绿色蔬菜中常用维生素C检测方法比较及优化策略研究

□ 卢 蕊 朱 山 曾庆真 张 乾 菏泽市食品药品检验检测研究院

维生素C是一种结构简单的维生素，性状表现为无色结晶，能够溶于水。维生素具有非常多的效用，能够有效地防治坏血病，因此也称作抗坏血酸。维生素有助于激发巯基酶的活性，并且维持谷胱甘肽的还原状态，从而实现解毒的作用[1]。另外，维生素C能够将人体中的胆固醇转变为胆汁酸，降低人体的胆固醇含量，还能够有效预防消化性溃疡等疾病[2]。

绿色蔬菜中维生素C的检测方法较多，有滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等。目前，最为常见的检测方法为滴定法和高效液相色谱法，但是根据相关报道可知，滴定法和高效液相色谱法检测维生素C时，试剂、待测液的保存以及提取剂的差异会对检测结果造成极大的影响[3]。本文以绿色蔬菜黄瓜作为材料，采取滴定法和高效液相色谱法对维生素C进行检测，对检测条件的设置以及样液的保存和提取等进行对比研究，从而为滴定法与高效液相色谱法对维生素C检测的操作和使用提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂

材料：本次研究选择2017年7月期间市场出售的黄瓜作为实验材料。

试剂：抗坏血酸（标准品质）、2,6-二氯淀粉钠盐（分析纯）、碳酸氢钠（分析纯）、草酸（分析纯）、偏磷酸（分析纯）、醋酸（分析纯）、活性炭、甲醇（色谱纯）以及超纯水。

仪器：国产电子分析天平、国产捣碎机、国产超声波清洗仪、国产恒温水浴锅、国产高速离心机、国产过滤装置以及美国产高效液相色谱仪。

1.2 方法

1.2.1 2，6-二氯靛酚钠滴定法

2，6-DCIP溶液的制备：准备52 mg的碳酸氢钠溶于200 mL的沸水中，随后加入50 mg的2，6-二氯靛酚，在冷却后进行过滤，2,6-二氯靛酚钠溶液存于棕色容量瓶中，并且存放于冰箱。

标定：在滴定前，用浓度为1 mg/mL的维生素C标准液进行标定。操作时，在1 mL维生素C中滴入浓度为2%的草酸9 mL，充分均匀后以制备的2,6-DCIP溶液滴定，当颜色变为红色且持续15 s颜色不退时，记录下2,6-DCIP溶液的用量，计算维生素C的量。

样品测定：选取待测样液10 mL，用制备的2,6-DCIP滴定，当颜色变为红色且持续15 s颜色不变时，记录下2,6-DCIP溶液的用量，重复操作两次。另外，选择浓度为2%的草酸10 mL进行空白对照滴定，同样操作两次。

维生素C含量的计算：根据滴定中2,6-DCIP溶液的用量计算出维生素C的含量，公式如下。

公式中，VA表示样品两次滴定时，2,6-DCIP溶液使用的平均体积（mL）；VB表示草酸两次空白滴定时，2,6-DCIP溶液使用的平均体积（mL）；C是指样品提取液定容体积（mL）；T值表示每毫升2,6-DCIP对应的维生素C的mg数；D表示滴定时样液的体积（mL）；W表示被测样品的质量（g）。

1.2.2 高效液相色谱法（HPLC）

高效液相色谱法检测的条件为C18（5 μm，4.6 mm× 250 mm）色谱柱、浓度为0.1%草酸作为流动相、流速控制在每分钟1 mL，同时柱温控制为30 ℃，检测的波长为254 nm。准备6份浓度为1 mg/mL的维生素标准液，分别稀释成浓度为0.025、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3 mg/mL的维生素C使用液，分别用HPLC法进行检测，每次检测的样液容量为20 μL，分别记录图谱的峰面积数据，计算维生素C的含量。

2 结果

2.1 2,6-DCIP法检测结果

2,6-DCIP法检测后，黄瓜中每100 g样品中，维生素C的平均含量为1.03 mg；另外，检测的回收率为103.7%。

2.2 HPLC法检测结果

HPLC法检测后，黄瓜中每100 g样品中，维生素C的平均含量为1.06 mg；另外，检测的回收率为104.1%。

3 讨论

3.1 维生素C含量检测方法比较

绿色蔬菜中常用维生素C含量的检测方法较多，但是最为常见的主要包括2,6-DCIP法和HPLC法。在本次研究中，采用上述两种方法对黄瓜中的维生素C含量进行检测。两种检测方法结果均能够满足测定要求，但HPLC法精准度高于2,6-DCIP法。

3.2 维生素C检测方法的优化

首先，试剂的存放时间会对维生素C含量检测的结果造成影响，当维生素C标准液存放时间超过48 h后，维生素C含量降低，因此标准液需要在48 h内完成检测。另外，2,6-DCIP溶液超过12 d后，维生素C含量值下降，因此需要在12 d内使用。第二，待测液保存条件会对维生素C的结果造成影响。存放时间越长，维生素C含量越低。因此，待测液制备后要立即测定，时间不能够超过1.5 h；第三，提取方法对维生素C含量的影响。草酸的浓度会影响维生素C的测定，因此草酸浓度要控制在2%。同时，超声波提取和常温振荡提取的时间都要控制，时间越长，测定的含量越低。因此，样品提取后应该快速定容、过滤，尽快检测。

[1]国增超.果蔬中维生素C含量检测方法的述评[J].农业与技术,2016(5).

[2]谢轶,苏冰霞,周鹏.高效液相色谱法测定不同品种番木瓜果实中维生素C含量[J].热带农业科学,2016(2).

[3]何保山,张长辉,左春艳,等.食品中维生素C含量检测研究进展[J].江西农业学报,2010(10).