Six1、E-cad在结肠癌中的表达及意义

王静苗，贾喜花

（1.承德医学院，河北承德　067000；2.保定市第一中心医院）

Six1、E-cad在结肠癌中的表达及意义

王静苗1，贾喜花2△

（1.承德医学院，河北承德067000；2.保定市第一中心医院）

目的:探讨结肠癌组织同源盒蛋白1（Six1）和E-钙黏蛋白（E-cad）的表达和临床意义。方法：采用SP免疫组化法检测70例结肠癌组织和30例癌旁正常组织Six1、E-cad的表达情况， 并分析二者与结肠癌临床病理特征的关系及结肠癌组织Six1、E-cad表达的相关性。结果：结肠癌组织Six1的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P＜0.01），E-cad的阳性表达率明显低于癌旁正常组织（P＜0.01）。结肠癌组织Six1、E-cad表达与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关（P＞0.05）；与TNM分期和浸润深度有关（P＜0.05）。结肠癌组织Six1、E-cad表达呈负相关关系（r=-0.480，P＜0.01）。结论：Six1、E-cad可能共同参与了结肠癌的发生发展过程，且二者的表达情况与结肠癌患者的不良预后密切相关。

Six1；E-cad；结肠癌

随着人们生活水平的提高，结肠癌的发病率逐渐升高，成为我国重点防治的肿瘤之一。有研究显示，影响结肠癌患者治疗效果和不良预后的关键因素之一就是癌转移，从分子水平探索结肠癌的发生、转移机制，是提高结肠癌患者生存质量的有效途径[1]。研究发现，上皮间质细胞转化（EMT）与肿瘤的侵袭转移密切相关[2]。同源盒蛋白1（Six1）已被证实是一类能促进细胞发生EMT的转录调控因子，可诱发细胞恶性转化、增殖并出现侵袭性，导致肿瘤的发生发展， 目前已成为肿瘤学领域的研究热点[3]。E-钙黏蛋白（E-cad） 是一类主要介导同质细胞间黏附的跨膜糖蛋白，参与形成和维持正常的细胞间连接[4]。研究表明，E-cad表达下降或抑制可开启EMT，并导致肿瘤的侵袭、转移，故E-cad下调是EMT的显著性特征[5]。本研究旨在观察Six1、E-cad在结肠癌中的表达情况及二者的相关性，探讨二者在结肠癌转移过程中的作用及临床意义。

1　材料与方法

1.1标本收集2014年1月-2016年3月保定市第一中心医院外科手术切除并经病理学检查证实的原发性结肠腺癌标本70例，患者术前均未行放疗、化疗及生物靶向治疗等，所有患者均有完整的临床病理资料。其中男31例，女39例；年龄25-86岁，中位年龄61岁；病理学分级：高分化25例，中分化29例，低分化16例；按2010年美国联合癌症分类委员会（AJCC）和国际抗癌联盟（UICC）修订的TNM病理分期：Ⅰ-Ⅱ期30例，Ⅲ-Ⅳ期40例。另选择同期30例癌旁正常大肠组织标本（距肿瘤边缘＞5cm）作为对照。

1.2试剂兔抗人Six1抗体，美国Sigma公司；兔抗人E-cad抗体，北京中杉金桥生物技术有限公司；通用免疫组织化学SP试剂盒、DAB显色试剂，福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3免疫组化染色及结果判定应用免疫组织化学染色SP二步法，Six1（1∶100）阳性染色呈棕黄色颗粒，主要位于细胞浆；E-cad（1∶100）阳性染色呈棕黄色颗粒，主要位于细胞膜。 切片在双盲情况下由两名病理科医师观察评价结果。①每例每个指标随机观察5个高倍视野（×400），计数阳性细胞数占细胞总数的百分比：阳性细胞率为0、＜10%、10%-50%、＞50%，分别计0、1、2、3分。②染色强度：无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色，分别计0、1、2、3分。根据①×②判定最终结果：0-2分为（-），3-9分为（+）。

1.4统计分析采用SPSS 19.0软件进行统计分析，计数资料采用卡方检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1Six1、E-cad的表达情况结肠癌组织Six1的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，E-cad的阳性表达率明显低于癌旁正常组织（P＜0.01）。见表1：

表1　结肠癌和癌旁正常组织Six1、E-cad的表达情况

2.2Six1、E-cad表达与结肠癌临床病理特征的关系结肠癌组织Six1、E-cad表达与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关（P＞0.05）；与TNM分期和浸润深度有关（P＜0.05）：与TNM分期Ⅰ-Ⅱ期和浸润深度T1、T2比较，TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、浸润深度T3、T4 Six1表达明显升高，E-cad表达明显降低。见表2：

表2　Six1、E-cad表达与结肠癌临床病理特征的关系

2.3结肠癌组织Six1、E-cad表达的相关性结肠癌组织Six1、E-cad表达呈负相关关系（P＜0.01）。见表3：

表3　结肠癌组织Six1、E-cad表达的相关性

3　讨论

目前，EMT与肿瘤转移之间的关系已成为研究的热点。EMT是指具有极性的上皮细胞在特定的病理和生理情况下转化为具有迁移能力的间质细胞的现象[6]。近期研究发现，肿瘤细胞经历EMT后获得运动能力是侵袭邻近组织和发生转移的前提[7]。目前，已有报道提示EMT现象在结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤中均有发生，可通过提高肿瘤细胞的侵袭性，加快肿瘤细胞远处转移，加速肿瘤的进展[8]。

Six1作为一种转录调控因子，在细胞增殖、分化、粘附、迁移、肿瘤发生发展的过程中起关键作用[8]。目前研究显示，Sixl与宫颈癌[9]、乳腺癌[10]等肿瘤的转移、预后相关。本研究发现，结肠癌组织Six1的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，并且结肠癌组织Six1表达与TNM分期和浸润深度有关，说明Six1阳性表达与结肠癌的恶性程度和疾病进展密切相关。有文献报道，Six1作为EMT的转录调控因子，通过调控其下游靶基因的表达，使得E-cad表达下降，诱导EMT发生，促进肿瘤的发生发展，提示Six1与E-cad之间在功能上可能存在相关性[11]。

E-cad是一类主要介导同质细胞间黏附的跨膜糖蛋白，具有细胞与细胞粘附、通讯的作用[12]。E-cad表达的缺失可使细胞之间极性丢失、黏附能力下降，表现出非上皮细胞的特性，在上皮细胞发生EMT过程中常出现E-cad表达的下调，成为EMT现象最重要的标志性变化[13]。本研究发现，结肠癌组织E-cad的阳性表达率明显低于癌旁正常组织、结肠癌组织E-cad表达与TNM分期和浸润深度有关，且结肠癌组织Six1、E-cad表达呈负相关关系，提示Six1、E-cad可能共同参与了结肠癌的发生发展。

综上所述，在结肠癌浸润和转移的过程中Six1、E-cad可能存在相互作用，提示联合检测这两种蛋白可能对判断结肠癌的恶性程度和预后具有一定的临床价值，同时可为结肠癌的临床治疗提供新靶点。

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EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF SIX1 AND E-CAD IN COLON CANCER

WANG Jing-miao, JIA Xi-hua
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To investigate the expression and clinical significance of Six1 and E-cad in colon cancer. Methods: SP immunohistochemical method was used to detect Six1 and E-cad expression in 70 cases of colon cancer and 30 cases ofadjacent normal tissue; and the correlations between Six1, E-cad and the clinical pathological characteristics of colon cancer were also analyzed. Results: The positive expression rate of Six1 in colon cancer was obviously higher than adjacent normal tissue, but the positive expression rate of E-cad was obviously lower (P＜0.01). The Six1 and E-cad expression in colon cancer was not related to sex, age, size of tumour and differentiation degree (P＞0.05); But related to TNM stage and inf iltration depth (P＜0.05). The expression of Six1 in colon cancer was negative correlated to E-cad expression (r=-0.480, P＜0.01). Conclusions: E-cad and Six1 maybe involved in development of colon cancer together; Moreover, E-cad and Six1 expression is closely related to poor prognosis of colon cancer.

Six1; E-cad; Colon cancer

R735.3

A

1004-6879（2017）01-0003-03

（2016-06-13）