大肠杆菌致中猪伴有全身感染的急性胃肠炎病例及病原鉴定报告

徐翠

（南昌珠安生物技术有限公司，江西南昌 330013）

我国猪场由致病性大肠杆菌导致的疾病，主要表现为仔猪白痢、仔猪黄痢和仔猪水肿病等几种形式。2016年2月，新余市一猪场，60kg左右的中猪突然发病，表现为伴有全身感染的急性胃肠炎症状，并有较多死亡。经病原分离和血清型鉴定，确定本病由大肠杆菌O83:H1血清型引起。现总结报告如下：

1 发病情况

该养猪场饲养母猪300头，自繁自养商品猪出售。2016年春节前，该场的商品猪曾发生过大面积传染性胃肠炎。疫病过去后15d左右，商品猪中60kg左右的中猪突然发病，表现为伴有全身感染的急性胃肠炎症状。发病率高达70%～80%。发病后不断有猪死亡，最多一日死猪达20头，最后全场共死亡70余头。畜主以为中猪再次发生传染性胃肠炎，采取控料处理；后又在饲料中投放多维、氟苯尼考和替米考星等药物进行治疗，均无效。经病原分离和药敏试验，建议畜主用头孢类药物治疗，疫情才最后平息。发病猪群免疫过猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病和猪圆环病毒病等疫苗。

2 症状和剖检变化

发病猪厌食，体温最高不超过40.2℃。主要症状为呕吐和水样腹泻，部分还有卧地划水样神经症状，发病后2～4d死亡。

剖检5头发病死亡猪，主要肉眼所见为小肠壁有不同程度充血，肠壁变薄，肠腔扩张，其内积有多量淡黄色水样液体。肠系膜淋巴结肿大，切面多汁。胃内空虚或只有少量饲料，胃黏膜潮红。心肌柔软，心腔内有较多积血。

3 实验室检测

3.1 细菌分离和纯化

将小肠液和肺洗液接种于TSA固体培养基上，37℃培养24h，两者均见培养基上长出许多直径约1mm表面光滑、湿润、圆形、中间突起且边缘整齐的小菌落。勾取这种菌落染色和镜检，确定为疑似大肠杆菌。将疑似的大肠杆菌接种于新的TSA上纯化。选二代的单个疑似菌落再接种于伊红美兰（EMB）和麦康凯培养基上培养。在EMB上长出光滑、湿润、边缘整齐、单个黑色带金属光泽的菌落。在麦康凯上长出表面光滑、湿润、圆形、中间突起的粉红色菌落。这些细菌经革兰氏染色镜检，证实为革兰氏阴性的直杆菌。

3.2 生化鉴定

将纯化的细菌分别接种到下列一次性细菌微量生化发酵管 （购自杭州滨和微生物试剂有限公司）中，于37℃培养12h，发现分离菌对葡萄糖、赖氨酸反应呈阳性；对鸟氨酸、乳糖和尿素反应呈阳性且产气；对硫化氢、蛋白胨水、卫茅醇、苯丙氨酸和西蒙氏枸橼酸盐等反应呈阴性。生化反应结果证明分离菌为大肠杆菌。

3.3 药敏试验

分离菌对头孢噻肟、头孢曲松等药物抑菌圈直径均达30mm，判定该两种药对分离菌均为高度敏感；对丁胺卡那的抑菌圈直径为18mm，多西环素为11mm，恩诺沙星为10mm，判定该3种药对分离菌均为中度敏感；对青霉素、阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、林可霉素、环丙沙星、庆大霉素和复方新诺明等的抑菌圈直径均为0mm，判定这些药对对分离菌为不敏感［3］。

3.4 PCR扩增及序列分析

将分离菌经PCR扩增后得到大小为1 500bp的目的条带。将PCR产物送至北京鼎国生物技术有限公司测序，将完整系列放入NCBI BLAST的Microbes进行序列比对，确定为大肠杆菌O83:H1血清型，判定为致病性大肠杆菌。

4 小结与讨论

4.1 国外著作记载了一种由大肠杆菌菌血症引起的全身感染，主要发生于新生至4日龄的猪，也可继发于腹泻或其他一些青年猪的疾病。已知有17个血清型的大肠杆菌可引起这种全身感染，O83为其中一种［1］。本次发生于该场中猪（属青年猪）的急性胃肠炎，部分还伴有仔猪水肿病样划水的神经症状，肺水洗液培养出致病性大肠杆菌，表明发病猪同时有菌血症的存在，可能是因为该场在发生本病前一段时间曾发生过传染性胃肠炎，导致猪群抵抗力下降，从而为O83血清型大肠杆菌致病创造了条件，才引发了该次中猪急性胃肠炎伴全身感染性疾病的发生。

4.2 氟苯尼考属氯霉素类广谱抗菌素，其对革兰氏阳性和阴性菌都有抑制作用，但对阴性菌的抑制作用较阳性菌的强，大肠杆菌是对该类抗菌素敏感的细菌之一［2］。发病后不久，畜主曾用过氟苯尼考来治疗过发病猪，但实际应用效果不好。本次分离菌药敏试验结果表明，它对氟苯尼考的抑菌圈直径为零，可以解释为何畜主应用氟苯尼考治疗发病猪无效。另一方面，将药敏试验显示的高度敏感药物头孢类抗菌素推荐用于治疗发病猪，才很快将疫情控制。这些情况进一步证明大肠杆菌确为本次猪病的病原。

4.3 本次发病，若考虑不周，就会将其诊断为猪传染性胃肠炎或猪流行性腹泻。这两种病主要表现呕吐和水样腹泻，但它们对中大猪的致死率较低，也没有划水样神经症状的表现，所以本次发生的猪病与上述两种猪病不一样。表明在诊断猪病时，对猪群中出现的每一种症状都要认真考虑，才不致于误诊。

参考文献：

［1］ B.E.斯特劳等.猪病学[M].第 8 版.北京：中国农业大学出版社，2000∶469～472.

［2］陈杖榴.兽医药理学[M].北京：中国农业出版社，2007︰218～220.

［3］教郁，高维凡，胡彩光.大肠杆菌耐药性研究进展[J].现代畜牧兽医，2013:53～58.

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