蒙药材蒙古山萝卜有效成分绿原酸抗肝损伤纤维化作用的研究△

杨宏昕 白音夫 常 亮 金 辉 魏艳沛 陈广荣 刘 静

(1.内蒙古人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017； 2.内蒙古自治区中医药研究所，内蒙古 呼和浩特 010020； 3.内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010065； 4.内蒙古医科大学附属人民医院，内蒙古 呼和浩特 010010)

绿原酸是蒙古山萝卜活性成分，在多种保肝中药材或民族药材中均含有绿原酸，绿原酸抗氧化作用可能是有关药材保肝作用的主要机理，但是，目前对绿原酸抗肝损伤纤维化作用研究的比较少，特别是对绿原酸抗肝纤维化的分子作用机理有待深入研究。

1 材料

透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)试剂盒(均由上海海研生物制剂厂生产)，F1-613自动计算I125放免测量仪(北京原子能研究所),TGL-16型高速离心机(上海医用分析仪器厂),德国徕卡切片机。

2 方法与结果

1.2 模型的制备与分组 取小鼠40只，均分分4组，对照组、模型组、绿原酸高剂量组与绿原酸低剂量组(绿原酸100mg和10mg·kg-1)，每组10只，按每10g体质量0.1mL灌胃给药，对照组和模型组用等体积蒸馏水灌胃。除对照组外，其他各组动物按文献方法[1]，以25%四氯化碳(CCl4)玉米油溶液1mL·kg-1造模，实验结束后，动物禁食12h，乙醚麻醉，腹主动脉收集血液备用，切取肝脏。

2.2 肝体指数测定 取完整肝脏称质量，计算与体质量的比值。结果对照组、模型组、绿原酸高剂量组与绿原酸低剂量组，肝体指数分别为0.23±0.05、0.27±0.1、0.25±0.09(P<0.05)、0.27±0.1，绿原酸高剂量组较模型组降低8.0%，作用显著。

2.3 对肝组织匀浆中纤维化物质的测定 剪取一块肝组织于预冷生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干，分别称取0.1g放入匀浆管，加入9倍预冷生理盐水，采用匀浆器研磨后，4000r·min-1，离心10min，取上清制备成10g·L-1组织匀浆，按试PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN剂盒说明书操作。结果，PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN，对照组分别为52.1±11.2(ng·L-1)、28.6±5.4(ng·L-1)、72.3±11.3(ng·L-1)、61.3±8.6(ng·L-1)；模型组为78.3±12.6、32.1±6.0、91.1±13.6、87.1±16.7；绿原酸高剂量组为69.6±12.7(P<0.05)、30.3±6.1、82.7±12.3(P<0.05)、71.4±10.4(P<0.05)；绿原酸低剂量组79.6±15.7、35.1±8.2、88.3±12.1、75.1±17.7(P<0.05)，模型组PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN比对照组显著升高(P<0.05)，绿原酸组较对组均普遍升高，但与模型组比较，绿原酸高剂量组比模型组分别降低12.5%、5.9%、10.2%、22.0%；低剂量组LN降低16.0%，有显著差异，其他无明显差异。

2.4 肝组织病理学观察 肝组织甲醛固定、切片、HE染色或Masson染色、光镜观察肝脏组织病理学变化。结果显示，对照组肝组织形态、结构正常，汇管区无纤维化。模型组肝组织呈多发性变性和坏死，肝细胞索排列紊乱，细胞混浊肿胀，空泡样变性，细胞膜不完整，结构混乱，胶原纤维明显增生，中央静脉和门脉区纤维索向周围延伸，形成不完全间隔。绿原酸高剂量组肝小叶较完整，汇管区结构比较清晰，肝细胞变性较轻，血管周围见胶原纤维增生，中央静脉和门脉区有少量纤维索放射延伸，但无间隔形成，与模型组相比较，肝损伤明显减轻。绿原酸低剂量组肝细胞索排列紊乱，细胞混浊肿胀，细胞水肿和脂肪样变，炎细胞浸润，程度与模型组接近。光镜观察结果表明，绿原酸对CCl4所引起的肝损伤具有改善作用。

3 讨论

CCl4引起脂质过氧化是其主要的肝损伤形成机制，CCl4被肝微粒体酶激活生成三氯甲基自由基和氯自由基，作用细胞膜磷脂质上的不饱和脂肪酸，膜结构的破坏，引起肝细胞损伤，细胞外基质的增生与降解失去平衡，导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积形成纤维化[2]。研究表明，绿原酸可以明显抑制CCl4引起的肝损伤指数升高，降低肝组织匀浆中的PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN含量，减轻小鼠病理性肝损伤纤维化的作用。其作用机理可能是绿原酸的抗氧化作用减轻阻碍CCl4对肝的氧化损伤作用，但对PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN合成的调节机理有待研究。

[1]杨宏昕，等.蒙古山萝卜酸对实验性肝纤维化大鼠MMP-1、TIMP-1、TGF-β1和PDGF表达的影响[J].西北药学杂志，2017，32(4)：477-480.

[2]Lin X， et al. Methyl helicterate protects against CCl4-induced liver injury in rats by inhibiting oxidative stress， NF-κB activation，Fas/ FasL pathway and cytochrome P4502E1 level[J]. Food ChemToxicol，2012，50(10):3413-3420.