杭州地区老年汉族人群CYP2C19基因多态性分析

樊丹君 王晏雯 陈进 吕远栋 李晨怡 叶子青 陈童

杭州地区老年汉族人群CYP2C19基因多态性分析

樊丹君 王晏雯 陈进 吕远栋 李晨怡 叶子青 陈童

目的 探讨杭州地区老年汉族人群CYP2C19基因多态性分布，从而为临床制定个体化用药方案提供参考。方法选取杭州地区老年汉族人群764名，采用基因芯片技术检测CYP2C19基因。结果 共检测到6个基因型，CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3，基因频数分别为 45.03%、33.51%、8.11%、8.77%、4.32%、0.26%。快代谢型（CYP2C19*1*1）占 45.03%，中间代谢型（CYP2C19*1*2、*1*3）占41.62%，慢代谢型（CYP2C19*2*2、*2*3、*3*3）占13.35%。该结果与国内其他地区汉族人群差异无统计学意义（P＞0.05），且不同性别的各代谢型基因型频率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 杭州地区老年汉族人群CYP2C19基因分布与国内其他地区汉族人群类似，性别与CYP2C19基因遗传多态性无相关性。

CYP2C19 基因多态性 老年人

细胞色素p450（cytochrome p450）是一种以血红素为辅基的b族细胞色素家族蛋白酶，因与一氧化碳的结合物在波长450nm处有一最大吸收峰而得名。在p450家族中，其中3种酶作用最强，分别是CYP1、CYP2、CYP3。CYP2亚家族CYP2C19亚型对药物代谢起着关键性作用，其基因遗传多态性导致不同地区、不同人种、不同个体之间编码的CYP2C19酶代谢能力的差异。根据药物代谢能力可分为快代谢型（CYP2C19*1*1）、中间代谢型（CYP2C19*1*2、*1*3）、慢代谢型（CYP2C19*2*2、*2*3、*3*3）。本文通过对杭州地区老年汉族人群CYP2C19基因型的检测，了解该基因多态性分布情况，进而判断患者药物代谢类型，从而为杭州地区老年汉族人群临床制定个体化用药方案提供参考，减少不良事件的发生。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2016年1月在本院行CYP2C19基因检测且年龄＞65岁的汉族人群764名，其中男 542 名，女 222 名，年龄 65～102（83.75±5.12）岁。均为杭州当地居民，无血缘关系。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器 采用上海百傲科技有限公司生产的试剂盒 [包括样本DNA的制备、聚合酶链式反应

（PCR）扩增、杂交显色]，仪器：Baio BR-526-24 全自动杂交仪、Baio生物芯片识读仪、PCR扩增仪C1000 ThermalCycler、EppendorfCentrifuge5418、Eppendorf Centrifuge 5415R。

1.2.2 样本采集和DNA提取 采取研究对象外周静脉血2ml，EDTA抗凝，按血液基因组DNA提取试剂盒使用说明书提取和纯化DNA。

1.2.3 PCR扩增 将CYP2C19扩增液1、2分别分装到无菌的 0.2ml薄壁管中，每管 19μl，分别加1μl反应液A、5μl提取好的样本DNA溶液，混匀瞬时离心，将各管放入PCR扩增仪中，按下列条件扩增：50℃、5min，94℃、5min，94℃、25s，48℃、40s，72℃、30s，35 个循环；72℃、5min。4℃保存。

1.2.4 杂交显色 取出Baio杂交显示试剂盒，将反应试管条拿出（其中预杂交液、洗液1、洗液2、洗液3已经预加在反应试管条的各自试管杯中），反应液B低速离心，吸取10μl加入杂交缓冲瓶混匀；吸取180μl杂交缓冲液，加入10μl PCR扩增产物1和10μl扩增产物2混匀，加入到反应试管条的预杂交液试管中；取出抗体，按1:1管的比例，加抗体稀释剂，振荡混匀，制成抗体使用液，吸取200μl的抗体使用液到反应试管条的抗体试管杯中，再加200μl显色液到反应试管条的显色试管杯中。将反应试管条放入杂交仪中，运行杂交程序。反应结束，取出基因芯片。将芯片放入生物芯片识读仪，用Baio基因芯片图像分析软件V2.0进行图像扫描和数据分析，输出检测结果。

1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件。按Hardy-Weinberg平衡定律计算各等位基因频率，并将所获数据作拟优合度的χ2检验，验证数据的可靠性。计量资料以表示；计数资料以百分率表示，不同人群间的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 杭州地区老年汉族人群CYP2C19基因型频数分布 杭州地区汉族老年人群CYP2C19基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡（χ2=5.282，P ＞0.05），提示入选对象具有群体代表性。其中男性CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3 分 别 为 45.20% 、33.03% 、8.67%、8.12%、4.61%、0.37%，女性各基因型则为44.60%、34.68%、6.76%、10.36%、3.60%、0。不同性别基因型频数虽有差别，但差异无统计学意义（χ2=2.947，P＞0.05）。详见表1。

表1 杭州地区老年汉族人群CYP2C19基因型频数分布[例（%）]

2.2 杭州地区老年汉族人群CYP2C19代谢型结果杭州地区老年汉族男性快代谢型、中间代谢型、慢代谢型分别为45.20%、41.70%、13.10%，女性则为44.60%、41.44%、13.96%。不同性别间基因代谢型的构成比差异无统计学意义（χ2=0.104，P＞0.05）。详见表2。

表2 杭州地区老年汉族人群CYP2C19代谢型结果[例（%）]

2.3 不同地区汉族人群CYP2C19代谢型结果 杭州地区老年汉族人群CYP2C19代谢型构成比与文献报道的我国其他地区汉族人群类似[1-2]（χ2=2.437，P＞0.05）。详见表3。

表3 不同地区汉族人群CYP2C19代谢型结果[例（%）]

3 讨论

药物基因组学是从基因水平研究基因序列的多态性与药物效应多样性之间的关系，研究基因突变及其突变体对不同个体药物作用效应差异的影响，并以此指导药物研发和合理用药，而药物基因组、蛋白组学的发展，有利于推动现代医学从循证医学时代进入精准医学时代[3]。

CYP2C19基因是近几年研究比较热门的药物基因之一，定位于人类10号染色体q24，1-q24.3区，包含9个外显子和5个内含子，其编码的490个氨基酸位于肝脏微粒体中。CYP2C19参与多种外源性物质的代谢，如药物、乙醇、环境污染物等，药物谱大致可分为氯吡格雷、第一代质子泵抑制剂、三环类抗抑郁药、抗癫痫药、伏立康唑等。CYP2C19基因突变多样性决定表型多样性。等位基因突变使酶活性降低，对药物的代谢能力有所下降，从而影响治疗效果。

目前已有不少文献报道不同国家、不同种族、不同地区的CYP2C19基因多态性分布，但关于杭州地区老年汉族人群的研究不多。本研究中764名杭州地区老年汉族受试者，共检测六个基因型CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3， 分 别 为 45.03% 、33.51% 、8.11%、8.77%、4.32%、0.26%，与周健等[2]报道的北京地区汉族人群一致。本研究中，男性CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因频率为26.94%和7.01%，女性CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因频率为29.50%和5.18%，两者差异无统计学意义；且无论是快代谢型、中间代谢型、慢代谢型，男性（45.20%、41.70%、13.10%）与女性（44.60%、41.44%、13.96%）的差异均不明显，表明性别对杭州地区老年汉族人群CYP2C19遗传多态性影响无差异，与胡祥鹏等[4]报道类似。本研究还提示，杭州老年汉族快代谢型45.03%略高于重庆（37.6%）和北京（42.40%），中间代谢型低于重庆（46.58%）和北京（45.23%）[1-2]，但差异均无统计学意义，说明中国汉族人群CYP2C19基因多态性在各地区差异不明显。

老年人是心血管系统、消化系统等疾病的高发人群。多项研究表明，CYP2C19基因多态性与冠心病常用药物氯吡格雷的代谢密切相关，携带CYP2C19*2和（或）CYP2C19*3的人群肝脏代谢氯吡格雷的能力减弱，血中有效代谢产物的浓度较非携带者低1/3，因此临床上发现携带CYP2C19*2和（或）CYP2C19*3的冠心病患者在接受氯吡格雷期间较快代谢型更易出现卒中、心肌梗死及死亡风险[5-8]。2010年美国食品药品管理局发出警告，要求对需氯吡格雷治疗的患者进行基因检测，对于携带CYP2C19*2和（或）*3的患者，建议服用其它抗血小板药物或加大氯吡格雷的剂量。张鹏博等[9]给予急性冠状动脉综合征PCI术后中间代谢型患者氯吡格雷治疗，常规剂量组再发心绞痛及总的主要不良心血管事件发生率均高于对照组，而双倍剂量组与对照组相仿，对于中间代谢型，加大氯吡格雷剂量其血小板抑制水平与快代谢型相当，同时不增加出血风险。CYP2C19基因多态性亦影响质子泵抑制剂如奥美拉唑的代谢。奥美拉唑体内依赖p450酶代谢，CYP2C19基因快代谢者血药浓度较低，达不到预期效果，因此对于快代谢者可选用其它质子泵抑制剂或加大奥美拉唑的剂量[10]。如果条件允许，临床上可通过基因芯片检测CYP2C19基因型，参考检测结果进行治疗用药的选择和剂量的增减，有利于提高用药的安全性与有效性，避免不良反应，减少药物治疗的费用和风险，为实现个体化医疗提供技术支持。

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Analysis of CYP2C19 genetic polymorphisms in elderly Han population from Hangzhou region

FAN Danjun,WANG Yanwen,CHEN Jin,et al.Department of Medical Care for Cadres,Zhejiang Hospital,Hangzhou 310013,China

Objective To investigate the CYP2C19 polymorphisms in elderly Han population from Hangzhou region.Methods The CYP2C19 genotypes were detected by using gene chip in 764 elderly Han people from Hangzhou region. Results The frequencies of CYP2C19*1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3 and*3/*3 were 45.03%,33.51%,8.11%,8.77%,4.32%and 0.26%,respectively.According to the metabolic phenotype,the frequencies of extensive metabolizer genotype (CYP2C19*1*1),intermediate metabolizer genotype (CYP2C19*1*2 and*1*3)and poor metabolizer genotype(CYP2C19*2*2,*2*3 and*3*3)were 45.03%,41.62%and 13.35%,respectively.The distribution of metabolic genotypes in Han Chinese revealed in this study were similar to those in other regions in China(P＞0.05).There was no significant difference in CYP2C19 gene polymorphisms between males and females(P＞0.05). Conclusion There was no significant difference in CYP2C19 genetic polymorphisms between Han Chinese population in Hangzhou and other regions,and also no difference between different genders.

CYP2C19 Genetic polymorphism Aged

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.22.2016-2047

浙江省医药卫生科技项目（2012KYB002）

310013 杭州，浙江医院干部保健科（樊丹君、陈进、李晨怡、叶子青、陈童），神经内科（王晏雯），老年病研究所（吕远栋）

樊丹君，E-mail：fandj2008@163.com

2017-04-20）

马雯娜）