感染性标本涂片镜检与分离培养相关性研究

王 静

（江苏省邳州市中医院检验科，江苏 徐州 221300）

·临床交流·

感染性标本涂片镜检与分离培养相关性研究

王 静

（江苏省邳州市中医院检验科，江苏 徐州 221300）

目的探讨感染性标本的涂片镜检和分离培养的相关性。方法 应用接种环无菌操作选取各个菌种不同稀释度的菌液一环进行涂片，显微镜油镜下对每张涂片进行观察，对检出情况进行记录，计算阳性的检出率。通过无菌吸管选取0.1毫升各菌种不同稀释度菌液，进行分别划线，接种在沙保罗琼脂平板或者是营养琼脂平板，24小时后计算菌落数。结果 经过涂片染色的镜检可以获取阳性的结果，金黄色葡萄球菌检出率相对较高。经过分离培养可以获取阳性的结果。结论 在较低浓度念珠菌或细菌感染标本分离培养中，需要按照患者临床的症状或其他检查的情况考虑实施多次病原体的分离培养，防止发生漏诊的情况，为临床诊治提供参考。

感染性标本；涂片镜检；分离培养；相关性

标本直接涂片的染色镜检与接种培养基的分离培养在临床上有着重要作用，属于真菌感染或是细菌感染疾病病原学的诊断方式。因为直接涂片的镜检主要优势是早期检验快速与简便等，所以在结核的分枝杆菌中有着广泛应用，然而，直接涂片的镜检对于非抗酸性真菌感染或是细菌感染标本诊断价值与接种培养基的培育是否有相关性，报道比较少[1]。对此，本文深入研究了感染性标本的涂片镜检和分离培养的相关性，现作以下陈述。

1 资料与方法

1.1 菌种

大肠埃希菌（E.coii，ATCC25922）与金黄色葡萄球菌（S.aureus，ATCC261125）均通过中国药品生物制品检定提供，白色念珠菌（C. aibicans）是本室保存的菌种。应用比浊方法把各菌种配制为3×109/mL浓度菌液，然后添加无菌的生理盐水使其变成10-9/mL、10-1/mL、10-8/mL、10-2/mL、10-7/mL、10-3/mL、10-6/mL、5×10-3/mL、5×10-5/mL、110-4/mL、0-5/mL与5×10-4/mL稀释度。

1.2 培养基

培养基为营养琼脂，经卫生部上海生物制品研究所提供，根据说明书来配置与倾注平板。而按沙保罗琼脂培养基需要根据相关要求进行配制以及倾注平板，整个培养过程需要严格按照说明书进行。

1.3 关于涂片染色的镜检

应用接种环无菌操作选取各个菌种不同稀释度的菌液一环进行涂片，不同稀释程度涂片为10张，在革兰染色以后，于显微镜油镜下对每张涂片进行观察，一个涂片10个视野，对检出情况进行记录，同时对阳性的检出率进行计算。

1.4 分离的培养

通过无菌吸管选取0.1毫升各菌种不同稀释度菌液，进行分别划线，接种在沙保罗琼脂平板或者是营养琼脂平板。每一个稀释液程度接种三个平板，在温箱中37摄氏度条件下培养，24小时以后对菌落数进行计算。

2 结 果

2.1 分析涂片染色检出率

白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数超过23200/mL时，经过涂片染色的镜检可以获取阳性的结果，如果白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数在23200/mL以内，就无法检出细菌；当菌液稀释度为5×l0-3时，还可以检出部分大肠埃希菌与金黄色葡萄球菌，但是缺乏检出白色念珠菌，其中金黄色葡萄球菌检出率相对较高，见表1。

2.2 分离培养检出率

白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数超过l90/mL 时，经过分离培养都可以获取阳性的结果，如果白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数在l90/mL以内，经过分离培养无法得出大肠埃希菌生长情况；当菌液稀释度为l0-7、l0-8、l0-9时，可以检出部分金黄色葡萄球菌与白色念珠菌，但是无法检出大肠埃希菌，见表2。

表2 分离培养检出率（n，%）

3 讨 论

在淋病与结核病等感染性疾病诊断中，直接涂片的染色镜检为早期快速病原学的诊断常用方式[2]。相关文献中报道，在肺结核的患者痰液标本之中，抗酸性细菌含量在超过5×l04/mL之时，才能够经过涂片染色的镜检检出，但是在真菌感染的标本或是非抗酸性细菌诊断中则比较少用[3]。一般情况下，在尿液或是痰液标本之中，细菌含量在l05/mL以内时，即便应用分离培养方式，也容易出现阴性情况，或是因为污染导致细菌感染检查受到影响[4]。本次研究显示，白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数超过23200/mL时，经过涂片染色的镜检可以获取阳性的结果，如果白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数在23200/mL以内，就无法检出细菌；当菌液稀释度为5×l0-3时，还可以检出部分大肠埃希菌与金黄色葡萄球菌，但是缺乏检出白色念珠菌，其中金黄色葡萄球菌检出率相对较高；白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数超过l90/mL时，经过分离培养都可以获取阳性的结果，如果白色念珠菌、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌菌落数在l90/mL以内，经过分离培养无法得出大肠埃希菌生长情况；当菌液稀释度为l0-7、l0-8、l0-9时，可以检出部分金黄色葡萄球菌与白色念珠菌，但是无法检出大肠埃希菌。

本文研究结果显示涂片染色的镜检在细菌或者是念珠菌菌落数超过23200/mL的标本中比较适用，分离培养在念珠菌或是细菌菌落数超过l90/mL的标本检验中比较适用。分离培养和涂片染色镜检对标本之中念珠菌、细菌检出情况有着不一致性，其可能和所接触标本量、观察方法有着相关性。即便分离培养的方法可以将标本之中病原体检出，但是如果标本之中念珠菌或是细菌数量比较少时，会发生漏诊情况。所以在经过治疗以后或是慢性感染症患者年菌株量比较少标本之中，需要选择至少0.1毫升标本接种的培养基，方便分离培养的方法对病原体进行检查，整个检查过程需要与患者治疗情况、病史相结合，确保检查结果的准确性。

本次研究表明，当不同菌种处于同一培养基上时，所检出或是生长情况存在差异，这种差异容易引起分离培养的漏诊。就算在同一种菌种与同一种浓度下，在经过多次分离的培养以后，所检出细菌数量同样存在着巨大差异。因此，在较低浓度念珠菌或者是细菌感染标本分离培养中，需要按照患者临床的症状或是其他检查的情况考虑实施多次病原体的分离培养，防止发生漏诊的情况，为临床诊治提供参考。

[1]张 肖,朱同华,沈国荣.痰标本分析前涂片镜检的临床价值分析[J].国际检验医学杂志,2016,38(11):1559-1561.

[2]刘 瑜,赵亚玲,滑 鑫.标本涂片镜检与培养结果的关系分析[J].中国继续医学教育,2015,7(16):18-19.

[3]汪林娇,易 薇,赵曙刚.痰标本涂片镜检与细菌培养结果符合性的分[J].中国医药科学,2016,6(19):139-141.

[4]邓 冲.分离培养法与涂片镜检法在诊断女性淋球菌感染的临床应用比较[J].国际检验医学杂志,2013,35(14):1853-1854.

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ISSN.2095-8242.2017.065.12686.02

本文编辑：王雨辰