多肉类十二卷属植物组织培养技术

金 燕 陆锦明 卜顺法 顾春峰 (上海市闵行区三农综合服务中心 201109）

汤桂钧* （上海市闵行区农业技术服务中心 201101）

多肉类植物为百合科多年生常绿草本，是近年在我国快速发展的观赏花卉，其中以十二卷属较为名贵。多肉类十二卷属植物全属约有150余个种，广泛分布于世界各地，在我国华南、西南地区的热带、亚热带地区亦有分布；性喜温暖、干燥和阳光充足的生态环境，忌寒冷、霜冻和潮湿，最适生长温度15～25 ℃，冬季最低5 ℃以上，夏季能耐40 ℃左右的高温，最适生长期为3～11月；对土壤要求不严，以肥沃疏松的沙壤土为最适。

多肉类十二卷属植物利用价值较高，叶片呈披针形三角状、长条状或圆柱状，肉质厚实，表面光滑革质、有光泽，叶色浅绿或深绿，叶上有彩色条纹或彩色星状斑点，有的品种叶片上镶嵌有丛状金黄色、粉红色的条纹，十分美丽，具有较强的观赏性；作盆栽植物极适宜用于办公室、居室、厅堂、阳台等摆放装饰，不仅具有清新优雅之美，还可以吸收空中的有害气体，洁净空气环境，具有环保功能。因此，近十多年来，多肉类十二卷属植物在我国许多大中城市流行，成为热门的新宠花卉，单价数十元至数百元，经济效益显著。但多肉类十二卷属植物通常花而不实，繁殖方式以分株、叶片扦插等为主，年繁殖率只有1∶3～5，种苗稀缺，抑制了其产业发展。为此，笔者引进了近30个多肉类十二卷属植物新品种，从中选取了代表性种类与品种，以其花梗嫩茎段、嫩叶等组织为外植体，进行了离体培养技术研究，最终掌握了整套组织培养技术体系，培育出了一批试管苗并作盆花栽培[1]。现将其组培技术研究结果报道如下。

1 外植体诱导培养

1.1 花梗嫩茎段离体诱导培养

1.1.1 消毒处理与接种

多肉类十二卷属植物无茎秆，叶片簇生、厚实肉质，常年5、6月及10、11月从中心处抽出细长花梗开花，不结实无种子（人工授粉可结实）。根据其独特的生物学特征特性，选择新抽生、半木质化的花梗嫩茎段作外植体，诱导发生无菌芽。

具体方法为：将抽生的花梗自植株基部剪下，并剪去下部老熟部分及顶端幼嫩部分，用洗洁精清洗2遍，然后剪成长6cm左右的茎段，用纱布包裹后置自来水下冲洗3 h。在无菌室超净台上对花梗进行消毒，先用75%酒精溶液消毒1min，然后用10%次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗3遍后沥干备用。将消毒后的花梗切成1cm长的茎段，每段带2～3个节间，接种于发生培养基上，以诱导不定芽产生，从而培育成无菌系[2]。诱导培养基配方为MS+BA 2.0mg+NAA 0.2mg+活性炭1.0g/L+琼脂5g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8，其中活性炭可起到减轻外植体褐化死亡及促进培养基通气的作用。为防止茎段离体消毒后产生褐化现象（离体后多酚类物质外渗），前3周内暗培养不加光，以后光照13 h/d，光照强度3 000 Lux左右。

1.1.2 培养结果

经过7～15 d的诱导培养（品种间有差异），茎段自顶端切口处或节间处膨大形成愈伤组织并不断生长，先呈黄白色，再经30多d的培养，愈伤组织脱分化长出浅绿色且有光泽的亮点，表面凹凸不平，直径0.5～1.0cm。经约2个月的培养，愈伤组织分化，转变成浅绿色、有光亮的芽点，此为不定芽雏形，以后芽点继续生长成幼叶并呈浅绿色至浓绿色，再生为丛生苗，再经1个多月培养，叶腋处抽出分枝生成丛生芽，一般有2～4个，多的可达5个以上，由此诱导成功，一般诱导率可达90%以上。

1.2 嫩叶离体诱导培养

叶片离体培养是植物组织培养的常用方法，具有取材方便、不受季节限制等优点，但相对于花梗嫩茎段培养，其培养周期明显较长，成功率也相对较低。

1.2.1 叶片消毒处理与接种

剪取多肉类十二卷属植物植株中心处或旁边新长出、已展平的新叶，用洗洁精清洗2遍，用纱布包裹后置自来水下冲洗3 h。在无菌室超净台上对叶片进行消毒处理，先用75%酒精溶液消毒1min，然后用10%次氯酸钠消毒10～15min，最后用无菌水冲洗3遍后沥干备用。将叶片切成1cm见方的小块，平放接种至培养基上，一般瓶内接种1～5个。培养基配方及培养条件与花梗嫩茎段离体诱导培养相同。

1.2.2 培养结果

培养7 d后，叶片切口处开始膨大并陆续脱分化长出愈伤组织，开始呈黄白色，经2个月培养后陆续转变成浅绿色、有光亮、凹凸不平的组织，约半年可从愈伤组织上分化出幼苗并不断生长成丛生苗。

2 继代增殖培养

诱导成功的丛生苗一般每株有2～4个丛生芽，可将丛生芽切割分株进行增殖扩繁，以不断扩大繁殖系数，一般每30～45 d继代增殖1次。

增殖培养基配方为MS+BA0.2～1.0mg+NAA 0.02～0.1mg/L+琼脂5g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8。光照13 h/d，光照强度3 000 Lux左右。应注意BA浓度不宜超过0.3mg/L，避免丛生芽过多而使瓶苗徒长、叶片细长排列不整齐、甚至产生“玻璃苗”[3]。培养室温度以24 ℃为好，温度过低幼苗生长慢，温度过高（25 ℃以上）幼苗生长太快、苗瘦弱细长甚至会产生玻璃化现象[4]。此外，为促进培养基通气并有利于瓶苗健壮生长，培养基中可添加活性炭1～2g/L。

继代增殖的目的是将丛生芽不断切割分株以扩大繁殖系数，并使瓶苗健壮生长，但不能盲目扩大繁殖系数，否则会适得其反，一般增殖系数以1∶2.5～3为宜。

3 生根培养

当继代增殖至一定数量后，于幼苗长至高2cm左右时将其幼苗切成单株，接种至生根培养基上培育成完整的试管苗，生根培养基配方为1/2MS+IBA 0.2～0.3mg/L+活性炭1.0g/L+琼脂4.5g/L+蔗糖20g/L，pH 5.8。光照、温度管理与增殖培养相同。一般生根率可达98%以上，根系一般在3条以上，多的可达7～10条[5、6]。

4 试管苗炼苗驯化培育

将试管苗移出培养室，用镊子取出幼苗，在清水中漂洗，除尽根系所沾琼脂，以防栽后滋生病菌而烂根。炼苗移栽容器以30cm×30cm、底部镂空的塑料框为好，框内平铺10cm厚基质，炼苗基质选用泥炭、蛭石、珍珠岩、赤玉、竹炭、蛇木、仙土等7种，经一定比例混合配比并用拌和机充分搅拌均匀。基质中需加入杀菌剂、杀虫剂及NPK三元复合肥，以杀灭基质内病原菌和残留虫卵，并补充养分。将苗浅栽于基质内，栽后及时浇足搭根水，而后用75%遮光率的黑色遮阳网覆盖2层，因多肉类十二卷属植物的叶片肉质厚实不易失水，故不需覆盖薄膜，避免基质湿度过高而烂苗。栽植第2天可用喷雾器进行叶片喷雾，每天早晚各喷1次，切忌浇水。新根长出、幼苗完全成活后需严格控制浇水，一般夏秋季每7～10 d于清晨浇水1次，冬春季每15～20 d浇水1次，不干不浇，浇则浇透。苗长至5cm以上时（约6个月）可移栽至容器内作盆花养护，炼苗成活率可达99%以上。多肉类十二卷属植物病虫害发生极少且抗病性较强，在炼苗驯化阶段及以后正式上盆养护后基本上不进行病虫害防治。

[1]朱天华，陆锦明，孙清，等.十二卷类植物的离体培养技术研究[J].上海交通大学学报:农业科学版, 2012,30(3):45-48.

[2]查夫拉.植物生物技术导论[M].北京：化学工业出版社,2002,2(3）：38-39.

[3]宋晓诪，沈萌，左志宇，等.十二卷属植物西山寿的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学报,2007,43(5）：883-884.

[4]连勇，陈国忠，沈文，等.植物组织与细胞离体培养技术[M]北京: 中国科学技术出版社,2011:10-20.

[5]刘春梅，张红，等.点纹十二卷的组培与快繁[J].安徽农学通报,2012,18(3）：32-33.

[6]杨娟，俞爱军，周燕，等.多肉植物花影寿离体快繁技术研究[J].上海农业科技，2017(2):83-84.