ZHX2蛋白在结直肠癌中的表达及其临床病理意义

胡 幸 邓星辉 周劲媛

1.广东省江门市五邑中医院病理科，广东江门 529000；2.广东省江门市中心医院病理科，广东江门 529030

ZHX2蛋白在结直肠癌中的表达及其临床病理意义

胡 幸1邓星辉2周劲媛1

1.广东省江门市五邑中医院病理科，广东江门 529000；2.广东省江门市中心医院病理科，广东江门 529030

目的检测ZHX2蛋白在结直肠癌中的表达情况，分析其临床病理意义。方法收集从2013年1月～2016年12月在江门市五邑中医院手术的结直肠癌标本67例，用免疫组化法对癌组织及癌旁组织进行ZHX2蛋白检测，联系临床病理参数进行统计学分析。结果与癌旁组织比较，结直肠癌的ZHX2蛋白阳性率显著降低（95.5% vs80.5%，P＜0.05）。ZHX2阳性率在直肠癌中为90.6%，在结肠癌中为71.4%（P＜0.05）；在高、中、低分化癌中依次为81.2%、84.2%、69.2%（P＜0.05）。在随访周期内，ZHX2阳性病例比阴性病例的平均生存期显著延长[（45.1±8.8）月vs（27.3±6.7）月，P＜0.05]。结论ZHX2可能具有抑制结直肠癌的发生、发展及分化的作用，检测其表达情况对患者预后具有一定的参考价值。

结直肠癌；ZHX2；病理；免疫组织化学

R735.3

A

2095-0616（2018）01-207-04

Expression of ZHX2 protein in colorectal cancer and its clinicopathological significance

HU Xing1DENG Xinghui2ZHOU Jinyuan1
1.Department of Pathology,Jiangmen Wuyi Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangdong,Jiangmen 529000,China;2.Department of Pathology,Jiangmen Central Hospital,Guangdong,Jiangmen 529000,China

ObjectiveTo detect the expression of ZHX2 protein in colorectal cancer and to analyze its clinicopathological significance.MethodsA total of 67 colorectal cancer specimens from Jiangmen Wuyi Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2013 to December 2016 were collected.Immunohistochemical staining was used to detect ZHX2 protein in cancer tissues and adjacent tissues.Statistical analysis was performed with clinicopathological parameters.ResultsCompared with the para cancerous tissue,the positive rate of ZHX2 protein in colorectal cancer was significantly lower (95.5% vs 80.5%,P＜0.05).The positive rate of ZHX2 was 90.6% in rectal cancer,71.4% in colon cancer,andP＜0.05.81.2%,84.2%,69.2%,respectively,were in high,medium and low differentiated cancers (P＜0.05).During the follow-up period,the average survival time of ZHX2 positive cases was significantly longer than that of negative cases [（45.1±8.8） months vs（27.3±6.7）months,P＜ 0.05].ConclusionZHX2 may have the function of inhibiting the occurrence,development and differentiation of colorectal cancer,and detection of its expression may have certain reference value for the prognosis of patients.

Colorectal cancer;ZHX2;Pathology;Immunohistochemistry

锌指和同源框2（ZHX2）是新克隆的非特异性转录抑制因子，ZHX2通过与基因启动子区相应DNA序列结合，发挥其对基因转录的抑制作用。近年来，在肿瘤发生发展的相关机制中，ZHX2越来越受到关注，多项研究表明其表达水平与多种疾病及癌症密切相关[1]，但关于ZHX2的表达与结直肠癌之间是否存在着某种联系及相关性的研究，仍处于探索阶段。故本文将应用免疫组化法对结直肠癌组织中ZHX2蛋白的表达进行检测分析，探究ZHX2与结直肠癌的相关性，意在为临床诊断提供参考并为结直肠癌的预后提供一定的治疗线索。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取于我科2013年1月～2016年12月间行结直肠癌手术、具备完整临床和随访资料、且通过病理确诊的67例结直肠癌石蜡标本，其中男37例，女30例；年龄27～81岁，平均（56.6±10.3）岁。其中结肠癌35例，直肠癌32例。组织学分型：腺癌56例，黏液腺癌7例，鳞癌4例。组织学分级：高分化16例，中分化38例，低分化13例。肿瘤直径：≥5cm 18例，＜5cm 49例。浸润深度：浸及浆膜31例，未浸及浆膜36例。

1.2 方法

采用免疫组化SuperVision法检测结直肠癌变组织及癌旁正常黏膜组织。步骤如下：（1）对所有的石蜡标本进行切片，每片厚度均为4μm；（2）将烤片温度设置为58～60℃，对标本薄片进行烤片处理6h；（3）对已完成烤片的标本薄片进行常规脱蜡及水化（应用二甲苯脱蜡，乙醇水化）；（4）在EDTA抗原修复液中对已处理过的烤片进行高压修复，蒸汽上升后继续放置2 min[2]；（5）用3%的过氧化氢将内源性过氧化物酶以及稀释500倍的ZHX2抗体进行灭活处理；（6）放置于37℃的恒温培养箱中进行培养，时长1h，二抗置于室温下培养20min；（7）使用DAB对标本薄片进行显色处理并冲洗干净；（8）利用苏木精对标本薄片复染至常规透明程度后封固，封固剂使用中性树脂。空白溶液采用PBS缓冲液。

1.3 评判标准

每张切片随机取5个视野（×400高倍镜），采用半定量积分法切片进行分级计分，主要依据细胞阳性百分率和阳性细胞的染色强度两项之和进行判定[3]。评分细则：细胞阳性百分率：＞50%为3分，26%～50%为2分，6%～25%为1分，≤5%为0分；细胞染色强度：黄褐色（强）为3分，棕黄色（中）为2分，浅黄色（弱）为1分，无染色0分。性质判断为以上两项相加之和：阴性0分，1≤弱阳性≤2，3≤中等阳性≤4，5≤强阳性≤6。

1.4 统计学处理

采用统计学软件SPSS17.0版对数据进行统计分析，计量资料采用（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用百分数（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中的ZHX2蛋白表达

ZHX2蛋白，位于细胞核，颜色为棕黄色，主要表达于结直肠癌组织中癌细胞，同时在基质中也有所表达；而在癌周正常黏膜组织中，则主要在腺上皮细胞中表达（见图A-E）。ZHX2在结直肠癌组织中的阳性率为80.5%（54/67），ZHX2在癌旁正常黏膜组织中的阳性率为95.5%（64/67），两者比较差异有统计学意义（χ2=4.255，P＜0.05）。见表1。

2.2 肿瘤部位和分化程度与ZHX2表达的关系

在35例结肠癌中，ZHX2阳性率为71.4%（25/35），在32例直肠癌中，ZHX2阳性率为90.6%（29/32），不同部位的ZHX2阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在不同组织学分级的患者中，高分化、中分化、低分化的ZHX2阳性率分别为：81.2%（13/16）、84.2%（32/38）、69.2%（9/13），不同组织学分级的ZHX2阳性率比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 不同组织中的ZHX2蛋白表达情况比较

图A、B、C:ZHX2在癌组织中高表达，A：HE×100，B：低倍×100，C：高倍×200图D、E、F:ZHX2在癌组织中低表达，A：HE×100，B：低倍×100，C：高倍×200

2.3 肿瘤大小、浸润深度与ZHX2表达的关系

肿瘤直径≥5cm 18例患者中，ZHX2阳性率为83.3%（15/18）；＜5cm 49例患者中，ZHX2阳性率为79.6%（39/49）。浸及浆膜31例患者中，ZHX2阳性率为83.9%（26/31）；未浸及浆膜36例患者中，ZHX2阳性率为77.8%（28/36）。肿瘤大小、浸润深度与ZHX2表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 结直肠癌组织中ZHX2表达与临床病理特征的关系

2.4 ZHX2阳性组和ZHX2阴性组的生存率和生存期比较

67例病例获得时间1～48个月，平均（38.8±10.3）随访，存活45例，死亡22例，生存期为1～48个月，平均生存期为（37.6±9.7）个月。ZHX2阳性组的生存率和生存期均优于ZHX2阴性组，差异有统计学意义（P＜0. 05）。见表3。

表3 ZHX2阳性组和ZHX2阴性组的生存率和生存期比较

3 讨论

ZHX2所在的ZHX家族属于同源盒蛋白超家族中的锌指类，其包括ZHXl、ZHX2和ZHX3，且均含有2个Cys2-His2型锌指模序和4～5个同源结构域（HD）。人ZHX2基因位于染色体8q24.13，cDNA序列全长4500 bp，共编码837个氨基酸，包括2个锌指结构域、5个HD和408～448位富含脯氨酸残基结构域。ZHX2蛋白既可以自身结合形成同源二聚体，也可与ZHX1或ZHX3蛋白结合形成异源二聚体，其二聚体化结合位点位于HD1[4]。通过对氨基酸序列进行分析，发现在包含了HD1区和脯氨酸富含区的263～446位氨基酸，ZHX2发挥其转录抑制作用，而该区域为其发挥抑制作用的最小功能区域。多项研究结果显示，具有转录抑制作用的ZHX2对多种疾病的发生、发展演变过程中均有影响。其在心血管系统疾病[5]、神经系统疾病[6]、肾脏疾病[7]、消化系统疾病[8]、肝脏[9]疾病及在造血系统疾病[10]等均对ZXH2的表达作用有记录。

因肿瘤的发生和发展过程中存在多个阶段并且每个阶段都有多种因素的参与及调控，并且十分复杂，所以肿瘤的病因及发病机制的研究尚未十分透彻及明朗，还存在很多不可知的因素。Hoffman等[11]研究发现，野生型p53可以抑制与结直肠癌预后有关的survivin[12]基因的表达，而Morachis等[13]研究证实ZHX2可以通过NF-YA调节其下游基因p53的表达。但目前仍未见结直肠癌组织中ZHX2的表达与p53、survivin是否存在相关性。由此可见，ZHX2有望成为判断结直肠癌恶性程度和预后的新型分子生物学标志物。

本研究中主要采用了免疫组化SuperVision法，通过对ZHX2蛋白在结直肠癌变组织及癌旁正常黏膜组织中表达情况的检测分析，得知ZHX2蛋白在癌旁组织中表达率较高，在癌组织中的表达率则稍低，表明ZHX2蛋白的表达情况对结直肠癌的发生具有一定的影响程度。此外，研究结果还表明，癌变组织的发生部位和分化程度，直接对ZHX2蛋白的表达程度有影响。相比直肠癌，结肠癌中ZHX2蛋白的阳性表达率更低，而直肠是大肠癌的好发部位，且ZHX2蛋白表达程度越高，该部位就越容易发生癌变，出现该现象的原因可能是由于肿瘤不同的发生部位，起主要调控作用的基因也不一样。因此，本研究结果可以为结直肠癌的发生部位的研究提供一定的线索。

本研究结果提示，肿瘤大小、浸润深度与ZHX2表达均无显著相关（P＞0.05）。依据随访资料，本次研究分析了各组患者的生存状况，发现ZHX2阳性组患者的生存率高于ZHX2阴性组，且生存期更长，此差异有统计学意义（P＜0.05）。综合研究结果跟临床病理资料得知，ZHX2阳性组患者多为高、中度分化者，因此ZHX2可能会作为一项结直肠癌预后情况判断的新指标。

ZHX2作为新型转录抑制因子，其自身表达与肿瘤的发生发展密切相关已被多项研究证实，在多种疾病及肿瘤中ZXH2均有表达，且参与多种病理生理过程并与相关基因相互作用，对疾病的进展有影响。在肝细胞癌[14]，和多发性骨髓瘤[15]的发生中的作用已被证实，但是在结直肠癌的发生发展中的相关及联系未得到确切的证实，实验探究还有待继续，本研究可知ZHX2的表达与肿瘤的发生部位及分化程度有关联，这为肿瘤的早期诊断、临床治疗和预后判断提供了一定的线索。

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2017-09-20）