不同培养基成分对铁皮石斛试管苗快速壮苗的影响

陈振兴

【摘要】以无菌播种取得的铁皮石斛无菌苗作为试验材料，研究MS培养基中添加不同浓度的添加物对铁皮石斛快速壮苗的影响。结果表明以MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L+土豆汁100g/L为培养基壮苗效果显著。

【关键词】铁皮石斛；组织培养；添加物

【中图分类号】S567.239 【文献标识码】B 【文章编号】2095-3089（2017）17-0291-01

铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物，是我国传统的名贵中药材，具有益胃生津、滋阴清热之功效。现代药理表明石斛具有抗肿瘤、抗衰老、增强免疫力等功能。由于铁皮石斛生长环境要求苛刻。

自然条件下种子需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培，加上长期过度开采，致使野生铁皮石斛濒临灭绝[1]。根据本实验室情况，结合不同激素和不同的添加物对对铁皮石斛试管苗快速壮苗的影响，拟研究10种不同培养基对铁皮石斛试管苗快速壮苗的影响，试图找出最适合铁皮石斛试管苗快速壮苗的培养基，有利于实验室提高皮石斛快速繁殖的质量和效率，确保铁皮石斛资源的保持，为大规模育苗做准备。

一、材料与方法

1.试验材料

组培苗为实验室铁皮石斛蒴果，经无菌播种萌发的70d的试管苗。种子培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L。

2.试验方法

（1）按照以下组别配制不同培养基配方。原料土豆汁经过去皮处理，苹果未去皮。

（2）接种与培养选取长势一致且由同一株铁皮石斛的蒴果繁殖的生长状况良好的石斛接种到培养基上培养，每种培养基20瓶。培养室培养条件为：温度22（±2）℃，光照10h/d，光照强度2000lx。培养20d，60d观察结果。

二、结果与分析

1.铁皮石斛在培养基上生长情况如下表。

2.不同激素比例对石斛生长的影响

本文僅研究了添加NAA0.2mg/L和NAA0.5mg/L的培养基对比。实验结果表明添加NAA0.5mg/L的情况下，20d和60d的苗整齐，叶色绿，生长情况均优于NAA0.2mg/L。

3.不同添加物培养基成分对石斛生长的影响

添加1/2MS和MS在20d，苗的生长状况一致，均为生长较快，苗整齐，叶色绿；60d苗在添加MS的培养基比1/2MS的培养基，生长更快，苗更整齐，叶色更绿。苗在添加蔗糖20g/L和蔗糖30g/L的培养基上20d和60d的生长情况无教明显差异。苗在添加土豆汁100g/L和苹果汁100g/L的培养基中生长情况均较好，且添加土豆汁的苗生长情况更优于添加苹果汁的。

三、结论与讨论

结果表明以MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L+土豆汁100g/L为培养基壮苗效果显著。初步得到了一套铁皮石斛组织培养育苗的技术方法，利用此方法生产出的组培苗速度快、质量好。

从文献报道可知，在生根培养基中通常加入土豆汁[2]可促进生根壮。在培养基中加入一些天然有机物，如椰汁、苹果汁、土豆汁等，能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，对铁皮石斛原球茎的增殖和分化有促进作用[3-4]。蔗糖浓度以3%为分化的临界值，蔗糖2%为原球茎分化的适宜浓度[5]，但这个两个浓度的差异对本实验中壮苗效果影响不明显。本研究中的培养基都加入0.5g/L的活性炭，在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附植物代谢过程中产生的有害物质，防止褐变，减少对植物生长的影响[6]，对形态发生和器官形成有良好作用。

接种过程需对无菌接种室进行严格的灭菌消毒操作。组培室定期需用不的消毒方法进行灭菌消毒，防止污染菌产生耐药性大量繁殖切难以消灭。采用甲醛（60～80mL）和高锰酸钾（40～40g）溶液对无菌室进行熏蒸，或喷洒表面消毒剂可有效降低污染。

参考文献

[1]徐红，李晓波，王峥涛，等.海南、广东省石斛属植物资源与种质保护研究[J].中国野生植物资源，1999（5）：24-26.

[2]陈碧华，张娟，范辉华，等，湖北林业科技[J]，2013.42（5）：78-80.

[3]侯丕勇，郭顺星.悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上生长和分化的研究[J].中国中药杂志，2005，30（10）：729-732.

[4]唐桂香，黄福灯，周伟军.铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究[J].中国中药杂志，2005，30（20）：1583-1585.

[5]陆兵.铁皮石斛组织培养研究进展[J].黑龙江农业科学，2009.14（2）：164-167.

[6]王和飞，梁柳，林应耀.石斛兰快繁技术研究[J].琼州大学学报，2007，14（2）：32-34.