双氯芬酸钠含量的HPLC测定法

王留国，赵喜莲，田 靖，刘学威

(天方药业有限公司，河南 驻马店 463000)

双氯芬酸钠含量的HPLC测定法

王留国，赵喜莲，田 靖，刘学威

(天方药业有限公司，河南 驻马店 463000)

目的 建立HPLC法测定双氯芬酸钠原料的含量。方法 色谱柱：C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-4%冰醋酸溶液(70：30)；检测波长276nm；柱温：30℃。结果 双氯芬酸钠在20～300μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999)，最小检出量为0.19μg，平均回收率为98.66%，RSD为0.87%。结论 本方法简便、快速、准确、灵敏度高、专属性好、重复性好，可用于双氯芬酸钠原料的含量测定。

双氯芬酸钠；高效液相色谱法；含量测定

目前，双氯芬酸钠原料主要用于生产双氯芬酸钠肠溶片、双氯芬酸钠栓、双氯芬酸钠搽剂和滴眼液等，用于解热镇痛、非甾体抗炎药[1]。在《中国药典》2015年版二部中采用电位滴定的方法进行含量检测。本研究在参考《中国药典》2015年版二部和相关文献的基础上[2-4]，采用高效液相色谱法检查双氯芬酸钠的含量。方法具有专属性强、重复性好、灵敏度高、结果准确可靠等特点。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1260型高效液相色谱仪(安捷伦化学工作站、可变波长紫外检测器)；Mettler Toledo MS204S 电子天平。

1.2 试剂

双氯芬酸钠对照品(中国食品药品检定研究院 批号100334-200302)，双氯芬酸钠样品(宁波斯迈克药业有限公司生产，批号分别为DOSR-1703031、DOSR-1705011、DOSR-1707016)、甲醇(国药集团化学试剂有限公司，色谱纯)，冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)，水为高纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为安捷伦C18(4.6mm×250mm，5μm)；以甲醇-4%冰醋酸溶液(70：30)为流动相；检测波长：276nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃。双氯芬酸钠对照峰的理论板数为7965，主峰与杂质分离良好，分离度为2.5，拖尾因子小于1.5。色谱图见图1。

图1 双氯芬酸钠色谱图

2.2 溶液的配制

对照溶液的配制

双氯芬酸钠对照溶液；精密称取双氯芬酸钠对照品20mg，置50mL量瓶中，加70%甲醇溶解，稀释至刻度；取10mL,置20mL量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度。

供试品溶液的配制

双氯芬酸钠供试品溶液；精密称取双氯芬酸钠20mg，置50mL量瓶中，加70%甲醇溶解，稀释至刻度；取10mL,置20mL量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度。

2.3 线性关系考察

取双氯芬酸钠对照品适量，精密称定，加70%甲醇溶解并分别制成浓度为0.30、0.25、0.20、0.10、0.05和0.02mg/mL的溶液。精密量取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以双氯芬酸钠的峰面积为纵坐标(Y)，以双氯芬酸钠的量(μg)为横坐标(X)，进行线性回归，得回归方程：Y=5.0647×103X-2.2667 r=0.9999表明双氯芬酸钠在20～300μg范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取双氯芬酸钠对照品溶液10μL，在上述的色谱条件下，连续进样6次，记录色谱图，所得峰面积的平均值4082.5，RSD为0.2%。表明本方法测定双氯芬酸钠含量精密度良好。

2.5 重复性试验

取双氯芬酸钠样品6份(批号：DOSR-1703031)，按上述方法分析，计算双氯芬酸钠的平均含量为99.6%，RSD为0.3%，表明本方法测定双氯芬酸钠含量重复性良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取双氯芬酸钠对照品溶液10μL，分别于0、1、2、4、6、8、12h，注入液相色谱仪，记录色谱图，所得峰面积的平均值为4078.9，RSD为0.3%。表明双氯芬酸钠对照品溶液在12h内稳定性良好。

2.6 定量限试验

精密称取双氯芬酸钠对照品，加70%甲醇制成0.25mg·mL-1的溶液。精密吸取该溶液10μL，注入液相色谱仪中，按S/N=10计算，双氯芬酸钠定量限约为0.19μg(n=3)。

2.7 回收率试验

取双氯芬酸钠对照品适量、精密称定，按“2.2”项下供试品溶液的配制方法操作，制成低、中、高三种浓度(相当于供试品溶液浓度的80%、100%和120%)的样品溶液，每个浓度3份，共9份。按照含量测定项下的方法，进样10μL，计算回收率，平均回收率为98.66%，RSD为0.87%(n=9)。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

表1(续)

2.8 含量测定

取本品，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液及对照品溶液，分别进样测定。采用外标法计算双氯芬酸钠的含量，结果见表2。

表2 双氯芬酸钠含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 吸收波长选择

使用DAD检测器对双氯芬酸钠对照溶液进行光谱扫描，在276nm波长处有最大吸收，参考有关文献，确定双氯芬酸钠的测定波长为276nm。

3.2 流动相的选择

分别比较《中国药典》2015年版双氯芬酸钠有关物质项下的流动相甲醇-4%冰醋酸溶液(65：35)和本试验流动相以甲醇-4%冰醋酸溶液(70：30)，结果显示，在后者色谱图中测定成分峰形良好、且目标色谱峰干扰峰分离度好，保留时间适中，均可达基线分离，可作为该原料HPLC含量测定方法的流动相。

3.3 耐用性试验考察

分别采用不同品牌色谱柱：(1)Agilent C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；(2)Zorbax SB C18(4.6mm×250mm，5μm)；(3)SUNTEK C18(4.6mm×250mm，5μm)进行试验，三者色谱峰形均分离良好，含量测定结果基本一致，表明该方法耐用性良好，比较择优后选择Agilent C18柱作为系统条件色谱柱。

[1] 中国药典委员会.中国药典二部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：99-102.

[2] 张媛媛，马雯雯.HPLC法测定双氯芬酸钠滴眼液中苯扎氯铵的含量[J].黑龙江科技信息2010(11)：181-182.

[3] 杨 直，林丽琴，吴好好.胶束毛细管电泳同时测定双氯芬酸钠注射液的含量及有关物质[J].药物分析杂志，2013(2)：312-316.

[4] 刘福艳，李 军，谢元超，等.中成药中非添加化学药品的现状与分析检测对策[J].中国药事，2008，22(12)：1067-1069.

DeterminationofDiclofenacSodiumbyHPLC

WangLiuguo,ZhaoXilian,TianJing,LiuXuewei

( Henan Topfond Pharmaceutical Co., Ltd.，Zhumadian 463000,China)

Objective to develop an HPLC method for the Determination of Diclofenac Sodium.Methods C18 column(4.6mm×250mm，5μm)was adopted with Methanol-4% Aceticacid (70:30) as the mobile phase. The detection wavelength was 276 nm and the column temperature was set at 30℃. Results Within the range from 20μg to 300μg (r=0.9999),diclofenac sodium presented a good relationship between the injected amounts and peak areas, with the minimum detectable amount of 0.19ug. The average recovery was 98.66%, with the RSD of 0.87%. Conclusion The method is simple, rapid, accurate, sensitive and reproducible. It can be used for the contents determination of diclofenan sodium.

diclofenan sodium;HPLC determination;contents determination

2017-09-27

王留国(1984—)，河南驻马店人，工程师，主要从事质量管理与研究。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)22-0074-01

(本文文献格式：王留国，赵喜莲，田靖，等.双氯芬酸钠含量的HPLC测定法[J].山东化工，2017，46(22)：74,76.)