MicroRNA- 124在急性脑梗死患者血清中表达的研究

保玉莲 朱榆红 鲍天昊 李 勤

1)个旧市人民医院神经内科，云南 个旧 661000 2)昆明医科大学第二附属医院神经内科，云南 昆明 650101

·论著科研之窗·

MicroRNA- 124在急性脑梗死患者血清中表达的研究

保玉莲1)朱榆红2)△鲍天昊2)李 勤1)

1)个旧市人民医院神经内科，云南 个旧 661000 2)昆明医科大学第二附属医院神经内科，云南 昆明 650101

目的探讨microRNA- 124在急性脑梗死患者血清中的表达，并分析其与急性脑梗死相关临床因素的关系。方法收集同时期住院的急性脑梗死患者及健康体检者各30份血清标本，测定microRNA- 124相对表达量，比较2组间microRNA- 124表达量的变化，同时进行急性脑梗死患者相关临床资料研究，探讨microRNA- 124与急性脑梗死相关临床因素的关系。结果与正常体检者相比，microRNA- 124在急性脑梗死患者血清中的表达升高(P<0.05)，其表达量与梗死面积、发病时间有关(P<0.05)，而与性别、年龄、高血压史、空腹静脉全血葡萄糖水平(FPG)、低密度脂蛋白水平(LDL- C)、既往脑血管病史、MRA提示颅内动脉狭窄等因素无明显相关性(P>0.05)。结论microRNA- 124在急性脑梗死患者血清中的表达量较正常人升高，梗死面积越大，表达量越高，在发病24～72 h较发病72 h以后表达升高。

microRNA- 124；表达量；急性脑梗死；血清；临床因素

随着社会经济发展与我国人口老年化的到来，脑血管病目前已成为我国人口致残和死亡的首位原因，且发病率有逐年升高的趋势。缺血性脑血管病(脑梗死)占脑血管病的60%～80%，其高致残率、高病死率给社会和家庭带来了沉重的负担。目前对脑梗死的诊断仅限于临床表现及头颅影像学检查，尚无敏感的生化指标能提示脑梗死的发生、发展及预后，使脑梗死在微观世界里缺乏客观有效的评价指标。2008年以来，多项[1- 3]研究均表明，血清、血浆及其他体液中存在着稳定的microRNA，这就为microRNA作为某一疾病的生物学标记物进行检测提供了可能。本文通过对急性脑梗死患者血清microRNA- 124表达量的测定，探讨microRNA- 124在急性脑梗死患者体内的变化及意义。

1 资料与方法

1．1一般资料

1．1．1 研究对象：选取个旧市人民神经内科及ICU 2013- 05—08住院的急性脑梗死(发病7 d内)患者30例，男17例，女13例，年龄42～84岁，平均64.73岁。全部病例均经过病史及头颅CT或MRI检查确诊，并排除短暂性脑缺血发作(TIA)，同时排除免疫性、感染性及血液系统等疾病因素所致者。

1．1．2 对照组：选取同时期在个旧市人民医院进行健康体检的正常人30例，男16例，女14例，年龄40～80岁，平均59.57岁。全部对照均通过询问病史、体格检查及相关检查排除新发脑梗死、高血压、糖尿病、肿瘤及血液系统等疾病。2组间性别和年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1．2研究方法

1．2．1 血清标本留取及保存：取观察组及对照组晨起空腹静脉血4～5 mL，静置1 h后离心取上层血清，置于环氧乙烷消毒过的冷冻管中，标记后于-80 ℃冰箱保存备用。

1．2．2 microRNA- 124表达量测定：按相关试剂盒操作步骤分别进行miRNA提取、cDNA制备、实时荧光定量PCR。以U6 SnRNA作为内参照(U6- F：CTCGCTTCGGCAGCACA，U6- R：AACGCTTCA- CGAATTTGCGT)。PCR仪自动给出样本扩增曲线及溶解曲线、CT值，每份标本重复PCR试验3次，取平均值。目的miRNA的Ct值减去U6的CT值作为△Ct值。目的miRNA的相对表达量采用相对于U6的2-△△Ct表示[4]。

2 结果

2．1 2组间血清miRNA- 124相对表达量比较2组间miRNA- 124相对表达量有差异，观察组大于对照组(P≤0.05)。见表1。

表1 血清miRNA- 124的相对表达量

2.2急性脑梗死患者血清miRNA- 124相对表达量与临床因素相关性分析收集30例急性脑梗死患者的临床资料进行分析整理，包括性别、年龄、抽血时间(指从发病至抽血间隔时间)、梗死面积(腔隙性、多发性、大面积)、高血压史、空腹静脉全血葡萄糖水平(FPG)、低密度脂蛋白水平(LDL- C)、既往脑血管病史、MRA提示颅内动脉狭窄(包括单支或多支)等因素，急性脑梗死患者血清中miRNA- 124相对表达量与梗死面积及发病时间有关，大面积脑梗死中表达量最高，多发性脑梗死中次之，腔隙性梗死中表达量最少。发病24～72 h内表达较发病72 h以后要高。miRNA- 124表达量与性别、年龄、高血压史、空腹血浆葡萄糖水平、低密度脂蛋白水平、既往脑血管病史、MRA提示颅内动脉狭窄等因素无明显相关性。见表3。

3 讨论

脑梗死是我国中老年人群的常见病、多发病，近年来呈逐渐上升和低龄化趋势，农村地区也日益突出。目前对脑梗死的诊断仅限于临床表现及头颅影像学检查，尚无敏感的生化指标能提示脑梗死的发生、发展及预后，使脑梗死在微观世界里缺乏客观有效的评价指标。MicroRNA (miRNA) 是一组由动物、植物和病毒基因所编码的长19～25个核苷酸的小分子单链RNA，它们参与了机体的各种重要生理和病理活动，人类约有1/3基因编码的mRNA受到miRNA的负调控[5]。miRNA不仅参与了细胞的分化、生长、增值及凋亡过程[6]，而且还在一些疾病的发生、发展过程中起着重要的调控作用[7]。目前所涉及的miRNA与疾病相关性研究领域主要集中在肿瘤方面，而miRNA与脑血管病的相关性研究近年来才刚刚起步，主要探讨的是与缺血性脑血管病的关系[8]。早已有研究表明，不同miRNA在脑组织中表达的丰度不同，而miRNA- 124为脑组织中表达最丰富的miRNA[9- 10]，2014年Zhu等[11]研究小组已对miRNA- 124与脑缺血/再灌注损伤进行过相关报道，故本研究选取miRNA- 124为研究对象，可以更真实、更特异地反映miRNA的变化与脑梗死之间的关系。

本研究中对比30例急性脑梗死及30例健康体检者血清中miRNA- 124的相对表达量，脑梗死组血清miRNA- 124的表达较正常组升高，梗死面积越大，血清miRNA- 124的表达越高。考虑原本正常存在于脑组织中高表达的miRNA- 124，在急性脑梗死发生后，脑细胞出现缺血、缺氧、水肿、坏死，miRNA- 124大量释放入血，从而导致血清中miRNA- 124表达升高，这与林洋等[12]在对大鼠研究中的结果是一致的。同时亦可以解释梗死面积越大，释放入血的量越大，故血清中表达量越高。另外，Weng等[13]研究小组发现，miRNA- 124在脑缺血6 h后即开始升高，一直持续到48 h以后。林洋等[12]亦通过研究显示，在发生缺血性卒中后，大鼠血浆中miRNA- 124 a的表达在8 h后开始显著升高，24 h达到高峰，约为卒中前的18倍，随后48 h又逐渐降低，而缺血脑组织区的miRNA- 124表达水平在卒中后24 h较对照组显著降低，为对照组脑组织中含量的12%～20%。

表2 急性脑梗死患者血清中miRNA- 124的相对表达与各临床因素之间的关系

注：*F=5.534，P=0.005；**F=12.402，P=0.000

本文中亦有部分结果与上述研究相似。本研究提示，患者血清miRNA- 124的表达与发病时间有一定相关性。发病时间24～48 h及48～72 h 2组患者较发病>72 h患者的表达量升高，即发病24～72 h较发病72 h以后表达升高，这与上述在鼠类研究中所得结论，缺血24～48 h血浆中miRNA- 124表达升高相一致。因临床上患者对疾病认识不够，大部分患者不能在发病后及时入院，大多数病例均在发病1 d以上获得血清标本，故本研究中对于发病6 h、8 h等短期检测不多。

若能探清急性脑梗死患者血清中miRNA表达谱的动态变化，与发病类型、发病时间及病变面积、其他临床因素的相关性，就有可能为急性脑梗死设定特异性的血清生物学标记物，从而提高脑梗死的诊断、分型、预后判断的可靠性，为进一步研究脑梗死后miRNA在脑细胞的一系列病理生理变化中的作用机制奠定基础，并有可能为脑梗死的预防和治疗提供新的作用靶点，为脑梗死的防治提供可靠依据。

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AstudyofmicroRNA- 124expressioninbloodserumofacutecerebralinfarctionpatients

BAOYulian*，ZHUYuhong，BAOTianhao，LIQin

*DepartmentofNeurology，theGejiuPeople’sHospital，Gejiu661000，China

ObjectiveTo investigate microRNA- 124 expression in the serum of acute cerebral infarction patient，and analyze the relationship between the expression and associated clinical factors．MethodsCollect 30 serum specimen of acute cerebral infarction patients and healthy check- up at the same time in the hospital．Detect microRNA- 124 relative expression in serum．Compare the microRNA- 124 expression variation between the two groups，and analyze clinical data of acute cerebral infarction patients．Investigate the relationship between microRNA- 124 and the clinical factors related to acute cerebral infarction．ResultsCompared with the regular check- up，the acute cerebral infarction patients serum microRNA- 124 expression upregulate(P<0.05)．The expression is associated with infarction area and onset time(P<0.05)．Meanwhile，there are no obvious correlation between serum microRNA- 124 expression and other factors in acute cerebral infarction patients，such as gender，age，history of high blood pressure，fasting venous blood glucose (FPG)，low density lipoprotein levels (LDL- C)，cerebrovascular disease history，MRA hint of intracranial artery stenosis (P>0.05)．ConclusionThe serum microRNA- 124 expression in acute cerebral infarction patients is higher than healthy people．The greater infarction area，the higher expression．There is a higher expression in the 24- 72 hours than after 72 hours onset．

MicroRNA- 124；Expression；Acute cerebral infarction；Serum；Clinical factor

10.3969/j.issn.1673- 5110.2017.20.004

国家自然科学基金项目(编号：81060102)；云南省科技计划项目[编号：2017FE467(-152)]

△通信作者：朱榆红，女，教授，医学博士，博士生导师。研究方向：脑血管疾病。Email：yuhong_lilin@yahoo．com．cn

R743.33

A

1673- 5110(2017)20- 0016- 04

(收稿2017- 06- 13)

王喜梅