5种消毒药对羊舍大肠杆菌的现场消毒效果检测

杜光波1 刘长林 朱洪岩

（1.淮安生物工程高等职业学校，江苏淮安 223200；2.淮安市涟水县畜牧兽医站 江苏淮安 223400）

消毒药物的选择，是消毒成败的关键。对于不同的消毒对象和消毒场所，应该选择不同的消毒药物。并且，病原体对消毒药物也有耐药性，不宜在同一个场地长期使用同一类消毒药物。对于如何正确选择消毒药物，许多养殖户不太清楚，只是听从推销人员的建议，或者根据消毒药物说明书选择消毒药物。对于大型养殖户，建议定期检测消毒药物对常见病原的消毒效果，以便科学选择消毒药物，达到理想的消毒效果。

1 材料

1.1 消毒药物

5%的百毒杀，18%的过氧乙酸溶液，50%戊二醛，10%的聚维酮碘，消毒灵（含有效氯10%的二氯异氰尿酸钠），从兽药市场随机购买，经过相关部门质量检测，为合格产品。

1.2 培养基

麦康凯琼脂平板培养基（购于北京奥博星生物科技有限公司）。

1.3 消毒场所

某大型种羊场三栋独立羔羊舍，每栋羊舍60间羊圈，随机抽取一栋羊舍进行消毒检测。

1.4 仪器设备

高压电动喷雾器、高压水枪、电热恒温培养箱、体视显微镜、无菌工作台、恒温水浴振荡器等等。

2 方法

2.1 制定消毒程序[1，3]

消毒前，详细制定消毒程序，有利于消毒工作顺利开展。本次羊舍地面消毒程序为：测量每间羊圈地面面积→计算总消毒面积→确定消毒方法→选择消毒药物→确定消毒药物使用浓度→计算消毒液用量→计算消毒药用量→准备消毒和采样工具→打扫前采样→打扫、冲洗地面→打扫后采样→配制消毒药物→实施消毒→消毒后采样→样品处理与培养→消毒效果评价。

2.2 羊舍地面面积测量

每栋羊舍有60间羊圈，每间羊圈长5m，宽3m，地面面积15m2，每栋羊舍合计900m2。

2.3 消毒方法选择

由于羊舍处于开放空间，不宜熏蒸消毒，所以选择喷洒消毒方法。

2.4 计算消毒液用量[1]

消毒药物稀释浓度按照消毒药说明书标定的使用浓度，消毒液用量按照一般污染场地用量500ml/m2，一间羊圈面积为15m2，需要消毒液：500ml/m2×15m2=7500ml，一栋羊舍需要消毒液7500×60=450000ml。

2.5 打扫前羊舍地面采样

2.5.1 采样点选择[2]

每栋羊舍选取两头各2间羊圈，中间2间羊圈，共6间羊圈作为采样圈；每间羊圈地面选择四角4点和中间1点，共5点为采样点，每个点采集面积25cm2，每栋羊舍总共采样面积为6×5×25=750m2。

2.5.2 采样方法[2]

用铁丝圈成5×5cm2的方框，酒精灯烧红灭菌，冷却后平放于采样点地面，用灭菌的棉签蘸取灭菌生理盐水，在铁环区域的采样地面由中心向四周涂布，将涂布后的棉签头部置于灭菌培养皿中，折断手持部位的木柄，每点用3个棉签涂布3次。密封培养皿，做好标记后立即送实验室进行细菌培养。

2.6 地面打扫冲洗

先打扫羊粪，然后用高压水枪反复洗刷地面。

2.7 打扫后地面采样

采样方法同2.5。

2.8 配制消毒药物[3]

2.8.1 百毒杀

按照百毒杀说明书，畜舍喷雾消毒用浓度为1：500～600，按照1：5 0 0配制。每间羊圈地面消毒需要百毒杀量为7500×0.2%=15ml，一栋羊舍要量为450000ml×0.2%=900ml，配制方法为，取450kg自来水，加入900ml百毒杀，搅拌均匀即可用于喷洒消毒。

2.8.2 过氧乙酸

按照过氧乙酸说明书，畜舍喷雾消毒用浓度为1：200～400，按照1：200配制。每间羊圈地面消毒需要过氧乙酸量为7500×0.5%=37.5ml，一栋羊舍要量为450000ml×0.5%=2250ml，配制方法为，取450kg自来水，加入2250ml 过氧乙酸，搅拌均匀即可用于喷洒消毒。

2.8.3 戊二醛

按照戊二醛说明书，畜舍喷雾消毒用浓度为1：200～400，按照1：2 0 0配制。每间羊圈地面消毒需要戊二醛量为7500×0.5%=37.5ml，一栋羊舍要量为450000ml×0.5%=2250ml，配制方法为，取450kg自来水，加入2250ml 戊二醛，搅拌均匀即可用于喷洒消毒。

2.8.4 聚维酮碘

按照聚维酮碘说明书，畜舍喷雾消毒用浓度为1：1000～1600，按照1：1000配制。每间羊圈地面消毒需要聚维酮碘量为7 5 0 0×0.1%=7 5 m l，一栋羊舍要量为450000ml×0.1%=450ml，配制方法为，取450kg自来水，加入450ml 聚维酮碘，搅拌均匀即可用于喷洒消毒。

2.8.5 消毒灵（二氯异氰尿酸钠）

按照消毒灵说明书，畜舍喷雾消毒用浓度为1：500～1000，按照1：5 0 0配制。每间羊圈地面消毒需要消毒灵量为7500×0.2%=15g，一栋羊舍要量为450000ml×0.2%=900g，配制方法为，取450kg自来水，加入900g 消毒灵，搅拌均匀即可用于喷洒消毒。

2.9 喷洒操作

将羊群移出，使用电动高压喷雾器对每个羊圈地面进行全面喷洒消毒，关闭门窗1h，地面取样后，再打开门窗，通风1h，移入羊群。

2.10 消毒后羊圈地面采样

采样方法同2.5。

2.11 样品倍比稀释、接种与细菌培养

取3个1000ml灭菌三角烧瓶，分别标记为打扫前、打扫后和消毒后。分别将打扫前、打扫后和消毒后的6间羊圈的采样棉签头（每个采样点3个棉签，共270个棉签）放在对应的标签瓶里，分别加入750ml灭菌生理盐水，充分震荡10分钟。

从每个样品瓶中取出1ml混悬液，无菌操作，10倍比稀释到10-4，共5个稀释梯度，即100～10-4，每个稀释度各取1ml稀释液接种2块麦康凯琼脂平板，37℃恒温箱中静置2h后再分别倒扣培养24h。

2.12 培养结果观察与细菌计数

每块平板在37℃恒温箱中培养24h后取出，在体视显微镜下观察菌落生长情况，并计数每块板的菌落总数，计算消毒前后地面大肠杆菌平均数。

3 结果

3.1 细菌培养结果

打扫前，10-3和10-4呈现单个红色可数菌落，100、10-1和10-2菌落密集不可数。打扫冲洗后，10-2和10-3呈现单个红色可数菌落，100、10-1、10-2菌落密集不可数，10-4无菌落生长。喷洒消毒药后，10-3～10-4无菌落生长，具体情况见表1。

表1 打扫前后与消毒前后样品细菌培养结果

3.2 打扫前后与消毒前后羊舍地面大肠杆菌平均数

表2 打扫前后与消毒前后羊舍地面大肠杆菌平均数（CFU/cm2）

3.3 打扫冲洗对羊舍地面大肠杆菌清除率

表3 打扫冲洗对羊舍地面大肠杆菌清除率及消毒药物杀菌率

4 小结与讨论

（1）大肠杆菌是羊场地面主要污染菌种，羊场地面大肠杆菌污染主要来源于羊群粪便。正常羊群粪便中就含有大量的大肠杆菌，其中有些可能是致病性大肠杆菌，能够引起羔羊腹泻。大肠杆菌很容易培养，在麦康凯琼脂培养基上呈现红色菌落，其他细菌很难在这种培养基上生长，所以，可以用大肠杆菌作为检测消毒药物消毒效果的指示菌[4-5]。

（2）由于羊舍一周没有彻底冲洗，地面较脏，羊粪较多，所以地面大肠杆菌污染严重，从表2可以看出，达到54000CFU/cm2。

（3）从表3可以看出，打扫冲洗对羊舍地面大肠杆菌清除率比较高，达到了82.03%。可见，经常打扫冲洗，能够有效减少羊舍地面污染。

（4）从表3可以看出，戊二醛和二氯异氰尿酸钠对大肠杆菌的消毒效果较好，都达到99%以上。相比较，百毒杀对大肠杆菌的消毒效果较差。

[1]杜光波，王兵主编.动物防疫与检疫技术[M].苏州：苏州大学出版社，2012.

[2]张振兴，姜平主编.兽医消毒技术[M].北京：中国农业出版社，2010.

[3]陈光明，杜光波.鹅场系统消毒技术[J].黑龙江畜牧兽医，2012，（6）：74-75.

[4][美]Y.M.Saif.禽病学（第12版）[M].北京：中国农业出版社，2012：811-870.

[5]张永志.致鹅卵黄性腹膜炎性大肠杆菌的部分生物学特性研究[D].扬州大学，2008.