小檗碱对多囊卵巢综合征模型小鼠卵巢组织中肿瘤坏死因子-α、白介素-1β及白介素-6影响的研究

王玉阁，姚宏波，文丽波，李 雪，赵 堃*

（齐齐哈尔医学院1.生理教研室；2组胚教研室，黑龙江 齐齐哈尔 161042）

多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是妇科较为常见的一种生殖内分泌紊乱性疾病，主要特征为卵泡发育障碍、不排卵或稀发排卵、高雄激素血症、胰岛素抵抗及卵巢多囊样改变。随着对PCOS机制深入的研究，发现PCOS患者还存在慢性炎症，慢性低度炎症亦是PCOS的重要特征[1]。有研究发现[2]，细胞炎性因子与PCOS的发生发展有密切关系，因此本研究通过观察小檗碱对PCOS小鼠卵巢组织中TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响，来研究小檗碱改善多囊卵巢综合征的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

实验动物：30天龄雌性C57BL/6J小鼠48只，购于齐齐哈尔医学院实验动物中心。

1.2 主要试剂

硫酸脱氢表雄酮，浙江仙居君业药业有限公司；注射用大豆油、二甲双胍

及小檗碱，湖北远成药业有限公司；兔抗鼠TNF-α多克隆抗体、兔抗鼠IL-1β多克隆抗体及兔抗鼠IL-6多克隆抗体，万类生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 多囊卵巢胰岛素抵抗模型的制备

实验动物适应性喂养5天后开始实验。随机分为对照组和模型制备组，模型制备组小鼠每日颈背部皮下注射脱氢表雄酮7毫克/100克（采用医用大豆油配制），对照组每日注射等量的医用大豆油，模型制备组每日给予60%高脂饮食，对照组给予正常饮食。从给药后第11天开始晨起进行阴道脱落细胞涂片，连续10天，观察动情周期，阴道上皮细胞持续10天为角化状态的小鼠为诱导成功的模型。将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组、小檗碱组。

1.3.2 给药方法

灌胃法给药21天，给药剂量按参考文献方法换算[3]，小檗碱按每天75 mg/kg灌胃，二甲双胍按每天100 mg/kg进行灌胃，正常对照组和模型对照组每天给予同体积蒸馏水灌胃，均为每天1次，连续灌服21天。

1.3.3 指标检测

给药后第22天，将小鼠隔夜禁食，脱颈椎法处死小鼠，取双侧卵巢，采用免疫组化法测定卵巢组织局部TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.00分析软件进行处理，数据均采用（x± s）表示。两组间结果比较经t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结 果

免疫组化阳性指数=阳性面积×光密度值/总面积[4]，模型组TNF-α、IL-1β、IL-6阳性表达均明显高于正常组（P＜0.01）；小檗碱组TNF-α、IL-1β、IL-6阳性表达均低于模型组（P＜0.05）；二甲双胍组TNF-α、IL-6阳性表达亦均低于模型组（P＜0.05）；小檗碱组TNF-α、IL-1β、IL-6阳性表达与二甲双胍组比较无显著性差异（P＞0.05）。结果见图1。

图1 各组小鼠卵巢组织IL-1β、IL-6及TNF-α表达情况

3 讨 论

小檗碱（berberine），又称黄连素，是从毛茛科黄连属植物三角叶黄连、黄连或云连的根茎中提取出的一种异喹啉类生物碱。近年的研究表明，小檗碱具有抗菌消炎的作用，还有降低血糖，增加胰岛素敏感性，改善胰岛素抵抗，因此应用于2型糖尿病的治疗，且疗效确切[5]。在PCOS治疗中，小檗碱在降低空腹胰岛素、腰臀比、胆固醇水平、低密度脂蛋白方面优于二甲双胍，在降低空腹血糖、胰岛素抵抗指数、体质指数、总睾酮水平及升高高密度脂蛋白胆固醇水平方面的疗效与二甲双胍相同[6]。

有研究发现，PCOS患者中某些炎症因子水平升高，说明在PCOS发生发展中可能存在低度慢性炎症。并且这种低度慢性炎症与PCOS远期并发症（如糖尿病和心血管疾病）的发生发展也有密切联系[7-8]。而本研究采用脱氢表雄酮联合高脂饮食诱导C57BL/6J雌性小鼠建立PCOS动物模型，观察到模型对照组小鼠TNF-α、IL-1β、IL-6表达情况明显高于正常对照组，而采用小檗碱治疗后，TNF-α、IL-1β、IL-6表达情况有显著的降低，提示小檗碱可通过降低卵巢局部炎症因子，来改善卵巢炎症微环境，进而改善多囊卵巢综合征症状，而小檗碱对炎症因子影响作用的具体相关分子机制有待进一步研究。

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[5] YIN J,XINU H,YE J.Ef fi cacy of bcrbcrinc in palicnts with type 2 diabetes mellitus[J].Metabolism,2008,57(5)∶712-717.

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