藏药材勒哲的质量标准研究△

2017-12-22东知多杰多杰拉旦赛桑杰马志良尼玛才让何长廷才增卓玛

中国民族医药杂志 2017年6期

关键词：粉末药材供试

东知多杰多杰拉旦赛桑杰马志良尼玛才让何长廷才增卓玛

(1.青海省藏医药研究院，青海西宁 810016；2.藏药研发国家重点实验室，青海西宁 810016)

项目名称：悬钩木等三种常用藏药材的质量标准研究项目编号：2015-ZJ-910

藏药材勒哲的质量标准研究△

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(1.青海省藏医药研究院，青海西宁 810016；2.藏药研发国家重点实验室，青海西宁 810016)

目的：建立藏药材勒哲质量标准。方法采集不同产地的10批药材进行采用基源考证、以勒哲药材为对照组，建立本品的显微鉴别和薄层色谱鉴别、含量测定方法。结论该方法简便、可行、操作性强。

藏药；鉴别；含量测定

本品为防己科植物勒哲(中华青牛胆)Tinospora sinensis (Lour.)Merr.的干燥茎，生长于青海、西藏、云南、广东、广西；分布于锡金、印度、斯里兰卡和中南半岛北部。该药材味甘、苦、涩、辛。具有治风热，除时疫热，效缓，能调和和合紊乱，治衰老病，风湿病等常用药材。勒哲始载于8世纪藏医学经典著作《四部医典》。续而《蓝琉璃》、《晶珠本草》等藏医经典著作以及其它医学专著均予收载，沿用至今[1-2]。本文对藏药材勒哲进行化学成分分析、活性成分研究，建立藏药材勒哲的鉴别方法和含量测定方法，为提高勒哲质量标准提供科学的依据[3]。

1 仪器、试剂及材料

1.1 仪器：显微镜(型号：BX51日本奥林巴斯)；电子天平(型号：AE200瑞士梅特勒)；电热恒温干燥箱(型号：GZX—DH．500—BS—Ⅱ 上海跃进医疗器械厂)；双槽薄层展开缸(规格100×100mm)；三用紫外分析仪(型号：ZF—2上海市安亭电子仪器厂)；数控超声波清洗器(型号：KQ—500D昆山市超声波仪器厂)；OLYMPUS FSX100倒置显微镜。

1.2 试剂：乙醇(AR)、环己烷(AR)、乙酸乙酯(AR)、甲酸、涂层厚度0.20～0.25mm，规格100×100mm，青岛海洋化工厂分厂，批号：2014年6月12日；点样毛细管(直径0.3mm，长100mm)、苯(AR)、古伦宾为对照品(中国药品生物制品检定院)、石油醚(60-90℃) (AR)、冰乙酸(AR)、硫酸(AR)、香草醛等。试验用水均为纯化水，符合《分析实验室用水规格和试验方法》(GB/T6682—2008)及《中国药典》2015年版二部纯化水的要求。水合氯醛试液。

1.3 材料：通过实地调查目前市场，收集来自不同地方的10批勒哲药材，经基源鉴定为防己科中华青牛胆Tinospora sinensis(Lour.)Merr.以藤茎入药。见表1。

表1 勒哲药材收集情况

2 显微鉴别

选取具有代表性的勒哲原植物样本，对其粉末(过80目筛)进行了制片观察，记录了相关特征。对比分析了它们的典型共有特征，特别是粉末中规则结晶物的特征，并通过2015版《中国药典》中粉末鉴别常见结晶物的鉴别反应确定了勒哲药材粉末结晶物的种类[3]。

该药材粉末呈浅黄色。木栓细胞类方形或类长方形，黄棕色。草酸钙簇晶较多，棱角圆钝或棱角稍尖，大小不等。木纤维成束或单个散在，韧皮纤维较粗，具网纹导管。

结果见图1。

3 薄层色谱鉴别[4]

取勒哲药材粉末1.0g，加甲醇20 mL，超声60min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，取滤液作为供试品溶液。另取古伦宾对照品，加甲醇制成每1 mL各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各2μl，分布点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨(10:9:6:1)为展开剂，置避光处展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。结果见图2。

4 含量测定[5-7]

4.1 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以含0.1%磷酸水溶液为流动相B，以乙腈-0.1%磷酸水溶液=20：80等度洗脱；检测波长：210 nm；理论塔板数按古伦宾计算应不低于5000。结果见图3。

4.2 溶液配置

4.2.1 对照品溶液的制备：精密称取对照品古伦宾5.0mg，用乙腈溶于100 mL量瓶中，加乙腈定容至刻度，摇匀，得古伦宾0.05mg/ mL的对照品储备液。

4.2.2 供试品溶液的制备：取勒哲药材粉末0.500g药材粉末0.500g于100 mL具塞三角瓶中，加甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声40min，放凉后，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

4.3 含量测定方法学考察

4.3.1 标准曲线：精密吸取古伦宾0.05mg/ mL的对照品溶液，等倍稀释为原溶液浓度的1、1/2、1/4、1/8、1/16倍，按照上述色谱条件测定各色谱峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，古伦宾含量为横坐标，进行线性回归，得到回归曲线。

古伦宾回归曲线方程及相关系数：Y = 137509x - 2549，r=0.9996；测定结果表明，古伦宾在3.13～50μg/ mL范围内呈良好的线性关系。

4.3.2 方法的准确性：对已测定指标成分古伦宾含量的样品，即样品LZ-1中古伦宾含量为0.19mg/g；分别精密称取9份样品，每份样品约称量0.5g，分别加入约0.5、1.0和2.0倍指标成分总量的对照品，按照样品溶液制备方法和优化的色谱条件分析，计算指标成分的3种加入量的回收率。从古伦宾加样回收率表格可以看出，本研究所建立的含量测定方法有较好的准确度。数据见表2。

表2 古伦宾加样回收试验结果

4.3.3 仪器精密度：精密吸取含古伦宾0.05mg/ mL的对照品溶液5μL，重复进样6次，记录峰面积，计算RSD值，结果见表3。结果表明，在该条件下，峰面积的仪器精密度良好。

表3 含量测定方法峰面积精密度实验数据

4.3.4 重复性：精密称取同一批样品(LZ-1)6份，每份约0.500g，依照5.2项下供试品处理方法进行处理制成待测溶液，进样，测定各指标成分含量并计算6份样品各指标成分含量的RSD %值，从表4的数据可以看出本论文建立的定量检测方法的重复性对古伦宾同一批6个样品的含量的RSD%都在3.0%以下，显示了较好的重复性。结果见表4。

表4 样品中指标成分检测方法的重复性试验数据

4.3.5 稳定性：取同一批供试品溶液，按含量测定法分别在0，4，8，12，24 h进样，测定样品中古伦宾成分的含量。计算RSD为1.42%。实验表明，供试品溶液24h内稳定性良好。

4.3.6 检出限：根据药典委员会“中药分析方法验证指导原则实施细则”中检测限研究的信噪比法进行了古伦宾指标成分检测限的研究。即：先进1针空白溶剂，测出噪音，进已知浓度的对照品，根据其对应的峰高值，将对照品溶液稀释至约3倍信噪比的浓度，该浓度即为检测限。结果表明，古伦宾的检出限为0.6μg/ mL。

4.3.7 定量限：根据药典委员会“中药分析方法验证指导原则实施细则”中定量限研究的信噪比法进行了古伦宾指标成分检测限的研究。即：先进1针空白溶剂，测出噪音，进已知浓度的对照品，根据其对应的峰高值，将对照品溶液稀释至约10倍信噪比的浓度，重复进样6次，计算峰面积的RSD值，此浓度即为定量限。结果表明古伦宾的定量限为2.0μg/ mL。