宫颈癌组织PCNA 、Ki-67的表达及其与HPV感染的相关性研究

赵建芳 石 芳

宫颈癌组织PCNA 、Ki-67的表达及其与HPV感染的相关性研究

赵建芳 石 芳

目的探讨宫颈癌增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67表达及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法

随机选取72例宫颈病变患者作为观察组，并以同期40例慢性宫颈炎患者作为对照组，分别应用免疫组织化学S-P法和聚合酶链反应法检测患者宫颈组织HPV感染情况。结果CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组中PCNA和Ki-67阳性率、强阳性或过表达检出率均高于对照组(P<0.05)，且CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组PCNA和Ki-67阳性率、强阳性或过表达检出率均高于CINⅠ组(P<0.05)。PCNA表达强度与Ki-67表达强度呈正相关关系(γ=0.713，P<0.05)，且PCNA表达强度和Ki-67表达强度与HPV感染均呈正相关关系(γ=0.701,0.684，P<0.05)。结论PCNA、Ki-67和HPV感染在不同宫颈病变中的表达均存在较大差异，临床联合检测这3个指标，可以提高宫颈病变的诊断率，值得进一步推广和应用。

宫颈癌；增殖细胞核抗原；Ki-67；人乳头瘤病毒

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌，且逐渐趋于年轻化，严重危害女性的身体健康及生命安全。研究表明，人乳头瘤病毒(HPV)感染是诱发宫颈病变的主要病因[1]。增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67是与细胞增殖相关的核抗原，是近年来广泛应用的细胞增生标记物[2]。其中，PCNA是真核细胞DNA合成所必需的1种酸性核蛋白，在细胞增殖过程中可以直接参与DNA的复制，因此对PCNA进行检测主要可了解DNA合成情况，可作为肿瘤细胞增殖活性的客观指标[3]；Ki-67为增殖细胞核相关抗原，易通过免疫组化方法进行检测，是反映细胞增殖状态的理想标记物[4]。本次选取近年来我院收治的72例行手术治疗的宫颈癌患者作为研究对象，并与同期40例慢性宫颈炎患者的PCNA、Ki-67表达及其与HPV的感染情况进行对比分析，以期为宫颈癌的临床诊断提供可靠参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象与分组

随机选取我院72例宫颈病变患者作为观察组，收治时间为2010年8月至2016年8月，均行子宫切除术或宫颈锥切术，年龄26～75岁，其中宫颈癌40例，均为高分化鳞癌，Ⅰ期18例，Ⅱa期22例；宫颈上皮内瘤变(CIN)32例，CIN Ⅰ期16例，CIN Ⅱ期7例，CIN Ⅲ期9例。对照组为同期40例慢性宫颈炎患者。宫颈癌、CIN及慢性宫颈炎患者的纳入标准[5-6]：①知情并接受本次研究；②经组织病理学检查确诊，宫颈癌、CIN患者术前活检确诊为CIN及以上病变，慢性宫颈炎患者经术前组织活检排除宫颈癌前病变；③适合行子宫切除或宫颈锥切术；④术前未进行放疗、化疗；⑤未合并急性妇科炎症等其他合并症。

1.2 方法

检测病变组织的PCNA、Ki-67抗原表达均采用免疫组织化学S-P法，应用HPV通用引物MY09/11行聚合酶链式反应(PCR)检测病变组织中的HPV感染情况。试剂材料主要有：小鼠抗人单克隆PCNA抗体、兔抗人单克隆Ki-67抗体、S-P 通用型试剂盒(均购于福州迈新生物技术开发公司)，DAB显色试剂盒(北京中山生物技术有限公司)，PCR反应试剂盒(上海生工生物工程公司)。组织标本以10% 福尔马林溶液固定，并用石蜡包埋切片，阳性对照为已知阳性鳞癌组织切片，阴性对照由PBS代替一抗。

1.3 结果判断

阅片均采用盲法，由2～3名经验丰富的病理科医生独立进行，相差范围若>10%则重新判断。PCNA、Ki-67阳性为细胞核内出现棕黄色颗粒。结果判断采用半定量法，分为4个级别：阳性细胞占肿瘤细胞比例<10%为“-”，10%～25%为“+”，26%～50%为“++”，>50%为“+++”；++～+++为强阳性或过表达。

1.4 统计学分析

应用SPSS 13.0统计软件，计数数据以(n，%)表示，显著性检验经卡方分析或Fisher 确切概率法，等级相关性分析用Spearman相关分析。检验水准取0.05。

2 结果

2.1 宫颈组织中PCNA、Ki-67阳性率比较

从表1中可以看出，CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组织中PCNA、Ki-67阳性率均高于对照组，且差异具有统计学意义(P<0.05)，且CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组织中PCNA、Ki-67阳性率均高于CINⅠ组(P<0.05)。

表1 各宫颈组织中PCNA、Ki-67阳性率比较/例

注：①表示与对照组相比较，P<0.05；②表示与CINⅠ组相比较，P<0.05。

2.2 各宫颈组织中PCNA、Ki-67强阳性或过表达检出率比较

从表2中可以看出，CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组PCNA、Ki-67检出率均高于对照组(P<0.05)，且CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组PCNA、Ki-67检出率均高于CINⅠ组(P<0.05)。通过相关分析发现，PCNA表达强度与Ki-67表达强度呈正相关关系(γ=0.713，P<0.05)。

2.3 PCNA、Ki-67各组与HPV感染相关性分析

72例宫颈病变和40例慢性宫颈炎患者PCR检测结果显示：HPV阳性64例，HPV阴性48例。经过Spearman分析，PCNA、Ki-67表达强度与HPV感染均呈正相关关系(γ分别为0.701、0.684，P<0.05)，见表3。

表2 各组PCNA、Ki-67强阳性或过表达检出率比较(例,%)

注：①表示与对照组相比较，P<0.05；②表示与CINⅠ组相比较，P<0.05。

表3 HPV阳性、阴性患者PCNA、Ki-67表达情况/例

3 讨论

宫颈癌的发生与发展是1个渐变的过程，宫颈上皮内瘤变(CIN)是宫颈癌的癌前病变，其在发病过程中的重要阶段。宫颈上皮细胞转化为恶性肿瘤细胞时表现为过度增殖和异常分化，必然伴有增殖活性改变，所以评价与细胞增殖相关的标志物的表达水平对宫颈癌和CIN的临床诊断具有重要意义。

PCNA和Ki-67均是存在于细胞增殖期的蛋白质，是目前最常用的肿瘤增殖标记物。有研究表明，PCNA具有协调转换细胞周期阻滞、修复损伤DNA的功能[7]，它能够确切反映细胞增殖的活跃程度，只在正常组织的增殖部位表达，且在细胞周期的不同阶段表达有所不同。Ki-67主要表达在增殖细胞的细胞核中，在静止期细胞不表达，因此不仅能够用于判断肿瘤的良、恶性及恶性程度，而且还能用于评价细胞增殖的活性、细胞周期与肿瘤生长、浸润、复发和转移等生物学行为与预后的关系[8]。苗龙等[9]通过对胃癌患者肿瘤组织中PCNA和Ki-67的表达进行检测和分析，认为二者随着患者病情的加重强阳性表达显著增多，且阳性表达的范围逐渐增大。董永学等[10]采用免疫组织化学S-P法对宫颈病变组织标本PCNA、Ki-67的表达进行检测和分析，认为CIN组织的PCNA、Ki-67表达阳性率高于正常宫颈炎组织，宫颈癌组织的PCNA、Ki-67均存在强阳性或过表达。本次研究结果显示，不同分期CIN、宫颈癌肿瘤组织的PCNA、Ki-67表达水平不同，且二者的表达阳性率均高于慢性宫颈炎肿瘤组织，与上述文献报道结论基本一致。此外，CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌的PCNA、Ki-67阳性率均高于CINⅠ组，PCNA、Ki-67强阳性或过表达用于预测CINⅡ、CINⅢ期病变均具有较高的灵敏度，因此可将PCNA、Ki-67用于对CIN的临床筛查与预测。

报道显示[11]，HPV感染与宫颈癌的发生具有密切的关系，其在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中的表达存在统计学意义。目前，宫颈癌的病因及发病机制尚不十分明显，而HPV被认为是宫颈癌的最主要的影响因素，尤其是高危型HPV在宫颈癌的筛查和预后中具有重要作用[12]。本次研究结果显示，宫颈组织中PCNA表达强度与Ki-67表达强度呈正相关，且二者的表达强度与HPV感染也呈正相关性，说明了HPV感染与PCNA、Ki-67表达均呈正相关性，因此在检测HPV感染时，可以联合PCNA、Ki-67等相关指标，有助于提高检测的特异性和灵敏度。综上所述，PCNA、Ki-67和HPV感染在不同宫颈病变中的表达均存在较大差异，临床中联合检测这三个指标，可以提高宫颈病变的诊断率，值得进一步推广和应用。

[1] 吴英娟.宫颈癌组织中 HMGB-1,PCNA 的表达变化及临床意义〔J〕.山东医药,2015,55(23):21-23.

[2] 雷 蕾,叶 斌,王西川.p16,p53 和 Ki67 在宫颈癌中的表达及其临床意义〔J〕.实用医院临床杂志,2014,11(4):123-125.

[3] 徐韶杰,董稚明.PCNA 在宫颈鳞癌组织中的表达及意义〔J〕.中国妇产科临床杂志,2011,12(2):134-136.

[4] 李 幔.PCNA,Ki67 及 p27 在子宫内膜腺癌中表达的临床意义及相关性研究〔D〕.郑州大学,2012.

[5] 齐朝阳,陈 艳,曾 鸿,等.宫颈上皮内肿瘤 P16,P53,Ki67,P63 的表达与 HPV 感染及其临床意义〔J〕.实用医学杂志,2011,27(20):3638-3640.

[6] 余爱平.TRKB,BDNF 和 PCNA 在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中的表达及其临床意义〔D〕.武汉科技大学,2011.

[7] 陈廷玉,卢春凤,苗 智,等.宫颈癌 PCNA 和 PTEN 的表达与癌细胞增殖及淋巴结转移的关系〔J〕.解剖学研究,2010,32 (1):17-20.

[8] 何慧仪,卢丽娜,杜 洪,等.Ki67,Survivin,P16 表达在宫颈癌和宫颈癌前病变诊断中的意义〔J〕.中国妇幼保健,2006,21(13):1825-1827.

[9] 苗 龙,黄晓俊.Ki67 和 PCNA 在胃癌中的表达及其临床诊断价值〔J〕.临床内科杂志,2011,28(2):95-98.

[10] 董永学.宫颈病变 PCNA,Ki-67 表达检测及其与 HPV 感染相关性研究〔J〕.国际检验医学杂志,2015,36(21):3083-3085.

[11] 魏 聪,刘远程,王友强,等.宫颈病变中 PCNA,Ki-67 的表达及其与 HPV 感染的相关性分析〔J〕.中国妇幼保健,2015,30(22):3873-3876.

[12] 赵 义,杨义军,涂海健.宫颈病变中 PCNA,Ki-67 的表达及其与高危型 HPV 感染的相关性分析〔J〕.海南医学院学报,2015,21(4):523-526.

ExpressionofPCNAandKi-67inCervicalCancerandtheCorrelationwithHPVInfection

ZHAOJianfang,SHIFang.

Yan’anTCMHospital,Yan’an,716000

ObjectiveTo investigate the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Ki-67 in cervical carcinoma and the correlation with human papilloma virus (HPV) infection.Methods72 cases of cervical lesions patients were selected as the observation group.And 40 cases of chronic cervicitis in the same period as the control group.The HPV infection of cervical cancer were detected by immunohistochemistry S-P method and polymerase chain reaction.ResultsThe positive rates and the strong positive or over expression detection rate of Ki-67 and PCNA in CINⅠ group,CINⅡ group,CINⅢ group and the cervical cancer group were higher than those of the control group(P<0.05).And the positive rates and the strong positive or over expression detection rate of Ki-67 and PCNA in CINⅡ group,CINⅢ group and the cervical cancer group were higher than those of CINⅠ group (P<0.05).The expression intensity of PCNA was positively correlated with the intensity of Ki-67 expression,and the correlation coefficient was 0.713(P<0.05).The expression intensity of PCNA and Ki-67 were positively correlated with HPV infection,and the correlation coefficients respectively were 0.701,0.684(P<0.05).ConclusionThe expression of PCNA,Ki-67 and HPV in different cervical lesions are significantly different.Combined detection of these 3 indicators can improve the diagnosis rate of cervical lesions.It is worthy of further popularization and application.

Cervical cancer;Proliferating cell nuclear antigen(PCNA);Ki-67;Human papilloma virus( HPV)

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1774～1776)

716000 陕西省延安市中医医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.010

R737.33

A

1001-5930(2017)11-1774-03

2016-10-07

2017-04-20)

(编辑：吴小红)