将分子检测技术应用于临床以发现活动性肺结核患者。笔者将GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)与传统肺结核诊断技术(痰涂片和痰培养)进行对比分析，现报告如下。

资料和方法

一、研究对象

选取2015年8月至2017年1月黑龙江省县级结核病防治所门诊连续收集的未经治疗的1355例初诊患者作为研究对象，包括活动性肺结核患者636例，非活动性肺结核患者719例。肺结核患者的诊断参照《WS 288—2008肺结核诊断标准》[1]。研究对象均留取痰标本，由县级实验室人员进行检测。

二、研究方法

1.标本采集：参照文献[2]的要求，收集合格的痰标本，标本量3～5 ml，对不合格的痰标本要求患者重新留取。

2.痰涂片检查：采用萋-尼抗酸染色法，参照文献[2]要求进行操作。

3.痰固体培养：对所有痰标本采用简单法培养，操作方法参照文献[3]的要求。培养基购自珠海贝索生物技术有限公司。

4.药物敏感性试验(简称“药敏试验”)：采用比例法对培养阳性的标本进行药敏试验，操作要求参照文献[4]。培养基购自珠海贝索生物技术有限公司。

5.GeneXpert：取1 ml合格的痰标本放入带螺旋盖的无菌前处理管中，加入2倍体积试剂配备的痰标本处理液，旋紧前处理管，在漩涡振荡器上振荡15～30 s，室温静置15 min，使痰液完全液化。打开试剂盒，用试剂配备的一次性吸管吸取液化的痰标本到规定的刻度，加入到反应盒的加样孔，然后将反应盒放入检测模块。仪器进入倒计时自动检测，当反应结束后读取结果。仪器与试剂均购自美国赛沛公司。

三、统计学分析

应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计数资料采用“率(%)”表示。计算GeneXpert的检测效能指标，指标计算方法：敏感度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)×100%；特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)×100%。

结 果

1355例患者包括活动性肺结核患者636例，非活动性肺结核患者719例。痰涂片检测阳性173例，阴性1182例；痰培养阳性317例，阴性1038例；GeneXpert检测阳性386例，阴性969例。以痰涂片检查为标准，GeneXpert检测的敏感度和特异度分别为98.3%(170/173)和81.7%(966/1182)。以痰培养为标准，GeneXpert检测的敏感度和特异度分别为93.4%(296/317)和91.3%(948/1038)。以临床诊断为标准，GeneXpert检测的敏感度和特异度分别为58.0%(369/636)和97.6%(702/719)；痰涂片检测的敏感度和特异度分别为27.2%(173/636)和100.0%(719/719)；痰培养的敏感度和特异度分别为48.4%(308/636)和98.7%(710/719)。

296例痰培养阳性患者经比例法药敏试验检测对利福平敏感241例，耐药55例；GeneXpert检测敏感245例，耐药51例；以比例法药敏试验为标准，GeneXpert检测对利福平耐药的敏感度和特异度分别为85.5%(47/55)和98.3%(237/241)。

讨 论

本次研究中GeneXpert检测分别以痰涂片和痰培养为标准，其敏感度和特异度分别为98.3%、93.4%和81.7%、91.3%。国外有报道，GeneXpert检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为92.2%和98.2%，检测对利福平耐药的敏感度和特异度分别为97.6%和98.1%[5]。国内报道GeneXpert检测以痰涂片、痰培养为标准的敏感度和特异度分别为93.27%、91.93%和91.6%、95.55%[6]。以上报道的研究对象均来源于结核病专科医院，而笔者本次研究选取的研究对象来源于县级结核病防治所。专科医院的患者一般都是住院患者，患者的依从性较好，留取痰标本的质量有保证。本次研究GeneXpert检测以痰涂片和痰培养为标准的特异度分别为81.7%和91.3%，特异度较高。

以临床诊断为标准，痰涂片、痰培养和GeneXpert检测的敏感度分别为27.2%、48.4%和58.0%，可见GeneXpert检测的敏感度较高，这对于痰涂片检测阴性，而培养还在等待时，在最短时间内来确定排菌患者有很大意义，但此方法不能鉴别死菌与活菌；而痰涂片、痰培养和GeneXpert检测特异度分别为100.0%、98.7%和97.6%，可见GeneXpert检测特异度略低，但其检测时间较短，可在2 h得出结果，这对临床用药有一定的指导作用。

GeneXpert检测对利福平耐药的敏感度和特异度分别为85.5%和98.3%，与赵冰等[7]报告的结果相一致。GeneXpert检测对利福平耐药敏感度只有85.5%，比较低。世界卫生组织建议如果将GeneXpert检测应用于对利福平耐药率较低的人群进行耐药检测时，对于检测为对利福平耐药的患者需要使用传统药敏试验或其他分子生物学检测进一步验证，以避免假阳性[8]。

综上，GeneXpert检测的自动化程度、敏感度和特异度比较高，并且其检测时间短，对实验室的生物安全及对工作人员的技术水平要求不高，因此，很适合在基层实验室应用。但由于GeneXpert只能检测是否对利福平耐药，并且受基层实验室经济条件的影响，其应用也受到了一定限制。