鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素耐药机制研究〔1〕

李小玉，罗一钧

(赣州市第五人民医院，江西 赣州 341000)

鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素耐药机制研究〔1〕

李小玉，罗一钧

(赣州市第五人民医院，江西 赣州 341000)

目的：探讨鲍曼不动杆菌(CRAB)耐碳青霉烯类抗生素的机制，为临床选择抗生素提供合理意见，同时为新药开发提供参考。方法：采用琼脂纸片扩散法(K-B法)及聚合酶链反应(PCR)法从78株广泛耐药鲍曼不动杆菌中筛选出8株仅对多黏菌素敏感、1株全敏感的临床株。采用PAβN外排泵抑制试验检测其外排泵表型。PCR扩增耐药基因，并对阳性产物进行双向测序分析，确定其基因型。结果：CRAB的耐药性非常严重，对12种抗菌药物中的9种均耐药(耐药率>90%)，其中对哌拉西林、头孢他啶、哌拉西林-他唑巴坦和美洛培南的耐药率均为100.0%。结论：鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素具有较高的耐药性，应加强对该类抗菌药使用的监控。

膜蛋白；鲍曼不动杆菌；耐碳青霉烯类抗生素；机制

鲍曼不动杆菌(CRAB)是不动杆菌属中最常见的一种革兰阴性球杆菌，该菌广泛分布于医院，是一种重要的机会病原菌，能引起一系列院内感染，如菌血症、尿路感染、继发性脑膜炎、手术部位感染及呼吸机相关性肺炎等，严重威胁患者生命，尤以ICU病房感染率和病死率最高[1]。由于抗生素的广泛应用，造成对耐药菌的筛选，使得近年来多重耐药鲍曼不动杆菌的感染日趋增多，现阶段鲍曼不动杆菌碳青霉烯类耐药正成为临床微生物领域的研究热点[2]。旨在探讨鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素的机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院2014年12月—2016年2月临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌78株，去除同一患者相同部位重复分离株。

1.2 方法

采用琼脂纸片扩散法(K-B法)及聚合酶链反应(PCR)法从78株广泛耐药鲍曼不动杆菌中筛选出8株仅对多黏菌素敏感、1株全敏感的临床株。采用PAβN外排泵抑制试验检测其外排泵表型。采用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因blaKPC、blaOXA及ESBLs基因blaTEM、blaCTX-M、blaSHV、blaOXA，DNA模板采用加热煮沸法制备，并对阳性产物进行双向测序分析，确定其基因型。

2 结 果

2.1 药敏试验结果 CRAB的耐药性非常严重，对12种抗菌药物中的9种均耐药(耐药率>90%)，其中对哌拉西林、头孢他啶、哌拉西林-他唑巴坦和美洛培南的耐药率均为100.0%，耐药率最低者为头孢哌酮-舒巴坦(43.6%)(见表1)。

2.2 PCR检测结果

在78株CRAB中随机选取9株耐药株(1株adeB基因阴性除外)，以及3株敏感株进行PCR。9株耐药株和3株敏感株均检测到adeB基因的预期扩增产物，其灰度值以内参基因recA扩增片段为100%对照，经凝胶扫描半定量检测分析，两者的adeB相对表达水平几乎没有差异(见图1)。

图1 鲍曼不动杆菌部分菌株ADEB基因的PCR扩增结果

3 讨 论

鲍曼不动杆菌已成为院内感染最常见的致病菌种，尤其是在ICU病房内常引起与呼吸器有关的肺炎及菌血症。由于此菌的抗药性快速增加，已产生了多重抗药性菌株及全抗药性菌株，出现临床上无药可用的窘境。本研究旨在探讨在没有抗生素的压力之下，抗药性鲍曼不动杆菌是否能改变其抗药性[3]。

表1 78株CRAB对12种抗菌药物的耐药和敏感情况

鲍曼不动杆菌是一种比较容易产生抗药性倾向的菌种，再加上抗生素的广泛使用，更易演变成多重抗药性菌种，成为近年来急速跃升成为院内感染最重要的致病菌之一。临床研究报道，鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要机制为碳青霉烯类水解酶的产生，多伴随外膜通道蛋白表达的下调及细菌膜上主动外排泵过度表达，降低了青霉素与蛋白结合的亲和力。其耐药最常见机制为产生水解碳青霉烯类β-内酰胺酶[4]。耐生存、易抗药、喜潮湿的特性，使得鲍曼不动杆菌成为ICU病房特别重要的致病菌，且随着ICU病房侵入性诊断及治疗的发展以及抗生素、免疫抑制剂等药物的滥用，鲍曼不动杆菌成为院内感染性肺炎及菌血症的主要致病菌[5]。耐药节结化细胞分化家族(RND)在革兰阴性菌耐药性中扮演着重要角色，利用位于革兰阴性菌细胞质膜上的质子驱动力作为能量来源，与周质间的膜融合蛋白和外膜蛋白作用，形成连续的三通道，将物质直接运出到细胞外。大部分可接合的质体都有可确保接受者已没有相同物质的系统。被转移的遗传信息通常对接受者是有利的，包括抗药性、其他异物耐受性、或使用新的代谢物的能力。这种有利的质体可能被视为细菌的内共生体[6]。一个细菌的DNA通过两细菌间形成的特殊蛋白质结构，接合菌毛，转移到另一个细菌。当细菌族群在自然环境中，在有抗生素的压力之下，含有抗药基因的细菌容易存活且能传播抗药基因，造成抗药细菌大增。抗药基因常通过质体或跳跃子夹带而传播，可以进入细胞造成抗药性，或离开细胞而不具抗药性。细菌的抗药性族群在感受性菌株存在时会逐渐消失[7]。在抗生素治疗停止之后，抗药菌能持续一段时间。当感受性菌存在时，它们可能重新繁衍个体。在没有药物压力的情况下，感受性细菌比起抗药菌有些微弱的存活优势，因为它们不用耗费能量去维持抗药性基因，一段时间之后，就会击败抗药菌，重新大量繁殖具有敏感性的细菌[8]。

[1]胥松，王小霞，张柏金.重症监护病房多重耐药鲍曼不动杆菌感染的危险因素分析[J].慢性病学杂志，2016(2)：128-130.

[2]周爱春.我院近5年革兰氏阴性杆菌的分布及耐药性变迁[J].社区医学杂志，2016(11)：53-56.

[3]郭湘，费樱.耐碳青霉烯酶类抗生素鲍曼不动杆菌的同源性及其对亚胺培南的耐药机制[J].山东医药，2016(21)：19-21.

[4]潘颖颖，朱熠，庄建文，等.对人工染耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌物体表面消毒效果的研究[J].兵团医学，2016(1)：3-4.

[5]林云万，梁颖茹，贺征，等.某院ICU多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和碳青霉烯酶耐药基因分析[J].实用预防医学，2015(11)：1313-1315.

[6]NOWAK P，PALUCHOWSKA P，BUDAK A.Distribution of blaOXA genes among carbapenem-resistant acinetobacter baumannii nosocomial strains in Poland[J].New Microbiol，2012，35(3)：317-325.

[7]POIREL L，MARQUÉS，HÉRITIER C，et al.OXA-58，a novel class D {beta}-lactamase involved in resistance to carbapenems in Acinetobacter baumannii[J].Antimicrob Agents Chemother，2005，49(1)：202-208.

[8]LIMANSKY A S，MUSSI M A，VIALE A M，et al.Loss of a 29-kilodalton outer membrane protein in acinetobacter baumannii is associated with imipenem resistance[J].J Clin Microbiol，40(12)：4776-4778.

2017-03-14

(本文编辑：王作利)

R516

A

1671-8631(2017)12-0941-02

〔1〕本课题为赣州市指导性科技项目(课题编号：GZ2015ZSF333)

李小玉(1981— )，女，江西省赣州市人，学士学位，主管检验师，主要从事免疫和微生物检验工作。