梨盘多毛孢褐斑病菌生物学特性及药剂毒力测定

赵 杰，戴富明

（1上海市浦东新区农业技术推广中心，上海 201201；2上海市农业科学院生态环境保护研究所，上海 201403）

梨盘多毛孢褐斑病菌生物学特性及药剂毒力测定

赵 杰1，戴富明2

（1上海市浦东新区农业技术推广中心，上海 201201；2上海市农业科学院生态环境保护研究所，上海 201403）

为了研究梨盘多毛孢褐斑病菌的生物学特性和筛选防治该病原菌的杀菌剂，采用生长速率法和产孢量的测定来研究梨盘多毛孢褐斑病菌的生物学特性。结果表明：PDA和PSA培养基最适宜菌落生长，葡萄糖蛋白胨琼脂培养基产孢量最多；菌丝生长的适宜温度范围为5—30℃，最适温度25℃；培养基pH 4左右，菌丝产孢量最多；病原菌致死温度为54℃；全暗和全光有利于菌落生长，全光条件下产孢量最大。碳源测定的试验显示：淀粉和葡萄糖最适宜菌丝生长，果糖最适宜产孢。氮源试验表明：氮源中以酵母膏、蛋白胨和牛肉膏最适宜菌丝生长，蛋白胨最适宜产孢。12种杀菌剂的毒力测定结果表明：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌灵、咪鲜胺锰盐的毒力较强，是比较理想的防治药剂。以上结果为试验条件下高效培养梨盘多毛孢褐斑病菌奠定了基础，为生产上防治该病害提供了理论依据。

梨盘多毛孢褐斑病菌；生物学特性；产孢量；杀菌剂；毒力测定

鲜梨是我国主要果品之一，也是浦东新区的优势特色产业，其中“翠冠”梨因果形大、外观好、风味佳，深受广大市民喜爱，市场销售情况常供不应求，亩产值达8 900元人民币（大众水果中仅次于葡萄）。2013—2015年，作者在多个梨园梨树叶片上发现由斑污拟盘多毛孢引起的梨盘多毛孢褐斑病，叶片发病率在5%—10%，严重的可达40%以上，该病害可侵染梨、茶、柿、山茶、木兰、乌饭树等［1-2］。虽然有关拟盘多毛孢属的分类［3］、新种［4-10］和防治［11-12］有不少研究报道，也有学者开展了该属拟盘多毛孢菌生物学特性的研究［11，13］，但只有陈玉森等［14］对寄主茶树上的斑污拟盘多毛孢菌丝适宜温度和pH进行了研究。由于不同地区、不同寄主和栽培条件下，病菌特性往往存在明显差异，因此，对当地梨盘多毛孢褐斑病菌即梨斑污拟盘多毛孢的症状、生物学特性进行了观测，旨在寻找通过环境条件控制病害发生的途径，并筛选防治该病害的理想药剂。

1 材料与方法

1.1 供试病原菌

梨盘多毛孢褐斑病菌（Pestalotia guepini Desm.）从浦东新区梨树采集病叶，经室内组织分离、纯化［15］，病原菌于PDA培养基上培养5 d用于试验。

1.2 供试药剂

30%吡唑醚菌酯悬浮剂（深圳诺普信农化股份有限公司）、43%戊唑醇悬浮剂（发事达南通化工有限公司）、50%异菌脲悬浮剂（拜耳作物科学中国有限公司）、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂（江苏辉丰农化股份有限公司）、10%苯醚甲环唑水分散粒剂（江苏丰登农药有限公司）、80%代森锰锌可湿性粉剂（江苏省农垦生物化学有限公司）、45%咪鲜胺乳油（以色列马克西姆化学公司）、50%多菌灵悬浮剂（江苏龙灯化学有限公司）、25%丙环唑乳油（深圳诺普信农化股份有限公司）、5%己唑醇悬浮剂（陕西上格之路生物科学有限公司）、12.5%烯唑醇可湿性粉剂（江苏辉丰农化股份有限公司）、40%百菌清悬浮剂（汕头市宏光化工有限公司）。

1.3 生物学特性观测

1.3.1 不同培养基对菌落生长和产孢量的影响

将梨盘多毛孢褐斑病菌于20%植物煎汁（梨树叶片、枝条和未成熟果实）培养基、PDA、PSA、葡萄糖蛋白胨琼脂、淀粉琼脂、酵母浸膏和麦芽糖琼脂等9种培养基上25℃培养5 d后测量菌落直径，第7天测产孢量［16-18］。

1.3.2 温度和pH对菌落生长和产孢量的影响［18］

将直径为1 cm的病原菌菌丝块接种到PDA平板中央，分别于5—40℃下培养5 d后测量菌落直径。

用乳酸和NaOH配制pH为3—10的PDA培养基，于平板中央接种直径为1 cm的病原菌菌丝块，25℃培养5 d后测量菌落直径，第7天测产孢量。

1.3.3 病菌致死温度的测定

取直径为1 cm的菌落于不同温度的试管中处理10 min，然后接种到PDA平板中央，于25℃培养5 d，观察菌丝生长情况。

1.3.4 光照对菌落生长和产孢量的影响

将直径1 cm的菌丝块接种到PDA平板中央，25℃下分别于连续光照、连续黑暗、12 h光照12 h黑暗交替下培养5 d后测量菌落直径，第7天测定产孢量。

1.3.5 不同碳、氮源对菌落生长和产孢量的影响

采用真菌生理培养基［18］，以KNO3为氮源，测定葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖和淀粉等碳源对菌落生长的影响，25℃培养5 d测量菌落直径，第7天测产孢量；以蔗糖为碳源，测定硝酸钾、硫酸铵、氯化铵、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨和尿素等氮源对菌落生长的影响，25℃培养5 d测量菌落直径，第7天测定产孢量。

1.4 杀菌剂的毒力测定

采用生长速率法进行测定［18］：根据试验情况，配置5个浓度的含药PDA培养基，将直径为1 cm的菌丝块放在含药培养基中央，25℃培养5 d，测量菌落直径、计算抑制率、以药剂有效成分的浓度为测试浓度计算回归方程和抑制中浓度EC50。

2 结果与分析

2.1 病害症状及病原菌培养性状观察

梨盘多毛孢褐斑病菌主要侵染梨树上部叶片，尤以顶部叶片受害最重，病斑近圆形或不规则形，初为红褐色斑点，随着病情发展，中央呈黑色，边缘红褐色。在PDA上培养初期，菌落呈白色，随着菌落生长，菌落出现波状隆起的同心轮纹，在菌落表面产生黑色的分生孢子盘，培养基背面黄色，培养基内可见轮纹状排列的黑色分生孢子盘。分生孢子纺锤形，直或略弯曲，多为5细胞，中间3色胞橄榄色或略有深浅，顶胞和尾胞无色或接近无色，顶胞具附属丝1—3根，多为3根，尾胞具1根或无附属丝（图1）。

图1 梨盘多毛孢褐斑病叶片症状、PDA培养基上的菌落和分生孢子Fig.1 Leaf sym ptom s caused by P.guepini and colonies and conidia on PDA medium

2.2 不同培养基对菌落生长和产孢量的影响

梨盘多毛孢褐斑病菌在PDA和PSA培养基上生长最好，培养5 d后的直径在7 cm以上；7 d后的产孢量以葡萄糖蛋白胨琼脂培养基最多，为6.667×106个/皿。选用的梨树叶片、枝条和未成熟果实3个植物煎汁培养基中以梨果煎汁培养基菌落直径和产孢量较高，表明梨果含有有利于病菌生长和产孢的营养物质（表1）。

表1 梨盘多毛孢褐斑病菌在不同培养基上菌落生长和产孢情况Table1 Colony grow th and spore output of P.guepini on differentmedia

2.3 温度和pH对菌落生长和产孢量的影响

梨盘多毛孢褐斑病菌在温度为5—30℃均能生长，其中以25℃最为适宜，直径为7.36 cm，在40℃时不能生长，甚至菌丝出现衰亡。菌落在pH 3—10均能正常生长，且都有孢子产生，其中菌落生长以pH 4最为适宜，菌落直径8.50 cm；产孢量以pH 4—6酸性环境较大，超过1.000×106个/皿，其余pH环境下产孢量差异不大，可见病菌较适应于偏酸性环境（表2）。

表2 温度和pH对梨盘多毛孢褐斑病菌菌落生长和产孢量的影响Table 2 Effects of temperature and pH on colony grow th and spore output of P.guepini

2.4 病菌致死温度

将菌落在40—52℃的水浴中处理10 min，于PDA平板上培养7 d后均能形成新生菌丝，而54℃以上不能生长，因此，病菌的致死温度为54℃，时间为10 min。

2.5 光照对菌落生长和产孢量的影响

病原菌全暗或全光等稳定条件下菌落生长较快，光暗交替不利于菌落生长；产孢量以全光条件下最大，为7.350×106个/皿，其次为全暗和光暗交替条件。由此可见，全光不仅有利于菌落生长，还能促进孢子形成（表3）。

表3 光照条件对梨盘多毛孢褐斑病菌菌落生长和产孢量的影响Table 3 Effects of light on colony grow th and spore output of P.guepini

2.6 不同碳、氮源对菌落生长和产孢量的影响

菌落生长较适宜的碳源为淀粉和葡萄糖，菌落直径分别为5.74 cm和5.53 cm，最不适宜的为果糖；产孢量最适宜的碳源为果糖，为1.300×106个/皿（表4）。

菌落生长最适宜的氮源为酵母膏、蛋白胨和牛肉膏等有机氮源，菌落直径在6 cm左右，最不适宜的是尿素和硫酸铵；最适宜产孢的氮源为蛋白胨，产孢量为1.100×106个/皿，其次为酵母膏、牛肉膏和硫酸铵，氯化铵最不适宜产孢（表5）。

表4 碳源对梨盘多毛孢褐斑病菌菌落生长和产孢量的影响Table 4 Effects of carbon sources on colony grow th and spore output of P.guepini

表5 氮源对梨盘多毛孢褐斑病菌菌落生长和产孢量的影响Table 5 Effects of nitrogen sources on colony grow th and spore output of P.guepini

2.7 杀菌剂对病原菌的毒力测定

选用12种杀菌剂对梨盘多毛孢褐斑病菌进行毒力试验，结果显示：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌灵和咪鲜胺锰盐的EC50明显小于1 mg/L，毒力较高，可能为生产上理想的防治药剂。丙环唑、苯醚甲环唑、异菌脲、戊唑醇、咪鲜胺，EC50小于10 mg/L；烯唑醇、代森锰锌、百菌清毒力相对较低（表6）。

表6 12种杀菌剂对梨盘多毛孢褐斑病菌的毒力Table 6 Test for toxicities of 12 fungicides to P.guepini

3 结论与讨论

通过田间观察、实验室分离和培养，明确了梨盘多毛孢褐斑病在叶片上的为害症状、PDA上的菌落性状，为田间诊断提供了参考。目前只发现该病菌为害叶片，但病菌在梨叶、梨枝和梨果煎汁培养基上都能正常生长，且以梨果培养基生长最好且产孢量最多，表明该病菌极有可能侵染果实；在其余供试的6种培养基上，菌落在PDA培养基上生长最好，与碳源试验中葡萄糖较适宜菌落生长的结果一致；产孢量以葡萄糖蛋白胨琼脂培养基最多，与氮源试验中蛋白胨最适宜产孢的结果相同。

该菌在5—30℃、pH 3—10的条件下均能生长，而且产孢量以pH 4—6酸性环境较大，表明病菌对环境条件适应能力强，尤其适宜温暖和偏酸性的条件。陈玉森等［14］研究表明，梨盘多毛孢褐斑病菌菌丝生长适宜pH为7.5，与本研究pH 4—6存在一定差异，可能与病菌长期生存的环境有关。

杀菌剂的毒力测定结果表明：吡唑醚菌酯、己唑醇、多菌灵、咪鲜胺锰盐、丙环唑的毒力较高；任海英等［12］防治由异色拟盘多毛孢和小孢拟盘多毛孢引起的杨梅凋萎病试验发现，吡唑醚菌酯、苯醚甲环唑、咪鲜胺、丙环唑防效较好，与本研究中的结果相似，表明同一药剂对同属病菌可能具有相同的效果，但由于药效受寄主和环境的多重影响，因此还需通过田间试验进一步研究。

秋季气温适宜，多阴雨有利于梨盘多毛孢褐斑病的发生；梨果采收后，未及时施用采后肥、管理粗放，发病加重。沟系畅通，科学施肥，合理修剪，改善梨园土壤环境，能有效控制发病，说明改变环境和科学种植是控制病害的重要途径，因此除了使用药剂控制病害，关键还要注重栽培管理，综合防治该病害。

［1］方中达.中国农业植物病害［M］.北京：农业出版社，1996：358.

［2］葛起新，陈育新，徐同.中国真菌志第三十八卷拟盘多毛孢属［M］.北京：科学出版社，2009：127-129.

［3］韦继光，徐同，郭良栋，等.根据形态学和分子系统学特征界定拟盘多毛孢属的种［J］.广西农业生物科学，2005，24（4）：304-313.

［4］朱培良，葛起新，徐同.中国拟盘多毛抱属真菌的七个新组合［J］.真菌学报，1991，10（4）：273-274.

［5］陈育新，韦刚.中国拟盘多毛孢属的新组合种（I）［J］.广西农业大学学报1993，12（1）：23-35.

［6］韦刚，陈育新.中国拟盘多毛孢属的新组合种（Ⅱ）［J］.广西农业大学学报，1994，13（2）：115-128.

［7］陈育新，韦刚.中国拟盘多毛孢属的新组合种（Ⅲ）［J］.广西农业大学学报，1997，16（1）：1-9.

［8］王忠文，陈卫平，韦刚，等.中国拟盘多毛孢属的新组合种（Ⅳ）［J］.广西农业生物科学，2002，21（3）：151-156.

［9］陈育新，韦刚，陈卫平，等.中国拟盘多毛孢属的三个新种［J］.广西农业生物科学，2003，22（1）：1-4.

［10］王忠文，廖咏梅，陈卫平，等.中国拟盘多毛孢属的新组合种（Ⅴ）［J］.广西农业生物科学，2006，25（2）：163-166.

［11］杨秀娟，陈福如，何玉仙.枇杷拟盘多毛孢菌的生物学特性及杀菌剂的药效研究［J］.福建农业学报，2003，18（2）：89-92.

［12］任海英，戚行江，陈安良，等.十种杀菌剂对杨梅凋萎病的药效评价［J］.果树学报，2013，30（5）：848-853.

［13］窦彦霞，瞿付娟，于晓东，等.枇杷花腐病病原生物学特性研究［J］.中国南方果树，2009，38（1）：47-50.

［14］陈玉森，刘伟，叶乃兴，等.茶轮斑病菌与灰斑病菌的特性比较及致病观察［J］.茶业科学，2009，2（6）：449-455.

［15］方中达.植病研究方法［M］.北京：农业出版社，1979：116.

［16］杨焕青，王开运，范昆，等.草莓枯萎病菌的生物学特性及7种杀菌剂对其抑制作用［J］.植物保护学报，2008，35（2）：169-174.

［17］顾振芳，叶黎红，代光辉，等.芦笋茎枯病菌的生物学特性及其药剂评估［J］.上海交通大学学报（农业科学版），2003，21（增刊）：23-28.

［18］黄玉人，赵杰，唐赵莲，等.水稻恶苗病菌的生物学特性研究［J］.上海农业学报，2014，30（3）：102-105.

The biological characteristics of Pestalotia guepini Desm.and toxicity test of fungicides to it

ZHAO Jie1，DAIFu-ming2

（1Pudong New District Agro-Technology Extension Center，Shanghai201201，China；2Institute of Eco-Environment Protection，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai201403，China）

In order to study biological characteristics of P.guepini Desm.and select fungicides against the pathogen，both colony growth and spore production were tested.The results indicated that both PDA and PSA media were themost suitable for the colony growth and there was themaximum spore output on dextrose peptone agarmedium.The suitable temperature for themycelial growth was5—30℃and the optimum was25℃.At pH 4 or so the spore outputwas themaximum.The lethal temperature of the pathogen was 54℃.Full dark or full lightwas favorable for the colony growth and under full light the spore output was the maximum.The tests for carbon sources indicated that amylum and dextrose were favorable for themycelial growth，and fructose was the most favorable for the spore production.The tests for nitrogen sources indicated that yeast extract，peptone and beef extractwere favorable for themycelial growth，and peptone was themost favorable for the spore production.The toxicity tests of 12 fungicides to P.guepini showed that pyraclostrobin，hexaconazole，carbendazim，prochloraz-manganese chloride complex had a higher toxicity and were ideal fungicides.The above results laid a foundation for efficiently culturing P.guepini under experimental conditions and controlling the disease caused by P.guepini in production.

Pestalotia guepini Desm.；Biological characteristic；Spore output；Fungicide；Toxicity test

2016-07-06

上海市浦东新区科技发展基金项目“梨树病虫害防控技术集成与示范”（PKJ2016-N02）

赵杰（1979—），男，硕士，高级农艺师，主要从事果实栽培与病虫害防治。E-mail：zhaocaoyou＠163.com，Tel：021-58388032

S436.612

A

1000-3924（2017）06-033-05

程智强）