猪场规范化采样技术及要求

张文通，魏 凤，李 峰，王金良，苗立中，沈志强，

（1.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600）

猪场采集样品是猪场疫病防控的关键环节之一。样品采集质量的高低直接影响猪病实验室诊断结果的准确性，进而影响猪场对疫病的防控。样品规范化采集是获得高质量样品的必要条件，本文就猪场规范化采样相关内容进行了综述。

1 样品采集必要性

猪场样品的采集是动物疾病诊断、流行病学调查或免疫监测所不可缺少的重要步骤。绝大多数传染病的确诊必须通过实验室检验，就必须用特异的诊断方法或分离到病原才能确诊为某种传染病[1-4]。因此需要采集病料，送检到实验室。采样是从整体样品采（抽）取具有代表性的样品，通过感官检查和实验室检查，了解样品的病原学指标，作出正确评估。采样方法、采样数量和样品质量直接决定监测结果的准确性和监测结论的科学性。采样人员必须是兽医技术人员，按照正确的方法采样。

2 样品规范化采集要求

采样原则：合理、适时、典型、无菌、适量、安全[5-7]。凡是血液凝固不良、天然孔流血的病死动物，应耳尖采血涂片，首先排除炭疽，炭疽病死的动物严禁解剖。采样时必须无菌，避免样本的交叉感染。解剖时先胸腔后腹腔；先取实质性器官，后取肠道等易污染的组织器官及内容物。采取的样品应具有代表性，采取的脏器组织为病变明显的部位；肉眼难以判定时，应全面系统采集病料。病料最好在使用药物前采取，死亡动物的内脏采取最迟不超过6 h，否则难以采集合格病料。血液样品在采集时应根据采样对象、检验目的确定采血方法与采血部位。同时防止环境污染和疫病传播，做好环境消毒和废弃物处理，预防人畜共患病感染。采集常规病料应满足诊断的需要，在发病初期或症状典型时采样。采集血液样品时，如果用于病毒检验，在动物发病初体温升高期间采集。进行免疫效果监测时，禽流感灭活苗在免疫21 d后；O型口蹄疫猪在28 d后，其他家畜在21 d后。用于诊断时，应采集1～5只（头）病死动物的有病变的器官组织、血清、抗凝血。免疫效果监测时，规模场按照1%，但家禽不少于30份，家畜不少于20份血清。

3 样品采集

3.1 采样前器械物品准备

器械：采样箱、保温箱、解剖刀、剪刀、镊子、酒精棉、酒精灯、棉签、保定动物专用工具、注射器、针头；试管架、离心机、离心管、易封口样品袋、塑料样品盒、胶布、封口膜、冰袋等。记录用品：不干胶标签、签字笔、油性记号笔、采样单、采样登记表及记录本等。防护用具：口罩、防护服、防护帽、胶靴、乳胶手套等防护用品。

3.2 样品采集方法

根据动物种类确定采血部位。选用真空管、无菌注射器、无菌采血瓶等采血器材采血，采血量须满足试验需要。若需抗凝血，则视试验要求选择抗凝剂。如需血清，则待血凝固后无菌分离血清并分装于灭菌瓶（管）中。

分泌物、渗出物拭子采集。棉签插入后捻转2～3圈，两个拭子一并置入盛0.8 mL左右的生理盐水或0.01 M PBS（含双抗）的1.5 mL EP管中。其它动物拭子采集类似。

实质脏器的采集。无菌采集肺脏、肝脏、脾脏、扁桃体、淋巴结等脏器组织块放入无菌容器内。每块组织应单独放在无菌容器中，注明采样动物名称、日期、组织。注意防止组织间互相污染。

其它样品采集。皮肤、奶样、精液、胚胎、肠内容物、粪样、尿液、脑、脊髓等。用注射器采集，采集样品置于含双抗的0.01 M PBS中。

3.3 样品包装

液体：离心管，封口瓶。有形病料：塑料自封袋，大袋套小袋，分病例包装。

3.4 样品标识

管上、瓶上、袋上都要用防脱色记号笔标识清楚。样品编号要与“采样单”对应，具有唯一性、可追溯性。采样单一式三份（被采样单位、采样/送检单位、检测单位）。采样单记录内容包括：动物场（厂）地址、动物种类、群体规模、发病日期、临床症状、治疗用药、样品编号、采样人、采样日期等。

3.5 样品的运输

样品运输储存容器：应为密封容器，防止渗漏，造成环境污染或疫情扩散。样品运输温度：样品应在低温下保存和运输。样品，若能在4 h内送达实验室，冷藏运输（保温箱内放置冰袋）；若4～24 h内送达实验室，要先冷冻后（可将样品置-20℃冷冻），再冷藏运输。若大于24 h，则运输环境温度应控制在-20℃以下（干冰），途中不能超过48 h。

4 注意事项

注意事项包括：炭疽等人畜共患病的个人防护，采样后的无害化处理，畜禽及其产品无害化处理，采样废弃物无害化处理，环境消毒、采样器械消毒、样品外包装消毒等。

5 重大猪病采集内容

猪瘟：主要采集扁桃体、淋巴结、脾脏、肾脏和血清。猪繁殖与呼吸综合征：主要采集肺脏、血清、扁桃体、脾脏、淋巴结、粪便；死产和流产胎儿的脾、肺、血清和胸水也是最适宜的检验材料。猪流行性乙型脑炎：主要采集患病仔猪或产死胎儿的脑组织、脑积液和血液。猪细小病毒病：存在于流产或产死胎儿的新鲜脏器（脑、肾、肝、肺、睾丸、胎盘及肠系膜淋巴结等），其中以肠系膜淋巴结和肝脏的分离率最高。猪伪狂犬病：主要采集脑和扁桃体；另外，鼻咽分泌物也可用于病毒分离。猪圆环病毒2型：主要采集肺脏、淋巴结、肾脏和血清。猪口蹄疫：采集未破裂或刚破裂的水疱皮（液），对新发病死亡的动物可采取脊髓、扁桃体、淋巴组织等。猪传染性胃肠炎：主要采集十二指肠、空肠及回肠的黏液。猪流行性腹泻：主要采集粪便及肠道内容物。猪轮状病毒病：主要采集粪便和肠内容物。

猪巴氏杆菌病（猪肺疫）：采集急性病猪的血液、局部水肿液、肺、肝、脾、淋巴结等。猪大肠杆菌病：采集病死仔猪小肠内容物和肠系膜淋巴结。猪链球菌病：采集肝、脾、淋巴结、关节液、脓汁等。副猪嗜血杆菌病：采集治疗前发病猪的浆膜表面渗出物及肝、关节液等。猪传染性胸膜肺炎：采集鼻、支气管分泌物和肺脏。猪沙门氏菌病（仔猪副伤寒）：急性病例可采集肝、淋巴结等实质器官，慢性病例不易分离。猪衣原体病：可采集血液和病死猪的肝脏、脾脏、肺脏、排泄物、流产胎儿等病料。仔猪梭菌性肠炎（仔猪红痢）：主要采集小肠内容物，内脏器官则不一定能分离出细菌。猪痢疾（血痢）：采集结肠黏液和粪便。猪附红细胞体病：采集全血，应加入抗凝剂。

6 小结

据了解，大量养猪场往实验室送检的样品存在很多规范[8-9]。比如送检病料采集部位不正确、组织样品太大、血清严重溶血、样品腐臭、标识不清等，实验室检测人员收集到这样的样品，经常出现各种各样的窘境；这样的样品检测的实验室结果不能够用于猪场疫病的防控。因此，规范化采集样品就显得极为重要。