老鹳草的化学成分研究△

赵锐，郭安军，李新路，李军，李洋

(正大天晴药业集团股份有限公司 研究院，江苏　南京　210042)

老鹳草又名狼巴巴草、绵绵牛、太阳花等，具有祛风湿、通经络、止泻痢的功效。2015版《中华人民共和国药典》规定老鹳草为牻牛儿苗科植物牻牛儿苗ErodiumstephanianumWilld.、老鹳草GeraniumwilfordiiMaxim.或野老鹳草G.carolinianumL.的干燥地上部分，前者习称“长嘴老鹳草”，后两者习称“短嘴老鹳草”[1]。对牻牛儿苗、野老鹳草的化学成分研究表明其主要成分可分为黄酮类、鞣质类、有机酸类、挥发油类及一些其他成分，其提取物具有较好的抗病毒、抗氧化及抗炎镇痛的作用[2]。但目前对其来源之一的老鹳草G.wilfordii化学成分的研究较少，为了更好地开发利用这一常用药材，阐明其药效物质基础，本实验对老鹳草体积分数75%乙醇水提取物进行了系统研究，从中分离得到10个化合物，并根据理化性质和谱学数据进行了结构鉴定，分别为β-谷甾醇(1)，柯里拉京(2)，1，2，3，6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(3)，短叶苏木酚(4)，原儿茶酸(5)，没食子酸(6)，对羟基苯甲酸(7)，β-胡萝卜苷(8)，槲皮素(9)，1，3，6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(10)。其中化合物3～5，7，10为首次从该植物中分离得到，其化学成分与牻牛儿苗、野老鹳草具有一定相似性，从化学成分上证明了三者具有亲缘关系，具有化学分类学意义。

1　仪器与材料

X-4型显微熔点测定仪(北京科仪电光仪器厂，温度计未校正)；Bruker DRX-300/500型核磁共振仪(瑞士Bruker公司)；Agilent 1260型高效液相色谱仪(Agilent公司，美国)；AB SCIEX Triple TOF 4600型质谱仪(AB公司，美国)；半制备液相(江苏汉邦)；YMC-Triart perp C-18色谱柱(250 mm×50 mm，10 μm)(YMC公司，日本)；薄层色谱和柱色谱用硅胶(青岛海洋化工)；Sephadex LH-20(GE Healthcare Bio-Sciences AB公司，瑞典)；液相所用试剂为色谱纯，其他均为分析纯。

老鹳草药材采购于江苏省药材公司，由江苏正大天晴药物研究院李洋博士鉴定为老鹳草GeraniumwilfordiiMaxim.的全草。

2　提取与分离

干燥的老鹳草全草5.0 kg，粉碎，用体积分数75%乙醇水回流提取3次，每次2 h，减压回收得浸膏，浸膏温水悬浮，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压浓缩后分别得石油醚部位75 g，乙酸乙酯部位200 g。其中乙酸乙酯部位经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，共分成6个组分。所得组分Ⅰ经硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，在石油醚-乙酸乙酯(100∶7)流分得到化合物1(95 mg)，在石油醚-乙酸乙酯(100∶15)流分得到灰白色粉末，经Sephadex LH-20纯化得化合物2(35 mg)。所得组分Ⅲ经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇(100∶8)流分得淡黄色粉末，经Sephadex LH-20纯化得化合物3(35 mg)和4(43 mg)；二氯甲烷-甲醇(100∶17)流分得化合物5(27 mg)。所得组分Ⅱ和Ⅳ经Sephadex LH-20纯化得到4个流分，分别以制备高效液相色谱(乙腈-0.1%三氟乙酸)梯度洗脱得到化合物6(25 mg)、7(68 mg)、8(17 mg)、9(16 mg)、10(36 mg)。

3　结构鉴定

化合物1：白色针状结晶(甲醇)，mp 136～137 ℃。Lieberman-Burchard反应呈阳性。与β-谷甾醇对照品共薄层，其Rf值一致，且混合后熔点不下降。故鉴定化合物1为β-谷甾醇。

化合物2：白色无定形粉末(甲醇)，mp 216～219 ℃。ESI-MSm/z：633.2[M-H]-。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：6.69(1H，s，H-3)，6.66(1H，s，H-12)，6.36(1H，d，J=2.0 Hz，H-20)，3.98(1H，d，J=1.4 Hz，H-19)，4.97(2H，m，H-16，H-18)，4.46(1H，m，H-17)，4.53(1H，m，H-15a)，4.16(1H，m，H-15b)，7.05(2H，s，H-23，H-27)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：168.5(C-1)，125.4(C-2)，110.2(C-3)，145.2(C-4)，138.2(C-5)，145.3(C-6)，117.2(C-7)，116.7(C-8)，145.6(C-9)，137.7(C-10)，146.0(C-11)，108.3(C-12)，125.5(C-13)，170.1(C-14)，65.0(C-15)，71.6(C-16)，62.5(C-17)，76.2(C-18)，69.5(C-19)，95.0(C-20)，166.7(C-21)，120.6(C-22)，111.0(C-23)，146.4(C-24)，140.4(C-25)，146.4(C-26)，111.0(C-27)。以上数据与文献[3]报道的柯里拉京基本一致。

化合物3：灰白色无定形粉末(甲醇)，mp 226～228 ℃。Molish反应呈阳性。ESI-MSm/z：787.2[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.19(2H，s，2-Gall H-2，6)，7.11(2H，s，3-Gall H-2，6)，7.09(2H，s，6-Gall H-2，6)，7.02(2H，s，3-Gall H-2，6)，6.19(1H，d，J=8.4 Hz，H-1)，5.49(1H，dd，J=9.6，9.5 Hz，H-2)，5.70(1H，dd，J=8.4，7.9 Hz，H-3)，4.62(1H，d，J=9.4 Hz，H-6a)，4.58(1H，dd，J=7.8，4.4 Hz，H-6b)，4.16(1H，m，H-5)，4.12(1H，d，J=4.8 Hz，H-4)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：166.5(6-Gall-C7)，165.9(3-Gall-C7)，165.5(2-Gall-C7)，164.8(1-Gall-C7)，146.5(1，2，3，6-Gall-C3，5)，140.4(1-Gall-C4)，139.8(2-Gall-C4)，139.4(3，6-Gall-C4)，119.9(6-Gall-C1)，119.8(3-Gall-C1)，118.9(2-Gall-C1)，118.3(1-Gall-C1)，109.8(1-Gall-C2，6)，109.7(2-Gall-C2，6)，109.6(3-Gall-C2，6)，109.5(6-Gall-C2，6)，92.7(Glc-C1)，71.5(Glc-C2)，75.5(Glc-C3)，68.5(Glc-C4)，75.2(Glc-C5)，63.9(Glc-C6)。以上数据与文献[4]报道的1，2，3，6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖基本一致，为首次从该植物中分离得到。

化合物4：黄色针晶(甲醇)，mp 290～291 ℃。ESI-MSm/z：247.1[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.34(1H，s，H-7)，3.26(2H，t，J=3.8 Hz，H-10)，3.19(2H，t，J=3.8 Hz，H-9)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：149.3(C-2)，115.5(C-3)，140.1(C-3a)，145.0(C-4)，141.3(C-5)，144.2(C-6)，108.0(C-7)，113.3(C-7a)，160.5(C-8)，23.8(C-9)，33.0(C-10)，195.4(C-11)。以上数据与文献[5]报道的短叶苏木酚基本一致，为首次从该植物中分离得到。

化合物5：白色针晶(甲醇)，mp 202～205 ℃。溴甲酚绿反应呈阳性，FeCl3反应呈阳性。ESI-MSm/z：152.2[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：6.85(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.44(1H，dd，J=8.2，1.5 Hz，H-6)，7.46(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：168.5(-OCH2)，123.1(C-2)，116.8(C-6)，114.7(C-5)，151.1(C-4)，145.2(C-3)，122.3(C-1)。以上数据与文献[6]报道的原儿茶酸基本一致，为首次从该植物中分离得到。

化合物6：无色针晶(甲醇)，mp 231～233 ℃。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：12.03(1H，s，-COOH)，9.45(2H，s，4，6-OH)，8.48(1H，s，5-OH)，7.16(2H，s，H-3，7)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：167.7(C-1)，146.1(C-4，6)，138.7(C-5)，122.2(C-2)，110.3(C-3，7)。以上数据与文献[7]报道的没食子酸基本一致。

化合物7：白色无定形粉末(甲醇)，mp 214～217 ℃。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.79(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.82(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：166.8(COOH)，161.5(C-4)，132.0(C-2，6)，115.4(C-3.5)，121.2(C-1)。以上数据与文献[8]报道的对羟基苯甲酸基本一致，为首次从该植物中分离得到。

化合物8：白色无定形粉末(甲醇)，mp 282～283 ℃。Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性，与β-胡萝卜苷对照品混合熔点不下降，共TLC的Rf值一致，故鉴定为β-胡萝卜苷(daucosterol)。

化合物9：黄色针晶(甲醇)，mp 315～316 ℃。ESI-MSm/z：303.2[M+H]+。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ：7.76(1H，d，J=1.5 Hz，H-2′)，7.66(1H，dd，J=9.0，1.5 Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J=9.0 Hz，H-5′)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.24(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ：149.0(C-2)，138.1(C-3)，176.4(C-4)，159.2(C-5)，99.7(C-6)，166.2(C-7)，94.8(C-8)，162.5(C-9)，104.4(C-10)，123.2(C-1′)，116.5(C-2′)，145.8(C-3′)，145.0(C-4′)，116.3(C-5′)，122.0(C-6′)。以上数据与文献[9]报道的槲皮素基本一致。

化合物10：白色无定形粉末(甲醇)，mp 213～215 ℃。Molish反应呈阳性。ESI-MSm/z：635[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.15(2H，s，3-Gall H-2，6)，7.09(2H，s，3-Gall H-2，6)，7.07(2H，s，6-Gall H-2，6)，5.99(1H，d，J=8.3 Hz，H-1)，5.25(1H，dd，J=9.2，9.0 Hz，H-2)，5.74(1H，dd，J=8.3，7.9 Hz，H-3)，4.48(1H，m，H-6a)，4.58(1H，m，H-6b)，3.98(1H，m，H-5)，3.93(1H，m，H-4)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：166.5(6-Gall-C7)，165.9(3-Gall-C7)，164.8(1-Gall-C7)，146.5(3，6-Gall-C3，5)，146.0(1-Gall-C3，5)，140.4(1-Gall-C4)，139.4(3，6-Gall-C4)，119.9(6-Gall-C1)，119.8(3-Gall-C1)，118.3(1-Gall-C1)，109.8(1-Gall-C2，6)，109.6(3-Gall-C2，6)，109.5(6-Gall-C2，6)，93.5(Glc-C1)，71.1(Glc-C2)，76.0(Glc-C3)，64.1(Glc-C4)，75.5(Glc-C5)，63.9(Glc-C6)。以上数据与文献[4]报道的1，3，6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖基本一致，为首次从该植物中分离得到。

4　讨论

本研究从老鹳草的75%乙醇水提取物的乙酸乙酯部位中分离得到10个化合物，主要为酚酸类、黄酮类化合物，与此前老鹳草成分研究报道一致，为进一步阐明老鹳草的药效物质基础提供了依据。也从化学成分上证明了牻牛儿苗、老鹳草以及野老鹳草三者具有亲缘关系，具有化学分类学意义。但老鹳草的正丁醇及水部位的化学成分仍有待进一步研究。

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