河北地区汉族人群KIR基因多态性研究

赵佳 苏蔓 何路军 戚海 李茵 胡光磊 王远花 钱明明 李醒 张蓓 王振雷

河北地区汉族人群KIR基因多态性研究

赵佳 苏蔓 何路军 戚海 李茵 胡光磊 王远花 钱明明 李醒 张蓓 王振雷

目的 调查河北地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）的基因频率分布情况。方法 收集河北地区无血缘关系汉族人群血液样本288份，采用PCR-SSP法检测KIR基因型，统计基因频率。结果 河北地区汉族人群中KIR框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1的基因频率均为100.00%，2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的频率较高，均＞92.00%，而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的频率则较低；在河北汉族人群中共发现51种组合型，KIR组合型2DL4+3DP1+3 DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4所占比例最大，约为43.75%。结论 河北汉族人群中KIR基因频率与其他亚洲人群相似，不同于其他民族。KIR组合型2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4所占比例最大。

杀伤细胞免疫球蛋白受体 基因频率 基因多态性

杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer cell immunoglobulin-like receptors，KIR）是自然杀伤细胞（natural killer cell，NK细胞）和某些T细胞表面表达的一组蛋白受体，可通过与人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）-I类分子特异性结合，调节NK细胞的活性[1-4]。KIR及其HLA配体均具有丰富的多态性，在异基因造血干细胞移植中，当供受者KIR和HLA分子不匹配，供者的NK细胞被激活，从而开启对靶细胞的杀伤作用，发生移植物抗宿主病（graft-versushost disease，GVHD），不利于移植预后[5]。国外

研究表明，移植后无排斥反应的个体KIR2DL2、KIR2DS2频率明显增高，而移植后发生急性排斥反应的个体KIR2DL1的频率明显降低[6]。目前，国内有关KIR基因的研究还较少，现将河北骨髓库汉族人群KIR基因频率的分布情况报告如下。

材料与方法

1 标本来源 288例河北籍汉族无血缘关系志愿者，在征得其知情同意后采集EDTA抗凝血5 ml。2 DNA提取 采用TIANGEN离心柱型血液基因组DNA提取试剂盒（批号N2801）提取DNA，DNA纯度OD260/OD280比值为1.7～1.9，PCR扩增前调整浓度至（30～70） ng/μl。

3 KIR基因分型 参照文献［7］合成KIR引物序列，采用聚合酶链式反应–序列特异性引物扩增（polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP）检测KIR基因。PCR反应体系为DNA 1.6 μl，10×Taq Buffer 2 μl，MgCl21.6 μl，dNTP 1.6 μl，DRA-F 0.3 μl，DRA-R 0.3 μl，相应正向、反向引物各1 μl，Taq聚合酶1 μl，灭菌注射用水9.6 μl。

4 统计学处理 KIR基因频率采用基因直接计数法计算，与国内外其他地区人群KIR基因频率的比较采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 河北汉族人群KIR基因分布 288例河北地区汉族人群标本中已知的16个KIR 基因型的分布见表1。KIR框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1的基因频率均为100.00%，2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的频率较高，均＞92.00%，而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的频率则较低。

2 河北汉族人群KIR基因分布与其他地区、其他种族人群的比较结果见表2。河北地区汉族人群与其他亚洲人群的KIR基因频率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；而与其他民族的KIR基因频率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

3 河北汉族人群KIR基因组合型分布 河北地区汉族人群的KIR基因组合形式及所占比例见表3。51种组合型中，KIR2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL 1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4组合形式的人数最多（占43.75%）。

表1 河北地区汉族造血干细胞捐献者KIR基因分布（n=288）

表2 河北地区汉族人群与其他人群KIR基因频率比较

表3 河北汉族人群KIR基因组合型分布情况（n=288）

讨 论

正常情况下，表达于NK细胞和某些T细胞表面的KIR可通过与HLA-I类分子特异性结合，传导抑制性信号，从而阻止对自身细胞的杀伤作用。但在病理情况下，如肿瘤、感染、移植后等，靶细胞表面的HLA表达异常或不表达，导致KIR配体缺失，NK细胞无法识别自身，同时对自身细胞的抑制作用减弱，导致NK细胞激活并杀伤靶细胞[8]。已证实，KIR分子与靶细胞的HLA-I类分子特异性识别后发挥作用，参与移植物抗宿主病的发生且影响移植物抗白血病（graft-versusleukemia，GVL）的作用，从而造成器官移植效果的差异[5]。叶苑等[9]利用小鼠模型对移植后GVHD的发生进行了研究，发现KIR/HLA在人体固有免疫和获得性免疫系统中发挥重要作用[10]。

KIR的多态性主要反映在群体中不同个体等位基因的拥有状态不同，且不同人群、种族、地区的遗传背景迥异，因此个体免疫应答的能力及对疾病的易感度也出现差别。本研究分析288例河北地区汉族人群KIR基因分布，发现框架基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1几乎存在于所有个体中，2DL1、2DL3、3DL1、2DS4、2DP1的频率较高，均＞92.00%，而2DL2、2DS2、2DS3、2DS5的频率则较低。河北汉族人群KIR基因分布在亚洲人群中十分相似，与韩国人、日本人的KIR基因分布差异无统计学意义；但各民族之间的差异有统计学意义，如与新疆维吾尔族人、南非圣族人的KIR基因分布比较有明显差异。

目前国内有关KIR基因研究的报道较少，对河北汉族人群KIR基因多态性的研究有助于解决移植后出现排斥反应的难题，可以根据基因频率分布预测不同地区、种族间移植免疫的发生概率；同时对于丰富人类KIR基因的结构和功能的多样性，了解不同地区、不同种族间KIR不同种类和数量的变化，以及弄清河北汉族的历史定居和迁徙也具有一定的意义。

1 颜卫华.NK细胞受体研究进展[J].国外医学免疫学分册，2002，25（4）：191-194.

2 Moretta A，Bottino C，Mingari M C，et al.What is a natural killer cell [J].Nat Immunol，2002，3（1）：6-8.

3 Lanier L L.NK cell receptors [J].Annual Rev Immunol，1998，（16）：359-393.

4 Williams A P，Bateman A R，Khakoo S I.Hanging in the balance KIR and their role in disease [J].Mol Interv，2005，5（4）：226-240.

5 Khakoo S I，Carrington M.KIR and disease：a model system or systerm of models [J].Immunol Rev，2006，214（1）：186-201.

6 Kunert K，Seiler M，Mashreghi M F.et al.KIR/HLA ligand in cornpatibility in kidney transplantation[J].Transplantation，2007，84 （11）：1527-1533.

7 Martin M P，Carrington M. KIR locus polymorphisms：genotyping and disease association analysis [J].Methods Mol Biol，2008，415：49-64.

8 Carrington M，Martin M P.The impact of variation at the KIR gene cluster on human disease [J].Curr Top Microbiol Immunol，2006，298：225-257.

9 叶苑，李志强.移植物抗宿主病小鼠模型研究进展[J].临床输血与检验，2016，18（2）：197-200.

10 Kulkarni S，Martin M P，Carrington M.The Yin and Yang of HLA and KIR in human disease [J].Semin Immunol，2008，20（6）：343-352.

11 苏品璨，杨通汉，邹海，等．云南汉族人群KIR基因多态性研究[J]．中国输血杂志，2008，21（4）：268-272.

12 Middleton D，Meenagh A，Moscoso J，et al．Killer immun obulinreceptor gene and allele frequencies in Caucasoid，oriental andblack populations from diferent continents．Tissue Anti gens， 2008，71（2）：105-113.

Analysis Polymorphisms of KIR Ligands in Hebei Han Population

ZHAO Jia，SU Man，HE Lu-jun，et al. Hebei Blood Center，Shijiazhuang，Hebei050071

Objective To analyze the gene frequency of killer cell immunoglobulin-like receptor （KIR） in Hebei Han population．Methods The blood samples of 288 unrelated Hebei Han individuals were genotyped by PCRSSP method and gene frequency was analyzed. Results Among the Hebei Han population，framework gene KIR 2DL4，3DL2，3DL3 and 3DP1 was found in all samples，2DL1，2DL3，3DL1，2DS4，2DP1 presented very high frequencies and genes 2DL2，2DS2，2DS3，2DS5 presented low frequencies．A total of 51 KIR genotypes were identified，in which the genotype 2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4 were predominant，with frequencies of 43.75%.Conclusion The gene frequencies of KIR in Hebei Han population were similar to other Asian countries but significant differences with other national minority. The genotype 2DL4+3DP1+3DL2+3DL3+2DL1+2DL3+2DP1+3DL1+2DS4 was predominant．

KIR Gene frequencies Gene polymorphism

R457.7 R392.4

A

1671-2587（2017）06-0566-04

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.06.011

050071 石家庄，河北省血液中心

赵佳（1987–），女，河北石家庄人，主管技师，硕士，主要从事免疫学检验及HLA分型工作，（Tel）0311-87826911（E-mail）1262159189@qq.com。

王振雷，男，副主任技师，学士，（Tel）0311-87820544（E-mail）lei123456789101112@sina.com。

2017-02-20）

（本文编辑：王虹）