马蓝离体无菌系构建影响因子的探索

刘富

摘 要：本试验采用组织培养的方法，对马蓝愈伤组织诱导进行探索、研究，并利用正交设计对马蓝愈伤组织诱导的培养基配方进行筛选，建立了马蓝离体无菌系。本试验为提高马蓝的生产效率、降低生产成本提供技术支持，并为今后马蓝组培快繁技术的研究提供一定的科学依据。

关键词：马蓝；组织培养；正交设计；愈伤组织诱导率

中图分类号：S567.23 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20171233028

引言

马蓝为爵床科，属多年生草本植物，又名板蓝根、南板蓝、蓝靛、大青叶。南板蓝根具有清热解毒、凉血的功效，具有良好的药用价值。近几年南板蓝根野生资源出现枯缺，原料供不应求，价格上涨。因此开发南板蓝根野生资源，进行人工栽培，产业化种植，具有很好的發展前景。

1 材料与方法

1.1 试验材料

外植体采集于红河州建水县关厅乡，并栽种于红河学院温室。本试验接种的外植体为马蓝的叶片、幼嫩茎段、成熟茎段，下午14：00进行取材。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体消毒与无菌接种

取外植体叶片、幼嫩茎段、成熟茎段，用自来水冲洗30min，接着用洗涤剂浸洗，并用自来水流冲洗干净，将叶片剪成2～3cm2，茎段剪成3～5cm；之后于超菌台上用70%乙醇消毒10～30s，用0.1%HgCl2处理7～10min，再用无菌水冲洗5～8次，用无菌滤纸吸干水分后，把叶片切成0.5cm2、茎段切成1cm左右大小，无菌接种于不同培养基上。每瓶接种3个外植体，所有试验处理均进行3次重复，每次重复10瓶。试验培养基均附加蔗糖3.0%，琼脂0.8%，pH为5.8。

1.2.2 培养基配方筛选

选择长势好、颜色深绿的马蓝叶片为外植体，利用正交设计试验，选用L16（45）正交设计表安排马蓝愈伤组织诱导的试验方案。

2 结果与分析

2.1 不同取材部位对愈伤组织诱导的影响

以MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1为基本培养基，3种外植体叶片、幼嫩茎段、成熟茎段在同等处理、培养条件下进行愈伤组织诱导，3种外植体都可以在MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1培养基上诱导出愈伤组织，叶片诱导效果最佳，且诱导时间最短，接种8d便长出愈伤组织，此时诱导率为26.7%，20d后诱导率趋于稳定，为86.7%，是较理想的组培外植体。

2.2 培养基配方筛选

进行马蓝愈伤组织诱导的培养基配方筛选，利用正交设计方法，以6-BA、2，4-D、NAA、IBA 4个激素因素的不同配比作处理，正交设计的试验方案与试验结果见表1。

3 结语

马蓝的叶片更有利于愈伤组织诱导，是较理想的组织培养外植体。马蓝叶片愈伤组织诱导较理想的培养基配方为MS+6-BA1.5mg·L-1+2，4-D0.5mg·L-1+IBA0.1mg·L-1

+NAA1.0 mg·L-1+蔗糖3.0%+琼脂0.8%。endprint