粪便毛蚴孵化法诊断家畜血吸虫病

文│彭又新 熊家亮（湖北省荆州市动物疫病预防控制中心）

湖北省自20世纪60年代开始开展了粪便毛蚴孵化法诊断家畜血吸虫病的研究。最初试验的方法为瓦钵试管倒插孵化法，几经改进之后用特制的塑料杯取代瓦钵，于20世纪70年代末将塑料粪杯设计定型并批量生产，使试管倒插孵化法在全省范围内得到推广应用。目前，该方法仍用于家畜血吸虫病的确诊。

但随着时代的发展变化，以前制定的操作规程中的某些内容需要进行适当的修改。同时，随着老一代的动物血防工作者陆续离开工作岗位，现在能够熟练掌握该方法的人越来越少。为此，笔者根据多年的实际运用经验，对粪便毛蚴孵化法诊断家畜血吸虫病进行了一次全面深入的总结，现将经验介绍给大家，希望对大家的工作能够有所裨益。

一、粪便毛蚴孵化法的种类

1.尼龙网兜淘洗孵化法（三角烧瓶）。该方法是最早应用于家畜血吸虫病诊断的方法。采用两层尼龙网兜进行淘洗，上层网兜孔大，主要起过滤粪渣的作用；下层网兜孔小，主要起兜住虫卵的作用；洗好后将下层网兜中的内容物到入三角烧瓶中进行孵化。由于该方法操作繁琐，耗时长，在家畜的诊断上早已弃用，但卫生部门目前仍在应用。

2.顶管法（试管）。用一特制的粪杯盛装粪液，上面再倒插一装满清水的试管。我国大部分血吸虫病流行区均采用该方法用于家畜血吸虫病的诊断，根据盛粪液容器的不同又分为几种，湖北省又将此方法称为试管倒插孵化法。

3.直孵法（平底长颈烧瓶）。粪液直接装入平底长颈烧瓶中，颈的中部放入适量的脱脂棉，再加入清水进行孵化。全国有少数地方采用该方法用于家畜的查病。直孵法的检出率与试管倒插法相比略优相当，可作为试管倒插法的补充，其缺点是在搬运过程中易破损。

二、粪便毛蚴孵化法的原理

血吸虫虫卵具有与一般寄生虫虫卵不一样的特征，呈椭圆形、淡黄色、卵壳较薄，无卵盖，侧方有一小逗点状或小钩状的棘突，其最主要的特点就是成熟虫卵卵内含有毛蚴。家畜体内寄生的其他吸虫的虫卵内均没有毛蚴。成熟、未成熟及死亡变性卵，都可在粪便中发现。但在正常情况下，即未经抗血吸虫药治疗或未腹用服泻剂的情况下，粪便内的卵，大多数是含毛蚴的成熟虫卵，而未成熟或变性卵只占少数。虫卵随同家畜粪便排出体外并在自然环境中遇到水后，在适当条件下就会孵出毛蚴。

影响毛蚴孵化的因素。温度：以水温20～30℃最为适宜。当气温低于10℃或高于37℃时，大多数虫卵的孵化被抑制。pH：以7.5～7.8最为适宜，当pH在3以下和10以上时，孵化完全受到抑制。光线：光能加速虫卵的孵化，黑暗则抑制孵化。渗透压：毛蚴在清水中孵化率100%，在1.2%以上的盐水中，虫卵的孵化完全被抑制。

三、畜粪的采集和送检

1.采集量。畜粪的采集量与每头家畜检查所用粪杯数密切相关。如果进行一粪三检，大家畜（牛、马属）的采粪量应为200克，猪100克，羊、犬50～60克。

查病时粪样的送检次数及每个粪样检测份数（几粪几检），达标考核必须采用一粪三检；而一般的查病和疫情监测建议采用一粪两检。据试验统计，血吸虫病畜一粪一检的检出率约为60%，一粪两检的检出率约为70%，一粪三检的检出率约为72%。

2.采集方法。

（1）拾粪。即采取家畜自然排出的粪便，用一次性筷子或树枝将其采集。为了避免污染，采粪时所用采粪器具不能连续使用，要求一具采一头畜粪，粪样要新鲜。

（2）掏粪。即用手伸进直肠采粪，最好是戴上橡皮手套进行，每采一头更换一副手套，如徒手采集，每采完一头后，必须将手洗净后再采另一头，以防交叉污染。

3.包装送检。采得粪样可用洁净容器（如一次性饭盒）盛装并再用一干净的塑料袋包装，或者使用两层干净的塑料袋包装，详细填写《动物血吸虫病粪样送检登记卡》放入对应的塑料袋中送检。粪样送检登记卡须填写的内容有:乡（镇）名，村名，组别，畜主姓名，畜别，性别，年龄，特征，家畜编号，送检时间等。采到粪样后应立即上送，冬季防止冰冻，夏季防止日晒。

四、用水的准备

将自来水放入洁净无盖的容器中静置12小时以上即可作为洗粪和孵化用水。一般于前一天下午或晚上将自来水放入无盖的桶、盆或缸中，第二天上午即可作为洗粪和孵化水使用。

河水、井水、池塘水用做洗粪和孵化用水必须进行杀灭水虫和澄清水质的处理。其方法是将水加温至60℃以上，冷却后澄清再用。

孵化时水温须达到15℃以上，否则应升温。当水温高于28℃时，洗粪用水中可按1%的比重加入无碘食盐以抑制洗粪过程中毛蚴过早逸出。

由于现今自来水已经普遍使用，所以一般不用河水、井水和池塘水作为孵化和洗粪用水。有些地方的自来水并不是按标准生产的，使用前须检查水中是否有水虫。

五、试管倒插孵化法的操作过程

1.工具的准备。特制的塑料杯及杯盖，与杯盖孔相适应的玻璃试管以及管口上套用的橡皮筋圈，竹筷、40～60孔/铜筛、无碘食盐，其他还有剪刀、胶布、5～10倍放大镜、水温计、pH试纸、毛巾、肥皂、粪桶、脸盆、水桶、水瓢、大水桶或水缸、大盆、试管刷、闹钟、台灯、一次性手套、一次性饭盒、塑料袋、粪检登记表等。

2.编号。对所用的塑料粪杯逐一进行编号，每个粪杯都有一个惟一的号码。将医用胶布剪一小段贴在粪杯的外壁上，将号码写在胶布上。

3.登记。将粪检登记卡上的内容详细记入粪检登记表，记录对应的粪杯号，同时将一定量的粪样放入对应的粪杯中（或粪杯中的铜筛中）。每个粪杯中家畜的粪量为：牛、马属动物粪便50～100克，猪、羊、犬粪便各30～40克。

4.洗粪。将塑料杯内加上2/3容量的洗粪用水，用筷子充分搅拌淘洗，而后取出粪筛粪渣，将杯内加满洗粪用水，静置25～30分钟。由于羊粪为颗粒状、较硬，粪杯中加洗粪水之前需将其弄碎。

由于用铜筛淘洗耗时较长，且铜筛会滤掉一部分虫卵，为了缩短操作时间，提高检出率，在实际工作中进行牛粪检测时一般不使用铜筛，而是直接将粪样放入粪杯中进行淘洗。

5.换水。静置到时后倒去粪杯中1/2的粪水，再加满洗粪用水，静置15～20分钟，此为第一次换水。到时后再倒去粪杯中2/3的粪水，再加满洗粪用水，静置15分钟为第二次换水。

通过长期的实践证明，减少一次洗粪换水并不影响毛蚴的孵化及观察效果，在实际操作中特别是温度较高时可减少一次换水，以缩短洗粪时间及减少工作量。

6.上孵化水。倒去杯中上2/3的粪水，加满孵化用水，静置30分钟。

7.盖杯盖及孵化。取与杯盖孔相适应的玻璃试管，装满洗粪用水倒插于杯盖孔上一并盖在杯上进行孵化。为防止试管下滑，应在试管上缠上适量的橡筋。

关于粪杯中的粪水上翻到试管中的问题。当试管中的水温低于粪杯中的水温时，就会出现粪液上翻现象。已加孵化水的粪杯不能放到阳光下直晒，已上试管的粪杯既不能放到阳光下直晒，也不能用电扇吹。粪液上翻的解决办法：先找出引起粪水上翻的原因予以解决，同时将试管中的水换成温度略高的孵化水。

六、直孵法的操作过程

1.器械的准备。平底长颈烧瓶、烧杯（500毫升）、脱脂棉为本方法专用工具，以取代粪杯，所需其他器械与顶管法相同。

2.操作。将平底长颈烧瓶进行编号，每个长颈烧瓶配一个对应的烧杯。将粪检登记卡上的内容详细记入粪检登记表，同时记录对应的烧瓶号。

取家畜粪便于烧杯中，加入自来水充分搅拌，然后将烧杯内加满水，静置25～30分钟。

将烧杯中的粪液倒去一半，剩余的粪液倒入对应的烧瓶中，未倒干净的粪渣用孵化水冲洗灌入烧瓶中，将烧瓶颈内壁上的粪渣用孵化水冲洗干净并继续向烧瓶中加入孵化水使液面距离瓶口8厘米左右，然后将适量脱脂棉放入颈口中与液面轻轻接触（要求脱脂棉厚薄均匀，厚度约2厘米左右），在脱脂棉上方轻轻注入孵化水至瓶口，一个小时后进行毛蚴观察。

也可将烧杯内加上2/3容量的洗粪用水，烧杯中放入一40目(孔)/铜筛，取牛、马属动物粪便50～100克，猪、羊、犬粪便各30～40克置铜筛内，充分搅拌淘洗，而后取出粪筛粪渣，将烧杯内粪水倒入对应的烧瓶中，其他操作与前面相同。

七、毛蚴的观察及结果判定

通常情况下，牛、羊粪样于第1、3、5小时各观察一次，猪粪样孵化后5、8小时各观察一次，每个样品每次观察应在2分钟以上。实际操作中，由于时间所限，每个粪杯最多观察两次。

毛蚴的出现时间与水温关系密切。水温较高时，毛蚴出现的时间早，同时毛蚴存活的时间也较短，所以夏季观察毛蚴的时间要相应地提前并抓紧时间进行观察。

发现血吸虫毛蚴即判定为阳性。在一个试管中有1～5个毛蚴判为+，6～10个为++，11～20个为+++，21个以上为++++。在同一粪样的几个试管中，只要在一个试管中发现一个毛蚴，则该家畜为阳性。

毛蚴往往在距水面4厘米的范围内活动，灰白色、折光强、梭形，多呈与水面平直或斜向的直线运动。观察毛蚴应在光线充足的地方进行，为了便于观察，可衬以黑色背景。

观察时，毛蚴必须与水虫严加区别。可疑时，应用吸管吸取置于载玻片上镜检签别。

在光线较暗的环境中及夜晚进行毛蚴孵化操作时，必须补充灯光并达到所需的亮度。

为了便于毛蚴的观察，可在插好试管的粪杯前放置一台灯以增加亮度。