mTORC1相关蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的表达及其与预后的相关性

赵 涛 乐 静 李传静 刘爱林

mTORC1相关蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的表达及其与预后的相关性

赵 涛 乐 静 李传静 刘爱林

目的探讨mTORC1相关蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的表达与预后之间的相关性。方法纳入75例胃肠胰神经内分泌肿瘤的患者，采用免疫组织化学方法检测mTORC1相关蛋白的表达水平，通过病理学分级、临床分期分析mTORC1相关蛋白在不同分层患者中的表达情况，采用Cox回归分析及log-rank检验分析预后与mTORC1相关蛋白表达的相关性。结果mTOR1相关蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤中阴性表达率远高于阳性率；病理学分级恶性程度高的标本mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin的阴性率高，临床分期进展程度高的标本中，mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin的阴性率高。Cox回归分析及log-rank检验分析mTORC1相关蛋白表达阴性是预后不良的独立影响因素。结论mTORC1相关蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的低表达与病理学分级、临床分期差、预后不良具有一定的相关性。

mTORC1；胃肠胰神经内分泌肿瘤；预后；表达；相关性

胃肠胰神经内分泌肿瘤是一组以临床表现到疾病预后均存在着较大差异的恶性肿瘤，表现为低度恶性、缓慢生长及高侵袭性等一系列生物行为学表现[1]，发病率为2.5/10万。mTOR通路是近年来被发现的与细胞的增殖、血管发生、肿瘤发展具有重要相关性的蛋白，目前关于该通路的mTOR1相关蛋白对胃肠胰神经内分泌肿瘤的预后影响研究较少。本研究通过对胃肠胰神经内分泌肿瘤的临床分期、病理分型等参数和mTOR1相关蛋白与患者预后之间的关系进行分析，探寻mTOR1相关蛋白是否可以作为潜在的靶点蛋白，以求为患者预后的判断提供依据。

1 材料与方法

1.1 病例收集

收集我院2010年1月1日至2013年12月31日在我院胃肠胰神经内分泌肿瘤根治术的75例患者资料。所有胃肠胰神经内分泌肿瘤组织标本来源于石蜡包块(包括10例癌旁组织蜡块)，经2位不同的病理医生确诊为胃肠胰神经内分泌肿瘤[2]。胃肠胰神经内分泌肿瘤的病理学分级采用2004年WHO的分级[3]，分别为NEC：核分裂象>20/10HPF和(或)Ki-67增殖指数>20%；NETG1：核分裂象<2/10HPF和(或)Ki-67增殖指数≤2%；NETG2：核分裂象2/10HPF～20/10HPF和(或)Ki-67增殖指数3%～20%。根据诊断原发肿瘤时的B超、X线射片、CT、MR等辅助检查，以及综合术后病理结果确定胃肠胰神经内分泌肿瘤的TNM临床分期。患者诊断为胃肠胰神经内分泌肿瘤的平均年龄为(52.94±14.85)岁。病例随访中，最短的随访14个月，最长的58个月，中位随访时间为45个月。

1.2 免疫组织化学

采用经典免疫组化方法。mTOR1相关蛋白(mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin)染色极少数在细胞核中也有染色，阳性以细胞质为主。综合染色强度及阳性细胞百分率进行评分，每张切片观察5个400倍镜下视野。阳性细胞计分：0分(视野内无阳性细胞)，1分(视野内阳性细胞<25%)，2分(视野内阳性细胞25%～50%)，3分(视野内阳性细胞>50%)；染色强度计分：0分(阴性)，1分(弱阳性)，2分(中等阳性)，3分(强阳性)。两项分数相加>2分者为阳性，0～2分者计为表达阴性。

1.3 统计学方法

本研究统计学数据采用SPSS 18.0进行统计分析，精确概率法、卡方检验对计数资料进行分析，log-rank检验了解生存曲线的差异，Kaplan-Meier法估计生存率，多因素的生存分析采用Cox回归检验，数据分析以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 胃肠胰神经内分泌肿瘤组织中mTOR1相关蛋白表达

在收集的75例胃肠胰神经内分泌肿瘤组织中，mTOR1相关蛋白表达呈阳性与表达为阴性的细胞数比较，差异有统计学意义(P<0.05)。分析胃肠胰神经内分泌肿瘤患者病例中mTOR1相关蛋白表达，发现mTOR1相关蛋白表达在患者年龄、性别等方面无统计学差异(P>0.05)，见表1。

表1 胃肠胰神经内分泌肿瘤组织中mTOR1相关蛋白表达异常/例

注：※为与阳性比较，差异具有统计学意义，P<0.05。

2.2 胃肠胰神经内分泌肿瘤组织中mTOR1相关蛋白的表达与临床标本的病理学分级及临床分期的相关性

mTOR1相关蛋白在高级别(低分化)中阴性率最高；低级别(中分化)胃肠胰神经内分泌肿瘤组织中mTOR1相关蛋白的阴性率次之；低度恶性倾向(高分化)阴性率最低，组间差异有统计学意义(P<0.05)，mTOR1相关蛋白的阴性率与胃肠胰神经内分泌肿瘤的浸润程度相关，从NET期到NEC期依次降低，组间差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3 生存分析

75例胃肠胰神经内分泌肿瘤病例中，分别对mTOR1蛋白表达情况进行生存分析，阳性、阴性平均生存时间分别为86.5和62.0个月，统计学分析2组差异具有统计学意义(P<0.001)。见图1。

3 讨论

神经内分泌肿瘤可发生于全身的各个器官中，在病理学及临床症状上具有共同的特点，但是对于肿瘤类型、发生部位等仍有不同的生物学行为的差异，与激素产物的形成有关，也被归为功能性肿瘤[4-6]。胃肠胰腺是神经内分泌肿瘤最好发的部位，是一种复杂的异质性肿瘤，该类肿瘤生长迅速，但是肿瘤呈现生长缓慢，且临床症状不明显等特点，部分肿瘤分泌激素并表现出与激素高分泌相关症状，由于该病的发病率不高，因此研究相对较少[7]。

表2 胃肠胰神经内分泌肿瘤mTOR1相关蛋白的表达与临床标本的病理学分级情况/例

图1 mTOR1蛋白表达与胃肠胰神经内分泌肿瘤患者生存率的相关性

虽然临床病理学、WHO分级等参数可以协助预测肿瘤的恶性程度及预后情况，但是对于这一神经内分泌肿瘤，只采用病理学参数很难良好地预测该此类肿瘤的生物学行为，对于肿瘤日后的复发及转移等预后情况并未得到良好的预测作用[8-9]。因此我们为此需寻找更为敏感的生物学蛋白标记物以探讨肿瘤生物学行为，试图筛选出能够成为治疗靶点的药物。

已有关于神经内分泌肿瘤的研究相关的通路包括mTOR通路，研究发现该类肿瘤的发生与mTOR通路活化有一定的相关性，不同分级及病理分型的肿瘤患者的预后差异性较大[10]，因此对该通路重要蛋白的研究，有助于更好地预测疾病的转归及治疗[11-12]。因此本研究重点放在mTOR通路的mTOR1相关蛋白上。mTOR的活化及低表达在多种肿瘤上均得到了证实，上调具有抑制凋亡，促进肿瘤生长及血管发生的作用，因此低表达延长了肿瘤的生存时间，导致预后较差。在本研究中，我们通过对75例胃肠胰神经内分泌肿瘤组织免疫组化染色分析，mTOR1相关蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的阴性表达要远高于阳性表达，差异具有统计学意义。结果表明mTOR1相关蛋白表达下调与胃肠胰神经内分泌肿瘤的发生可能有密切的关系。

目前国内外研究显示，mTOR1相关蛋白可能具有维持细胞分化能力或促进细胞分化。研究发现mTOR1相关蛋白在鳞癌干细胞样细胞中低表达，能够抑制肿瘤细胞的增殖和转移[13-15]。上述这些研究结果充分说明，mTOR1相关蛋白与肿瘤的增殖、转移、干细胞样特性密切相关。恶性肿瘤中病理学分级往往代表肿瘤恶性的侵袭程度，也代表细胞的分化程度，低分化的恶性程度高，高分化的癌细胞恶性程度相对较低。本研究发现mTOR1相关蛋白的表达在不同病理学分级的胃肠胰神经内分泌肿瘤细胞中阳性率存在差异。另外，本研究分析了mTOR1相关蛋白的表达与胃肠胰神经内分泌肿瘤的临床分期的关系，发现临床分期越高，mTOR1相关蛋白阳性率越低，胃肠胰神经内分泌肿瘤早期，mTOR1相关蛋白阳性率最高。通过log-rank检验和Cox回归分析发现，mTOR1相关蛋白阳性表达的患者的预后明显优于于mTOR1相关蛋白表达阴性的患者。mTOR1相关蛋白的表达是影响胃肠胰神经内分泌肿瘤患者预后一种独立影响因素，mTOR1相关蛋白的表达下调与胃肠胰神经内分泌肿瘤的恶性程度及预后相关。

本研究未收集mTOR1相关蛋白的表达对胃肠胰神经内分泌肿瘤术后辅助治疗对预后的影响，因此我们将在之后的研究中进一步扩大样本量，详细收集胃肠胰神经内分泌肿瘤术后辅助药物治疗对胃肠胰神经内分泌肿瘤预后的影响，分析mTOR1相关蛋白的表达在药物治疗效果的差异性和耐药性中的作用。综上所述，mTOR1相关蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤的发生发展中扮演重要的角色，mTOR1相关蛋白可能成为胃肠胰神经内分泌肿瘤的治疗的新靶点，对胃肠胰神经内分泌肿瘤诊断及预后有重要的价值。

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ExpressionandPrognosticResearchmTORC1-relatedProteinintheGastrointestinalandPancreaticNeuroendocrineTumors

ZHAOTao,LEJing,LIChuanjing,etal.

XiaoganAffiliatedHospitalofWuhanUniversityofScienceandTechnology,Xiaogan，432000

ObjectiveTo investigate the correlation between mTORC1-related protein and prognosis in gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors.Methods75 cases of gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors were selected,immunohistochemical methods was used to detect mTORC1-related protein expression,patients with normal and cancerous tissues beside compared by pathological grade,clinical stage analysis mTORC1-related protein stratification in patients with different expression,using Cox regression analysis and log-rank test to analyze the correlation with prognosis mTORC1 related proteins.ResultsmTOR1 related proteins in the gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors was much higher than the negative expression of the positive expression,the difference was statistically significant (P<0.001);high-grade malignant pathology specimens mTOR1,Bcl-2,TSC2,negative rate PS6,SSR2,β-catenin,the high degree of progression of clinical stage samples,mTOR1,Bcl-2,TSC2,PS6,SSR2,negative rate of β-catenin,Cox regression analysis and log-rank test analysis independent factors of mTORC1 negative expression was associated with poor prognosis.ConclusionLow expression of mTORC1-related protein in gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors is related with pathological grade,poor clinical staging and poor prognosis.

mTORC1;Gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors;Prognosis;Expression;Correlation

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:,1752～1755)

432000 武汉科技大学附属孝感医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.004

R736

A

1001-5930(2017)11-1752-04

2016-10-09

2017-04-04)

(编辑：甘艳)