鸭病毒性肝炎的研究进展

杨同涛，刘建涛，孙法良，崔京腾

（齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250100）

鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH)是由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus，DHV)引起雏鸭的一种高度致死性传染病[1]。临床上具有明显神经症状和肝脏肿大、表面呈斑点样出血为特征。其主要侵害6周龄以内雏鸭，尤以2日至3周的雏鸭最为易感，成年鸭有抵抗力。感染不同类型病毒性肝炎和不同日龄的雏鸭发病后死亡率有所不同，有的高达95%，有的低于15%。随着近几年中国养鸭业快速发展，该病已成为危害中国养鸭业最为严重的疫病之一，给养鸭业带来了巨大的经济损失。本文对鸭肝炎病毒的流行病学、病原学、诊断与疫苗研究等方面进行了综述。

1 鸭病毒性肝炎流行病学研究进展

鸭肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus，DHV）包含小核糖核酸病毒科、星状病毒科、嗜肝病毒科3个病毒科的4种病毒[2]。嗜肝病毒科的鸭肝炎病毒引起鸭乙型肝炎，但该病毒对各年龄段鸭没有显著的致病性，本文不做论述；星状病毒科引起血清Ⅱ型、Ⅲ型鸭肝炎，小核糖核酸病毒科引起血清Ⅰ型鸭肝炎。

1.1 鸭病毒型肝炎发生与分布 Ⅰ型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type 1，DHV-1)于 1945 年在美国被Levine等首次发现，可惜由于当时的条件限制未能分离出病毒，直到1950年，美国人Levine和Fabricant从鸡胚中首次分离到病原，该病原体就是后来的I型鸭肝炎病毒(Duckhepatitis virus type 1，DHV-1)[3]。 1965年在英格兰的诺福克 （Norfolk） 发生了与Ⅰ型鸭肝炎病毒(Duckhepatitisvirus type 1，DHV-1)病理性质相似的病例，但发病鸭群已经免疫过Ⅰ型DHV弱毒株，雏鸭交叉免疫保护试验证明，所分离出的病原与Ⅰ型DHV不同，故被命名为Ⅱ型 DHV（后来被命名为 DAst V-1）[4]。Toth在纽约长岛发现了一种可以引起对Ⅰ型DHV有免疫力的雏鸭发病和死亡的病毒，但不如Ⅰ型DHV感染严重。由于该病毒与Ⅰ型和Ⅱ型DHV不同，被命名为Ⅲ型DHV（后来被命名为 DAst V-2）[5]。 Ⅰ型 DHV呈世界分布，Ⅱ型DHV局限于英格兰，Ⅲ型主要局限于美国，在 1998～1999年，程安春在我国首次发现有Ⅲ型 DHV的存在。目前对养鸭业危害比较大的主要是Ⅰ型和Ⅲ型DHV。

1.2 鸭病毒型肝炎流行特点 鸭病毒性肝炎发病无明显季节性，一年四季均可发生，其死亡率与感染鸭肝炎病毒血清型、雏鸭日龄、继发感染有着密切关系。该病传染源是病鸭、感染的康复鸭和成年鸭，鸡、火鸡、雏野鸭、雏鹅、鹤鹑、幼鸽等禽类可作为其宿主。鸭舍中的鼠类和野禽可作为病毒的贮存宿主或媒介[6]。Ⅰ型鸭肝炎病毒自然条件下仅发生于雏鸭，成年鸭可感染而无临床症状，产蛋鸭即使在污染的环境中也无临诊症状，也不影响其产蛋率，但血清与蛋黄中含有中和抗体，传染源主要通过粪便排毒，主要引起6周龄以内的雏鸭发病和死亡，小于1周龄雏鸭的死亡率可达95%，随日龄增大，死亡率逐渐降低。Ⅱ型鸭肝炎病毒只感染鸭，成年鸭对该病有抵抗力，未观察到其有野生储存宿主或媒介；Ⅲ型鸭肝炎病毒一般只感染雏鸭，其不如Ⅰ型鸭肝炎病毒感染严重，雏鸭的死亡率很少超过30%。

2 鸭病毒性肝炎病原学及临床症状

2.1 病原学 I型鸭肝炎病毒，直径20～40nm，呈球形或类球形，核衣壳呈二十面体对称，含有32个壳粒，无囊膜。该病毒属小RNA病毒，基因组由60个亚单位组成，每个亚单位含有四种衣壳蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，此外还有基因组结合蛋白VPg。 VP1、VP2、VP3 彼此不同，均为结构蛋白，基因组含有7209～8450个碱基对，为单股正链 RNA(ss RNA)，即病毒 RNA 为 mRNA[7]。Ⅱ型 DHV属于星状病毒(Astrovirus)，病毒颗粒的形状呈特征性的带有顶角的星形，直径28～30nm，患病鸭肝悬液中可见超过1000个病毒颗粒的病毒集合[8]。Ⅲ型DHV属于小RNA病毒科，经中和试验和荧光抗体试验证明Ⅲ型DHV和Ⅰ型DHV无共同抗原，其在鸭肾细胞中呈晶格状排列，病毒粒子直径30nm。

2.2 临床及剖检症状 Ⅰ型鸭肝炎的发生和传播很快，雏鸭感染主要表现为：雏鸭感染首先表现为精神萎靡，缩颈，翅下垂，不爱活动打磕睡，行动呆滞或跟不上群，此后短期内即厌食，停止运动、蹲伏并半闭眼，有的出现腹泻。患病鸭出现神经症状，病鸭身体侧卧，两腿痉挛性踢，发生全身性抽搐，有时在地上旋转，死亡时头向后背，呈角弓反张姿势，少数病雏鸭死前排黄白色或绿色稀粪。死亡常在3～5d内发生，随即迅速下降以至停止死亡。死亡雏鸭的喙端和爪尖淤血，呈暗紫色。

剖检病变主要集中在肝脏，表现为肝脏肿大、质脆易碎等现象，且肝脏表面有出血点或出血斑，通常可见肝脏颜色暗淡或发黄，表面呈斑驳状；另外，胆囊和脾脏也出现变化，如胆囊肿大并充满墨绿色胆汁，而脾脏也出现肿大，有时呈斑驳状；胰脏肿胀而无光泽，部分会出现小的白色病灶，肾脏肿大，表面血管充血、变得较明显呈树枝状，切面隆起，边缘外翻；脑膜水肿、充血、出血。部分病例还可见心肌呈淡灰色，质软有淤血，似开水煮样，心房扩张，充满不凝固的血液。

Ⅱ型鸭肝炎病毒感染鸭后会出现烦渴、拉稀、尿酸盐分泌过量的症状，有时可能有抽搐和角弓反张的症状，Ⅱ型鸭肝炎病毒的靶器官主要为肝脏和肾脏。肝脏肿大呈浅粉红色，表面有许多小点状出血，这种血点常融合成带状；脾脏肿大，表面弥散的白色病灶形成“西米样”外观；肾脏肿胀，血管充血并凸于肾脏表面；消化道内通常没有食物，偶尔肠壁心冠脂肪上有小出血点。Ⅲ型鸭肝炎病毒感染的雏鸭与Ⅰ型鸭肝炎病毒典型症状相似，即两腿向后伸和角弓反张，剖检症状也与Ⅰ性鸭肝炎病毒感染相近。

3 鸭病毒性肝炎诊断技术研究进展

3.1 病毒分离技术 病毒分离技术是检测HV的方法之一，结合临床症状和流行病学特征可做出初步诊断。目前，DHV分离技术主要有鸭胚(或鸡胚)尿囊腔接种和动物接种2种方法。细胞培养方面因毒株毒力强弱和对细胞的适应程度不同，产生或不产生细胞病变，到目前为止，这些方法还不适于作为DHV的分离技术而应用[9]。

3.2 血清学诊断技术 实验室用于检测DHV的病原的方法很多，但是每一种都有自身的优缺点。常规的检测方法主要是血清学方法，包括中和试验、血凝试验、琼脂免疫扩散试验、对流免疫电泳、荧光抗体技术、酶联免疫吸附试验以及分子生物学实验等[10]。用于检测DHV病原的方法很多，但是每一种都有自身的优缺点。目前，最常用、最可靠的方法仍然是中和试验。中和试验虽是普遍认为的权威诊断方法，但其繁琐、费时、成本高，不能用于快速诊断，难以在基层中推广应用。

3.3 分子生物学诊断技术 近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，专家学者对DHV的研究不断地深入，已经建立起检测DHV的分子生物学方法。耿昕颖等建立了DHV PCR-ELISA检测方法，用该方法对50份雏鸭肝提取的RNA样本进行检测，阳性检出率为82%，较RT-PCR检出率高46%。结果表明，该PCR-ELISA方法具有特异、敏感、安全的特点，从而为鸭病毒性肝炎流行病学研究及临床诊断提供了新的途径[11]，其后陆续有学者报道建立了检测鸭肝炎病毒抗原的RT-PCR方法。黄显明等建立了DHV-Ⅰ逆转录套式PCR检测方法RT-PCR方法具有特异、快速和敏感的特点，可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速鉴别诊断[12]。另外，罗玉均等建立了SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法检测DHV-I，具有较好的特异性、敏感性，为DHV-I的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段[13]。

4 鸭病毒性肝炎疫苗研究进展

目前使用的鸭病毒性肝炎疫苗主要是弱毒活疫苗和灭活疫苗，基因工程疫苗的研究也取得了一定进展。

4.1 弱毒疫苗研究进展 一般而言，鸭病毒性肝炎弱毒疫苗，是将鸭肝炎病毒(DHV)在鸡胚或鸭胚上连续传代，获得的致弱毒疫苗株。大多数文献报道连续传代至60～80代的DHV，安全性和免疫原性可达到较理想的效果，可作为鸭病毒性肝炎弱毒疫苗的候选毒株。Aspli和Reuss分别通过鸡胚传代致弱的方式，获得了鸭病毒性肝炎弱毒疫苗株[14]。Hwang等用鸡胚连续传代至63代时，病毒毒力比较稳定，对鸡胚的致死率达到100%，对种鸭用鸡胚弱毒苗在1日龄、7周龄和21周龄进行三次免疫，在67周产蛋期内其子代雏鸭能抵抗强毒攻击。韩国学者Kim等利用发病雏鸭病料分离的3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)AP-04203株，通过SPF鸡胚连续传至100代，获得致弱疫苗株（AP－04203P100）[15]。 以 103.0ELD50/0.2ml剂量，免疫原性好，无毒力返强，肌肉注射免疫1日龄雏鸭，2d后以103.0ELD50/0.2ml剂量的强毒株AP－04203攻毒，表现出100%保护效果。弱毒苗一般雏鸭在1～3日龄免疫。现在文献主要是针对单一血清型弱毒疫苗的研究，由于现在国内I型和Ⅲ型鸭肝病毒，故亟需加快弱毒联苗的研究进程。

4.2 灭活疫苗研究进展 国外Gough等[16]及Woolcock[17]都成功研制Ⅰ型鸭病毒性肝炎灭活疫苗(鸭胚组织苗)，并证实以灭活苗作基础免疫不能产生满意的抗体应答，证实灭活油乳剂苗免疫种鸭3次，其后代雏鸭可获得有效保护，若种鸭2、3日龄时用弱毒疫苗，以后在22周龄时再用灭活苗免疫，产生的中和抗体水平要高于用3次灭活苗免疫，所产雏鸭对强毒攻击的保护力可维持 3周以上。他们还发现用鸭胚繁殖病毒制备的灭活疫苗所产生的抗体反应，要强于用鸡胚制备的灭活苗。种鸭未用弱毒苗作基础免疫，则灭活苗的免疫效果将会受到影响和限制。国内陈克强等[18]和胡建华等[19]也分别做了鸭肝炎病毒灭活苗的研究，结果证实在未基础免疫情况下灭活苗也能起到很好的保护效果。研究表明鸭肝炎灭活苗能产生良好的免疫应答，是否需要基础免疫国内外试验结果不统一，后续需专家们做这方面试验，充分发挥灭活苗作用。

4.3 基因工程疫苗研究进展 基因工程疫苗，是利用现代生物技术在分子水平上制备的新型疫苗，此方面文献较少，付玉志等构建Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的自杀性DNA疫苗，结果表明，不仅可以明显诱导雏鸭淋巴细胞增殖，而且可以诱导雏鸭产生较高滴度的DHV特异性抗体，并对雏鸭有良好的免疫保护作用[20]。张婧等构建含有Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒，并初步证实该重组病毒能够在真核细胞中正确表达DHVI-RVP1基因和绿色荧光蛋白的融合蛋白，为构建鸭瘟和鸭病毒性肝炎二价基因工程疫苗的研究奠定基础[21]。

5 小结

目前，鸭病毒性肝炎主要流行Ⅰ型和Ⅲ型，随着DHAV-Ⅰ变异株或新型DHAV在多个国家和地区出现，使得DHAV-Ⅰ免疫失败也逐渐增多，鸭病毒肝炎多价疫苗的研究不失为一个很好的方向。鸭病毒性肝炎弱毒苗效果要优于灭活苗，弱毒疫苗仍是下一步研究的重点，随着基因工程技术的进步，单价或多价弱毒基因工程苗也是未来研究的方向。

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