EB病毒血清学检测在鼻咽癌临床诊治中的应用进展

郑传胜，白薇琦

鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤，在我国南方地区发病率很高，男性的发病率是女性发病率的2～3倍。目前，已有令人信服的证据支持EB病毒（EBV）是鼻咽癌的重要致病因子，参与鼻咽癌的多阶段、多因素发生过程[1]。近年来，临床上在利用血清学协助诊断鼻咽癌，以重组EBV蛋白制备的酶联免疫吸附检测（ELISA） 正在取代传统的VCA-IgA和EA-IgA酶标检测[2-3]。国内已有数篇采用ELISA血清学诊断鼻咽癌和评估患鼻咽癌风险的报道[4-7]。因此，EBV血清学检测在鼻咽癌的早期筛查、辅助诊断、放疗后随访及转移等方面具有重要意义。

1 EBV及其抗原性

1.1 EBV简介 EBV是1970年被发现的DNA病毒，疱疹病毒属（人类疱疹病毒5型），人感染EBV的概率极高，达90%～100%[8]。EBV被国际癌症研究机构（IARC）归为I类致癌物质，并且与鼻咽癌有直接联系[9]。EBV与人类多种疾病相关，其中在鼻咽癌中的研究最多。EBV可致鼻咽上皮永生化，并使其进一步恶变[10]。

1.2 EBV的抗原性分类

1.2.1 病毒增殖感染相关抗原 包括：EBV 早期抗原（EA）、EBV 壳抗原（VCA）及EBV膜抗原（MA），其中EA出现是EBV活跃增殖的标志，而VCA和MA属于EBV的结构抗原。

1.2.2 病毒潜伏感染时表达的抗原 即EBV核抗原（EBNA），包括：EBNA1、EBNA2、EBNA3和主导蛋白（LP）。EBNA1为细胞转化所必须的抗原，也是EBV游离体DNA复制的必须蛋白，通过与 EBV-DNA直接作用而发挥作用；EBNA2一般认为是B淋巴细胞转化的必须蛋白，可反式调节潜伏膜蛋白 1（LMP1），并能刺激CD21和CD23的产生；EBNA3包括EBNA3A、3B和3C，其中 EBNA3A与 3B细胞转化有关，EBNA3C可诱导CD21表达，可能参与EBV感染细胞的转化过程；己发现LP能激发B细胞永生化，能与EBNA2协同诱导周期素D2和推动细胞周期进程，通过与EBNA2酸性反式激活结构域相互作用，LP可大大增加EBNA2反式激活LMP1表达的作用[11]。在鼻咽部癌前病变中也发现EBV单克隆游离体一起表达LMP1，表明这种病毒的作用是鼻咽癌早期发病机制的癌基因[12]。

2 EBV的血清学检测

虽然导致鼻咽癌的病因学还不是很清楚，但是人们通过各种血清学试验早就认识到EBV与鼻咽癌之间存在着密切的关系。血浆 EBV-DNA水平越高，可能TNM分期越倾向于晚期，而且淋巴结转移较广泛。大量资料显示，血浆EBV-DNA不仅可以作为鼻咽癌筛查及早期诊断指标，而且血浆EBV-DNA检测对于鼻咽癌患者的分期、预后判断、监测治疗后复发和远处转移都具有重要意义。文献报道，联合检测EBV-VCA-IgA及EBV-EA-IgA抗体水平对鼻咽癌具有诊断意义[13]。EBV仅能在B淋巴细胞中增殖，以环状DNA形式游离在胞浆中，并整合于染色体内。随着PCR技术的推广，血浆中EBV-DNA水平检测也广泛运用于鼻咽癌早期诊断、预后判断、疗效监测和临床分期等。

免疫荧光或免疫酶标法检测血清抗EBV抗体水平已在临床上常规应用于鼻咽癌的血清学诊断。近年来，这种方法已逐步被酶联免疫吸附测定（ELISA）所替代，因为后者更客观有效而快速[14]。Chan等[15]和Dardari等[16]认为在血清学诊断鼻咽癌时，最好合并采用几种ELISA。

为了提高血清学诊断鼻咽癌的特异度，建议同时采用Zta-IgG和EBNA1-IgG或Zta-IgG和EBNA1-IgA两种ELISA。为了在体检中早期发现鼻咽癌或在血清学方面排除可疑鼻咽癌，建议联合应用Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG或Zta-IgG/EBNA1-IgG/Zta-IgA 3项ELISA。

3 EBV的血清学检测在鼻咽癌筛查及辅助诊断中的应用

EBV已成为研究鼻咽癌病因和相关标志物的重要方面，EBV标志物已作为鼻咽癌辅助诊断的重要指标。目前已用于临床的有血清EBV壳抗原-免疫球蛋白A（EBVCA-IgA）、EBV早期细胞内抗原-免疫球蛋白A（EA-IgA）、EBV核抗原-免疫球蛋白A（EBNA-IgA）和EBV DNA酶抗体等。同时，还有一些很有利用价值的标志物正在研究和探索中，有望近期应用于临床。

3.1 抗EB病毒特异性胸腺嘧啶脱氧核苷激酶（TK）抗体 TK是一种催化胸苷磷酸生成胸苷酸的酶，在DNA的合成调控中起重要作用。Connoly等[17]用ELISA法检测人体血清中针对EBV编码TK的IgA抗体，证实此抗体是一个良好的鼻咽癌标志物，与EBVCA-IgA和EA-IgA相比，具有更高的检测灵敏度和相似或更高的特异性。近几年的相关报道少见，能否将TK抗体应用于临床尚需进一步验证。

3.2 EBV潜伏膜蛋白 1（LMP1）基因LMP1基因具有癌基因功能，LMP1与细胞的转化有关，可通过干扰细胞内信号传导途径促进鼻咽癌的发生、发展和转移。用PCR方法检测鼻咽癌患者脱落细胞中的LMP1基因具有很高的灵敏度和特异度。有报道称，联合检测EBV基因组LMP1和EBNA诊断鼻咽癌的灵敏度和特异度分别为91.4%和98.3%[18]，监测鼻咽癌复发的灵敏度和特异度可至91.7%和98.6%[19]。随着PCR技术的普及，LMP1基因有望作为一种鼻咽癌标志物应用于临床。

3.3 抗EB病毒编码z蛋白（Zebra）抗体和Rta蛋白抗体 任军等[20]通过研究证实，抗Rta-IgG可以作为诊断鼻咽癌的标志物，其若与Zebra抗体检测联合使用，可进一步提高鼻咽癌筛选和诊断的灵敏度或特异度。

3.4 EBV的DNA分子 近年来，随着实时PCR技术的推广应用，大量研究证实EBVDNA分子是一种良好的鼻咽癌标志物，可以广泛应用于鼻咽癌的早期诊断、预后判断、疗效监测及临床分期等各个方面。有报道认为血浆EBV DNA诊断鼻咽癌的灵敏度和特异度可至96%和93%，并可用于鼻咽癌分期、预测及监测鼻咽癌患者的复发和转移[21]。近几年，国内外关于EBVDNA作为鼻咽癌标志物的报道还有很多，基本上都持肯定的态度，随着相关仪器的逐步普及，对EBV DNA的检测必将得到进一步推广。

4 EBV的血清学检测在鼻咽癌放疗后随访中的应用

据文献报道，放疗前后EBV-VCAIgA、EBV-EA-IgA阳性率变化无明显差异，提示此两项阳性率指标对疗效观察不敏感，可能是由于两种抗体在人体内的半衰期较长，即使体内EBV清除后，仍有较长时间维持在较高浓度，因此发生质变即转阴仍不明显。但其阳性抗体滴度较治疗前有较明显下降，此与曾希等[22]的研究结果相似。这些可间接提示，随着治疗进行与病灶的缩小，EBV-VcAIgA、EBV-EA-IgA抗体滴度逐渐下降，有着量变的过程，也间接提示 EBVVCA-IgA、EBV-EA-IgA与治疗过程呈一定相关性。结果显示EBVDNA治疗前后阳性率有明显变化，提示该指标对疗效观察敏感。临床实验中，若经过治疗，EBV DNA迅速转阴，提示随着治疗肿瘤缩小及清除，若EBV也随之清除，体现在EBV DNA水平迅速下降转阴，故可以判断EBVDNA对监测鼻咽癌放疗后的疗效存在价值。通过检测治疗前后EBV DNA水平可以发现，预后越差者其EBV DNA水平越高。因此，鼻咽癌患者血浆EBVDNA可以准确反应肿瘤负荷[23]，并随着肿瘤的清除而迅速下降至检测极限值以下[24]。总之，鼻咽癌放疗后患者血浆EBVDNA是监测肿瘤进展的有效方法，有利于早期诊断复发和转移，并采取临床干预措施。

5 EBV的血清学检测在鼻咽癌复发与转移判定中的应用

目前，多数研究结果认为鼻咽癌患者血浆 EBV DNA定量检测对监测复发、转移有重要的临床意义。侯雪等[25]对69例初治鼻咽癌患者分别在治疗前和治疗结束时采用荧光定量 PCR方法检测血浆EBV DNA浓度，结果显示治疗前、后 EBV DNA浓度是预测患者是否出现远处转移的重要分子生物学标志，其中治疗后血浆EBV DNA浓度能否降为0的预测意义更大。

LMP1为EBV编码的重要瘤蛋白，通过激活相关信号传导通路介导细胞异常生物学行为，与鼻咽癌形成密切相关[26]。LMP1的表达与鼻咽癌颈淋巴结转移及远处转移显著相关[27]。李刚等[28]应用DNA载体介导RNA扰技术，抑制LMP1基因表达时发现，LMP1基因可能通过贴壁生长能力、基底膜穿透能力和细胞移动能力等，影响鼻咽癌细胞的转移。

6 总结

大量研究表明，EBV与鼻咽癌的发生发展密切相关，EBV的作用机制有很多种，需要进一步研究和阐述。EBV血清学检测对鼻咽癌早期筛查、辅助诊断、放疗后随访及复发转移的判定都具有重要意义。对EBV血清学检测和鼻咽癌关系的深入研究将对今后鼻咽癌的早期诊断和治疗起到积极的指导作用，对复发、转移、预后和生存率的判断有一定的帮助。

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