细胞源H5亚型禽流感病毒灭活疫苗免疫效果试验

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(1.浙江大学，浙江 杭州 310058；2.浙江省动物疫病预防控制中心； 3.杭州市萧山区畜牧兽医局)

试验研究

细胞源H5亚型禽流感病毒灭活疫苗免疫效果试验

吴贇竑1,2，吴雪军2，陈星宇3，张红丽2

(1.浙江大学，浙江 杭州 310058；2.浙江省动物疫病预防控制中心； 3.杭州市萧山区畜牧兽医局)

为探索细胞悬浮培养法生产H5亚型禽流感灭活疫苗的应用效果，试验选用10日龄四明香鸡100羽，随机分为A组与B组，每组50羽，分别采用由细胞悬浮培养法工艺生产和传统鸡胚繁殖工艺生产的H5亚型禽流感疫苗免疫鸡群，并于首免前、首免后28 d、60 d、90 d抽取血样对鸡群开展禽流感免疫抗体水平监测。结果表明，使用两种疫苗均能诱导产生较高的HI抗体水平，达到防控禽流感的目的。

H5N1；禽流感；疫苗；免疫效果

禽流感是由正粘病毒科流感病毒属的A型流感病毒引起的以禽类为主的一种高度接触性传染病。H5N1亚型禽流感病毒及其变异株是高致病性禽流感的典型代表。近年来爆发的H5亚型禽流感疫情不仅给养禽业带来巨大经济损失，同时也严重威胁到公共卫生安全。世界动物卫生组织(OIE)将高致病性禽流感列为必须报告的传染病，我国将其列为一类动物疫病。针对国内H5亚型禽流感病毒，我国主要采取疫苗免疫联合扑杀感染家禽的综合防制措施，并已取得理想效果[1]。

目前，鸡胚培养是国内疫苗生产企业生产动物用流感病毒疫苗的主要工艺手段。细胞悬浮培养是一种比较新型的流感疫苗培养技术[2]。为了解细胞培养工艺生产禽流感疫苗的免疫效果，笔者选取细胞悬浮培养法工艺和传统鸡胚繁殖法工艺生产的H5亚型禽流感疫苗分别免疫鸡群，通过定期检测鸡群免疫抗体效价，比较其抗体水平及合格率，以利为防疫疫苗的选择提供参考数据。

1 材料与方法

1.1试验动物 试验在宁波余姚某规模鸡场进行，随机选择10日龄四明香鸡100羽，均分为A、B两组，每组50羽。采用网上平养，专人负责。

1.2供试疫苗 重组禽流感病毒(H5N1亚型)二价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株)，A组试验鸡采用细胞悬浮培养工艺生产的A疫苗，B组试验鸡采用传统鸡胚繁殖工艺生产的B疫苗。

1.3试验试剂 禽流感H5(Re-6株)HI抗原(批号2015036)，禽流感H5(Re-7株)HI抗原(批号2015017)，由哈尔滨维科生物技术开发公司生产。鸡红细胞采自本中心饲养的3羽SPF公鸡血液，经离心洗涤后制备1%鸡红细胞悬液。

1.4免疫程序 参考疫苗说明，鸡群14日龄首免，每羽0.3 mL；30日二免，每羽0.5 mL；110日龄三免，每羽0.5 mL；颈部皮下注射。于免疫前(14日龄)、首免后28 d(42日龄)、60 d(74日龄)、90 d(104日龄)抽取血样，分离血清，-36℃保存备检。

1.5抗体检测 根据国家标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)中血凝和血凝抑制方法检测，计算平均抗体效价及抗体离散度。

1.6判定标准 以4log2为标准统计鸡群抗体合格率。抗体效价≥4log2判定为合格，抗体效价<4log2判定为不合格。

2 结果与分析

试验结果详见表1。从抗体效价看，两组雏鸡在14日龄免疫前均存在一定的母源抗体，Re-6平均效价大于4，Re-7平均效价大于3。随着两次疫苗免疫，鸡群免疫抗体效价迅速升高，并在74日龄以后达到基本稳定。对比A、B两组抗体效价数据，A组抗体效价略高于B组(详见图1)。

从抗体效价合格率看，两组雏鸡在免疫前合格率均较低(Re-6 74%、Re-7 30%～38%)。42日龄后均接近或等于100%，证明两种疫苗免疫原性较好，均能刺激鸡体产生合格的HI抗体(详见图1)。

离散度体现的是群体内个体间抗体效价的差异程度。从表1的离散度数据看，两组雏鸡在免疫前离散度较大，而免疫后的几次检测中A组数据离散度明显小于B组。

表1 H5N1禽流感疫苗鸡群免疫试验结果表

图1 H5N1禽流感疫苗抗体评价滴度消长规律图

3 小结与讨论

据试验结果看，14日龄鸡群母源抗体水平较低，离散度较高，存在一定的疫病感染风险。14日龄首免的免疫程序能较好保护鸡群，首免后3-4周进行二免，可使鸡体HI抗体滴度达到高峰。

从免疫效果看，A、B两种疫苗均能诱导鸡体产生良好的免疫应答，使鸡群建立较好的免疫保护力。相较于B疫苗，使用A疫苗免疫鸡群，HI抗体水平更高，抗体离散度更低，免疫效果更好。

目前，我国动物用流感病毒疫苗的生产大多采用传统的鸡胚繁殖病毒，这种传统生产工艺存在着生产周期长，劳动强度大，鸡胚用量大、残存鸡胚蛋白影响疫苗质量等弊端。此外，还可能存在一定的生物安全风险。细胞悬浮培养作为一种新的疫苗生产工艺，生产的禽流感疫苗与传统方法相比具有生产周期短，病毒滴度高，疫苗质量更容易控制等优点[3]。本试验采用的细胞源H5N1流感疫苗，其效果略优于鸡胚源H5N1疫苗，建议可在临床中使用。但禽流感疫苗的免疫效果受养殖场地、饲养环境、疾病感染、饲料营养、饲养密度、应激等多种因素影响[4-5]。因此，在养鸡生产中，应该根据各场具体情况选用适合本场的禽流感疫苗。

[1] 陈全姣，金梅林，陈焕春. 禽流感疫苗研究进展[J]. 中国生物工程杂志，2004，24 (4)：34-38.

[2] 吕宏亮，付秀花，郑明. 传代细胞制备流感病毒疫苗工艺研究进展[J]. 中国兽药杂志，2009 ，43 (6)：43-48.

[3] 乔春晓，何召庆. 流感疫苗生产用MDCK细胞悬浮培养技术研究进展[J]. 兽医导刊，2015 (15)：47-48.

[4] 邬恩荣，李莎，何大勇，等. 振宁黄鸡在不同饲养条件下禽流感疫苗免疫效果的比较研究[J]. 浙江畜牧兽医，2013，38 (1)：142-142.

[5] 谭铁兵，王勇，何建强，等. 不同饲养条件下家禽H5亚型禽流感灭活油乳剂疫苗免疫效果的监测[J]. 养禽与禽病防治，2007 (9)：8-9.

2017-09-12

S858.3

A

1005-7307(2017)06-0001-002