不同炮制方法对升麻中异阿魏酸含量的影响

李爱珍

（江西省黎川县人民医院药剂科，江西 黎川 344600）

升麻别名龙眼根、窟窿牙根和周麻，属毛莨科植物大三叶升麻、兴安升麻或升麻的干燥根茎，归于肺、脾、胃、大肠经，有发表透疹、清热解毒、升阳举陷的功效，常用于治疗头痛寒热、喉痛、口疮、子宫下坠等病症。异阿魏酸作为升麻的主要活性成分，有消炎、止痛、退热的效用，以往医者常以异阿魏酸含量评定升麻质量及药效，随着临床研究深入，医者发现不同炮制方法会影响升麻中异阿魏酸含量进而影响药物功效及临床治疗效果[1-2]。本文运用HPLC法测定不同炮制方法对升麻中异阿魏酸含量的影响，进而为后续临床用药提供参考。

1 仪器与药品

1.1 仪器 安捷伦1260Ⅱ高效液相色谱仪，安捷伦四元泵1200系列，紫外吸收检测器Agilent1100，高效液相色谱柱温箱，安捷伦色谱柱ZORBAX Eclipse Plus C18，中草药高速粉碎机RT-02B，Precisa 321XJ系列电子天平。

1.2 药品 本次研究所用升麻样品从上海扶生实业有限公司购进，3种炮制品均选用同批次升麻样品所制；选择上海士锋生物科技有限公司生产的异阿魏酸（产品型号：B100054；CAS号：537-73-5；规格：标准品，98%；包装20 mg）作为对照品；同时购进甲醇和乙腈作为色谱纯。

2 实验方法

2.1 不同炮制方法酒升麻和醋升麻样品炮制方法相同，具体操作如下：分别选取2份100 g升麻样品将其放置于不同陶瓷锅内，精取20 mL米醋和黄酒缓慢倒入陶瓷锅内搅拌均匀后封盖静置4 h，之后将配制的天麻放于炒锅内小火炒干取出晾凉备用。

升麻炭制作：取100 g升麻样品放于炒锅内大火炒至升麻表面焦黑，洒水后待火星燃尽取出晒干备用。所有炮制工作均由同一工作人员完成，分别炮制2份酒升麻、醋升麻及升麻炭，以保证后续操作的科学性及严谨性。

2.2 对照品及供试品溶液制作 对照品溶液制备：精取异阿魏酸1 mg将其放于量瓶内加入适量10%乙醇混合配制19.64μg/mL对照品溶液待用。

供试品溶液制备：精取0.5 g升麻粉末加入25 mL 10%乙醇静置于锥形瓶内塞紧瓶塞后称重，加热2.5 h自然冷却后称重，并添加少许乙醇以补充加热及冷却失去的溶液，过滤出溶液中的天麻后备用。

2.3 色谱条件 色谱柱：选用Diamonsil C18（150 mm×4.60 mm，5μm）；流动相：乙腈－0.01%磷酸溶液（13∶87）；流速：1.0 mL·min－1；柱温：25 ℃；检测波长：315 mm；理论塔板数：5000。

2.4 线性关系、精密度、稳定性及重复性考察 线性关系：精取对照品5、15、30μL，运用色谱条件测定异阿魏酸含量并绘制标准曲线，通过分析面积和异阿魏酸浓度测定线性回归关系，进而分析峰面积与药物浓度的关系，本次研究结果显示异阿魏酸含量在0.098～0.982μg呈线性关系。

精密度：精取5μg对照品连续测定5次，计算发现RSD=0.27%（n=5），即具有良好精密度。

稳定性：精取5μg供试品立即测定峰面积并于1、3、6、12 h再次测定峰面积，发现RSD=2.00%（n=4），证实供试品均具有良好稳定性，可用于后续研究。

重复性：分别精取5份5μg升麻样品严格按照供试品溶液制作方法配制溶液并测定所制样品溶液中异阿魏酸含量，实践发现所制备供试品溶液平均异阿魏酸含量为2.79μg/mg，RSD=1.70%（n=5），证实制作供试品溶液具有良好重复性。

2.5 回收率实验 分别选取3份已测定异阿魏酸含量的20 mg升麻炭、20 mg醋升麻、20 mg酒升麻，按照供试品溶液制备方法制作供试品，制备完成后分别取10μL样品测定溶液内含有异阿魏酸含量，与对照品溶液内异阿魏酸含量对比计算回收率发现其回收率分别为99.6%，RSD=1.90%（n=3）；101.2%，RSD=1.93%（n=3）；100.5%，RSD=1.91%（n=3）。

2.6 样品中异阿魏酸含量测定 精取10μL对照品和供试品溶液运用安捷伦1260Ⅱ高效液相色谱仪于相同色谱条件下测定对照品和供试品溶液中异阿魏酸含量。本次研究所有测定结果均一式两份，以保证研究的科学性及可行性。

3 结果

实验结果发现，升麻生品中异阿魏酸测定含量为0.24%，酒升麻中异阿魏酸测定含量0.27%，醋升麻中异阿魏酸测定含量0.31%，升麻炭中异阿魏酸测定含量为0.41%，即阿魏酸含量升麻生品〈酒升麻〈醋升麻〈升麻炭。

4 讨论

升麻始载于《名医别录》，作为临床常用中药材，根据产地分布可分为关升麻、兴安升麻、川升麻，多于秋季采挖根茎，去除泥沙，晒至八九成干后去须根即可用以临床医疗。研究发现，升麻中含有有机酸类、三萜类及呋喃色原酮类等物质，异阿魏酸作为升麻中有机酸重要组成部分，其含量直接影响升麻药物活性，近年有学者研究发现不同炮制方法直接影响升麻制品中异阿魏酸含量及其药物功效，笔者分析升麻生品、酒升麻、醋升麻和升麻炭中异阿魏酸含量发现，升麻生品〈酒升麻〈醋升麻〈升麻炭，即升麻炭中异阿魏酸含量最高，而升麻生品中异阿魏酸含量最低，证实不同炮制方法会影响异阿魏酸含量。

升麻可有效抗击结核杆菌、金黄色葡萄球菌、卡他球菌，升麻提取物有解热、抗炎、镇痛、抗惊厥、抑制血小板聚集的功效，同时可抑制氯乙酰胆碱、组织胺和氯化钡诱发的肠管痉挛，降低血压，减缓心率，该药中含有的异阿魏酸在抗炎、解毒、镇痛中具有良好效用，实验发现异阿魏酸多以化合物形式存在，在炮制过程中易水解，进而影响药物中异阿魏酸含量。异阿魏酸别名3-羟基-4-甲氧基肉桂酸，作为无色晶体，多从毛莨科植物三大升麻、兴安升麻、升麻干燥根茎中提取所得，需避光低温保存，若长期暴露于空气中会降低药物含量，同时该品具有良好降血糖效果，当前医者提炼该药物并将其应用于糖尿病患者的治疗中，取得良好疗效。

HPLC法较之传统液相色谱法简便易操作且具有良好稳定性，笔者借助反相高效液相色谱法可快速测定样品中异阿魏酸含量，有学者指出HPLC法分离测定药物含量仅需30 min即可，可有效缩短测定时间，获取准确数据[3]。马桂娟[4]用固相萃取HPLC法测定保健食品中阿魏酸含量，以最大程度发挥其简便、高效、便捷、精准的优势。李洋[5]运用反相高效液相色谱法测定不同炮制方法对升麻中异阿魏酸含量的影响，证实不同炮制方法会影响升麻样品中异阿魏酸含量。总之，不同炮制方法会影响升麻中异阿魏酸含量。