工厂化栽培草菇适宜优质高产菌株的筛选与分析

2018-01-09曲玲任海霞万鲁长谢红艳郭惠东沈秀芬任鹏飞

山东农业科学 2017年12期

曲玲+任海霞+万鲁长+谢红艳+郭惠东+沈秀芬+任鹏飞

摘要：山东省草菇栽培面积大，工厂化生产发展较快，但是适宜的优质高产菌株相对缺乏，常规菌株种性退化严重。本试验对初筛的6个草菇菌株以玉米芯为主要栽培基质进行品比优选试验。结果表明：V1172、VSD-1岀菇较早，产量高，但子实体菌苞较薄，易开伞；V1296、V1295产量较高，长势好，出菇期集中，子实体菌苞较厚，商品性好；V9715、V选育10产量明显低于其它菌株，但V选育10子实体菌苞厚，耐储存。综合分析比较认为：V1296、V1295表现最佳，适宜山东工厂化栽培推广。

关键词：草菇；菌株；筛选；高产；商品性

中图分类号：S646.1+3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2017）12-0029-04

Abstract The cultivated area of Volvaria volvacea in Shandong Province is very large， and its industrialized production is developing fast. However， the good-quality and high-yield strains suitable for industrialized production are relatively lacking， and the characteristics of conventional strains degrade seriously. Six Volvaria volvacea strains selected through preliminary test were further compared with corncob as main cultivation substrate. The results showed that strains V1172 and VSD-1 had the characteristics of earlier sporophore forming and high yield， but thinner biofilm and easily opened pileus. The strains V1296 and V1295 had higher yield， good growth vigor， concentrated fruiting period， thick biofilm and good commercial characteristics. The yield of V9715 and V Xuanyu10 were significantly lower than that of the other strains， and V Xuanyu10 had thicker biofilm， which indicated storage stability. By comprehensive analysis， the strains V1296 and V1295 performed optimal， so they were suitable for industrial cultivation and popularization.

Keywords Volvaria volvacea； Strain； Screening； High yield； Commercial characteristics

草菇（Volvariella volvacea）隸属真菌门担子菌纲伞菌目光柄菇科小包脚菇属，又称兰花菇、美味草菇、中国蘑菇。据考证，草菇最早栽培于我国，距今已有200多年历史。近年来，一些欧美国家也开始栽培，我国草菇生产量居世界首位。草菇不仅味道鲜美，而且营养价值很高，含人体必需的8种氨基酸，以及9.81%～18.4%的纤维素；草菇中核酸含量较高，还含有还原糖和转化糖，都是人体的必需营养成分。此外，草菇中还含有一种叫做异种蛋白的物质，可以增强机体的抗癌能力，其含氮浸出物嘌呤碱又能抑制癌细胞的生长。因此，草菇是一种营养丰富的“保健食品”。近几年，国内多家草菇工厂化企业已建成并投入生产，但工厂化配套栽培技术不完善，缺乏工厂化专用菌株。本研究对6个草菇菌株进行栽培，通过对其菌丝体生长阶段和子实体生长阶段进行比较，筛选适宜工厂化栽培的菌株，以期为工厂化草菇栽培提供菌种选择依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试菌种为VSD-1、V选育10、V1172、V9715、V1295、V1296共6个草菇菌株，母种分别由福建农林大学菌物研究中心和山东省农业科学院农业资源与环境研究所提供。

母种培养基：加富PDA培养基；

原种培养基配方：玉米芯83%、麸皮10%、石灰5%、石膏2%；

栽培种培养基配方：玉米芯86%、稻草10%、石灰4%。

1.2 试验方法

试验设6个处理，每处理3次重复，随机区组排列。小区面积10 m2，共18个小区。在（30±2）℃、相对湿度65%～70%的条件下岀菇，由多年种植经验的技术人员进行管理。试验前已对6个草菇菌种进行活化、复壮、扩大培养，使菌龄在同等水平下参加试验。

1.2.1 不同草菇菌株菌丝体阶段比较（1）母种阶段菌丝生长情况比较。按照供试母种培养基配方制备母种培养基，采用培养皿（90 mm×18 mm）分装30 mL培养基，121℃灭菌40 min，冷却后备用，按照常规方法接种、培养，在菌丝生长期间对母种生长情况记录。（2）原种阶段菌丝生长情况比较。干料先混合均匀，再加水调至含水量70%。把配好的料堆成高1.5 m的梯形堆，发酵3 d。按常规方法装瓶（罐头瓶），经0.15 MPa高压灭菌3 h，冷却后，在无菌条件下对6个草菇菌株进行接种，每个菌株接20瓶。菌丝生长期间对原种进行生长情况的调查与记录。endprint

1.2.2 不同草菇菌株子实体阶段比较（1）子实体农艺性状比较。每个处理第一潮菇的子实体采收时，每小区随机选取子实体，用游标卡尺测量子实体菌苞厚度、大小等。（2）子实体产量比较。记录每潮菇产量，岀菇结束后统计每个处理总产量。

1.2.3 草菇菌株基因组的SRAP-PCR 通过对6个草菇菌株基因组的SRAP-PCR检测，清晰了解各品种之间亲缘关系，区分有无同种异名现象，对工厂化生产选择高产菌种起到快捷作用。提取草菇菌株的DNA，用引物（me6、em14）对DNA进行扩增，然后对扩增产物进行电泳检测和分析。

me6：5′-TGAGTCCAAACCGGTAG-3′； em14：5′-GACTGCGTACGAATTCAG-3′。

2 结果与分析

2.1 不同草菇菌株菌丝体阶段比较

2.1.1 母种菌丝生长情况比较由表1可见，在母种培养基上，V1295、V1296、V9715菌絲生长速度较快，分别为15.0、14.9、14.9 mm/d，V选育10菌丝生长速度最慢，为13.1 mm/d； V选育10菌丝颜色为白色、菌丝浓密度为较浓密、边缘整齐度为较整齐，明显不同于其他菌株，其他5个菌株在菌丝颜色、菌丝浓密度、边缘整齐度上基本无差别。

2.1.2 原种阶段菌丝生长情况比较由表2可见，V1172菌丝长速较快，3 d长速为2.3 cm，VSD-1长势最慢，仅1.6 cm，除VSD-1外，其他菌株原种菌丝生长速度差异不显著，但极显著高于VSD-1。V1172、V9715有厚垣孢子形成，其他供试菌株均不产生厚垣孢子。V9715、V选育10菌丝生长浓密，V1296、V1295、V1172菌丝较稀疏。

2.2 不同草菇菌株子实体阶段比较

2.2.1 子实体农艺性状比较由表3可以看出，6个草菇菌株生长方式为丛生，菌苞厚度略有差异，VSD-1、V1172菌苞相对较薄，分别为1.1、1.3 mm，V选育10菌苞最厚，为3.0 mm。6个草菇菌株子实体在形状上略有差异，VSD-1、V1172为锥形，V选育10为球形，V1296、V1295、V9715为椭圆形。VSD-1子实体灰黑色，颜色较深于其他菌株，V1296、V选育10颜色略浅，VSD-1、V1172锥形、菌苞较薄，V选育10球形、菌苞较厚；V1296、V1295、V9715椭圆形、菌苞厚薄中等。

2.2.2 子实体产量比较由表4可以看出，6个草菇菌株现蕾时间和采收时间差异不大。从子实体产量上看，V1172产量最高，VSD-1、V1296、V1295中等，V9715、V选育10较低。从不同草菇菌株岀菇特性上看，VSD-1、V1172子实体菌苞较薄，易开伞；V1296、V1295、V9715子实体菌苞中等；V选育10子实体菌苞较厚，耐运输。

2.3.3 不同草菇菌株基因组的SRAP-PCR图谱比较用一对引物（me6、em14）对6个草菇菌株的基因组进行扩增，扩增产物通过凝胶电泳检测，结果（图1）发现，6个菌株的DNA扩增条带有10条，分子量分别为2 500、1 800、1 400、1 000、850、500、450、300、200、100 bp。

其中V1295、V1296、V1172的DNA扩增条带有分子量1 800、1 400、1 000、850、500、450、200、100 bp的条带；V9715有分子量2 500、1 800、1 400、1 000、850、500、450、200、100 bp的特异性扩增条带；VSD-1的DNA扩增条带有分子量450、300、100 bp的条带；V选育10有分子量450、200、100 bp的特异性扩增条带。根据每个菌株扩增条带数目及分子量的大小可看出V1295、V1296、V1172亲缘关系较近；V9715比V1295、V1296、V1172多一条2 500 bp的特异性条带；VSD-1和V选育10都无大分子条带。凝胶图像在一定程度上也可以反应草菇样品的地理来源，V1295、V1296、V1172、V9715为南方菌株，扩增条带明显与其他两个菌株不同。

3 结论

在菌丝体阶段，母种菌丝V1295生长速度最快；V1296、V9715没有差异，生长速度为较快；V选育10菌丝生长速度最慢，但菌丝长势较好，菌丝白色、较浓密、边缘较整齐。原种菌丝V1172生长速度最快，V1295、V1296生长速度较快，VSD-1菌丝生长速度最慢，V选育10菌丝生长势最好。

在子实体阶段，VSD-1子实体灰黑色，V1296、V选育10子实体颜色略浅，其他菌株差异不显著。VSD-1、V1172子实体锥形，V选育10子实体球形，V1296、V1295、V9715均为椭圆形。V1172、VSD-1子实体菌苞较薄，易开伞，V选育10子实体菌苞最厚，耐储存、耐运输。V1296、V1295、V9715子实体菌苞厚薄中等。

子实体产量最高的为V1172，其次为VSD-1、V1296、V1295，子实体产量较低的为V9715、V选育10。

6个草菇菌株基因组扩增条带表明，V1295、V1296、V1172亲缘关系较近，VSD-1和V选育10扩增条带明显与其他菌株不同。草菇在一定程度上出现了地理分化，在不同地理环境下出现遗传差异。

工厂化栽培的草菇品种很多，选择适宜工厂化栽培的草菇品种主要包括高产、抗病性、商品性等方面，其中商品性包括子实体大小、颜色、菇形、是否易开伞等。本研究4月份通过初筛获得适宜工厂化栽培6个草菇菌株，综合本次试验结果，V1295、V1296两个菌株在商品性等方面优于其他品种，适宜工厂化栽培，有成为高产优质菌株的潜力。

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